黄芩苷、青藤碱、吉马酮对THP-1细胞TLR8调节作用研究

发布时间：2020-10-12 02:32

　　 目的:因TLR8是参与抗病毒天然免疫应答和特异性免疫应答反应的重要受体之一,而关于中药对TLR8调节作用机制方面的探索研究甚少。故本课题选择已报道的抗炎抗病毒中药单体:黄芩苷、青藤碱、吉马酮、白花丹醌、没食子酸进行筛选研究。本课题主要目标是初步探讨黄芩苷、青藤碱等中药单体是否能通过调节TLR8发挥免疫作用,将为研究抗炎抗病毒中药的作用机制奠定基础。方法:(1)采用密度梯度离心法分离正常人外周血单个核细胞(PBMC),并以黄芩苷、青藤碱、吉马酮、白花丹醌、没食子酸、R848(TLR7/8刺激剂)分别刺激PBMCs12h和24h,以RT-PCR方法检测TLR8mRNA表达,从中筛选出对TLR8有调节作用的中药单体。(2)通过CCK-8法测定THP-1细胞活力,探讨筛选的黄芩苷、青藤碱、吉马酮对其活力的影响,筛选最佳的浓度范围。(3)荧光定量PCR检测黄芩苷、青藤碱、吉马酮对THP-1细胞和人PBMCs TLR8mRNA表达的差异。ELISA法检测TLR8下游细胞因子ELISA法检测THP-1细胞TLR8下游细胞因子IL-12、IL-6的表达水平。结果:(1)黄芩苷作用12h(P0.05)、吉马酮作用24h(P0.001)对人PBMCs TLR8mRNA表达有上调作用;青藤碱能显著降低R848刺激人PBMCs后的TLR8 mRNA的上调表达。白花丹醌、没食子酸无显著作用(P0.05)。从中筛选出黄芩苷、青藤碱、吉马酮这三种对正常人PBMCsTLR8有调节作用的中药单体。(2)CCK8法实验结果表明,青藤碱、黄芩苷药物浓度为400μmol/L及吉马酮药物浓度维持在200μmol/L以下时对THP-1细胞的活性影响较小。(3)黄芩苷对THP-1细胞、人PBMCs后的TLR8表达有上调作用(P0.05),高剂量时对IL-12、IL-6有下调作用(P0.05);吉马酮对THP-1细胞、人PBMCs后的TLR8、IL-12表达有上调作用(P0.01),高剂量时对IL-6有下调作用(P0.05);青藤碱能显著降低R848刺激THP-1细胞和人PBMCs后的TLR8、IL-12、IL-6的上调表达(P0.01)。结论:青藤碱、黄芩苷、吉马酮对THP-1细胞、人PBMCs TLR8有调节作用。青藤碱能显著降低R848刺激THP-1细胞、人PBMCs后的TLR8上调表达;黄芩苷、吉马酮对THP-1细胞、人PBMCs后的TLR8表达有上调作用,但其同时也影响其他受体如TLR4,TLR4和TLR8共同下游因子IL-6、IL-12等表达降低,说明黄芩苷可能是通过其他途径影响TLR8来参与对人天然免疫能力的调节。吉马酮通过上调THP-1细胞的TLR8表达,进而促进IL-12的分泌及抑制IL-6的分泌,说明吉马酮的抗炎作用可能与其对TLR8表达影响的关系较小。
【学位单位】：广西中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R285
【部分图文】：

图 1 R848、黄芩苷、白花丹醌、没食子酸、青藤碱、吉马酮对正常人 PBMCsTLR8mRNA 表达的影响。A、B：12h TLR8 mRNA 表达量，从左至右分别是黄芩苷、青藤碱+R848、吉马酮、空白组、吉马酮+R848、没食子酸+R848、R848、白花丹醌+R848；C、D：12h TLR8 mRNA 表达量，从左至右分别是没食子酸、白花丹醌、青藤碱；E、F：24h TLR8 mRNA 表达量，从左至右分别是黄芩苷、空白、吉马酮+R848、R848、青藤碱+R848、没食子酸+R848、白花丹醌+R848、吉马酮；G、H：24h TLR8 mRNA 表达量，从左至右分别是白花丹醌、青藤碱、没食子酸（ x ±s,n=3）。

图 2 药物直接干预组 12h、24h 正常人 PBMCsTLR8 mRNA 相对表达量。A：药物直接干预组 12hTLR8 mRNA 相对表达量；B：药物直接干预组 24h TLR8 mRNA 相对表达量；（ x ±s,n=3）。与空白组比，*P<0.05，**P<0.01,***P<0.001C D

21图 3 R848+药物干预组 12h、24h 正常人 PBMCsTLR8 mRNA 相对表达量。C：R848+药物干预组12h TLR8 mRNA 相对表达量；D：R848+药物干预组 24h TLR8 mRNA 相对表达量。（ x ±s,n=3）。与空白组比，*P<0.05，**P<0.01,***P<0.001；与阳性组比，#P<0.05，##P<0.01,###P<0.001
【参考文献】

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本文编号：2837502