甘草苷对UVB诱导HaCaT细胞光老化的保护作用及机制研究

发布时间：2020-10-12 03:44

　　 目的:研究来源于中药甘草中的活性成分甘草苷对中波紫外线(UVB)诱导人皮肤角质形成细胞(HaCaT)光老化的保护作用及其作用机制,为有效成分甘草苷预防和治疗皮肤光老化提供理论依据。方法:1.用不同浓度的甘草苷作用于HaCaT细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖率,筛选出药物的最佳有效安全浓度。2.用30mJ/cm2的UVB照射HaCaT细胞,制备光老化模型,将筛选出的有效安全浓度作用于光老化HaCaT细胞,MTT法测定甘草苷对光老化HaCaT细胞增殖率的影响。3.用试剂盒分别测定甘草苷对光老化HaCaT细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)含量的影响。4.蛋白免疫印记(Western Blot)法检测甘草苷对光老化HaCaT细胞中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸-3(Caspase-3)及半胱氨酸天冬氨酸-9(Caspase-9)蛋白表达量的影响。5.流式细胞术检测甘草苷对光老化HaCaT细胞总凋亡率的影响。6.实时定量PCR(RT-PCR)法检测甘草苷对光老化HaCaT中Bcl-2、Bax、Caspase-3及Caspase-9 mRNA表达水平的影响。结果:1.与空白对照组比较,10-10、10-9、10-8mol/L甘草苷组细胞增殖率显著升高(P0.05,P0.01),可明显促进细胞增殖;10-4、10-3mol/L甘草苷组细胞增殖率显著降低(P0.01),可明显抑制细胞增殖;10-7、10-6、10-5mol/L甘草苷组细胞增殖率无统计学差异(P0.05),对细胞无明显的促增殖与抑制作用,为最佳有效安全浓度。2.与空白对照组比较,UVB组细胞增殖率显著降低(P0.01);与UVB组比较,10-7、10-6、10-5mol/L甘草苷+UVB组细胞增殖率显著升高(P0.01)。3.与空白对照组比较,UVB组SOD、GSH、CAT活性显著降低(P0.01),MDA、ROS 含量显著升高(P0.01);与 UVB 组比较,10-7、l0-6、10-5mo1/L甘草苷+UVB 组 SOD、GSH、CAT 活性明显上升(P0.05,P0.01),MDA、ROS含量显著降低(P0.01)。4.与空白对照组比较,UVB组IL-1β、IL-6和TNF-α蛋白表达量显著升高(P0.01);与 UVB 组比较,10-7、10-6、10-5mol/L 甘草苷+UVB 组 IL-lβ、IL-6和TNF-α蛋白表达量显著降低(P0.05,P0.01)。5.与空白对照组比较,UVB组细胞总凋亡率显著升高(P0.01);与UVB组比较,10-7、10-6、10-5mol/L甘草苷+UVB组细胞总凋亡率显著降低(P0.01)。6.与空白对照组比较,UVB组Bcl-2 mRNA表达水平显著降低(P0.01),,Bax、Caspase-3 及 Caspase-9 mRNA 表达水平显著升高(P0.01);与 UVB 组比较,10-7、10-6、10-5mol/L甘草苷+UVB组Bcl-2 mRNA表达水平显著升高(P0.05,P0.01),Bax、Caspase-3 及 Caspase-9 mRNA 表达水平显著降低(P0.05,P0.01)。7.与空白对照组比较,UVB组Bcl-2蛋白表达量显著降低(P0.01),Bax、Caspase-3及Caspase-9蛋白表达量显著升高(P0.01);与UVB组比较,10-7、10-6、10-5mol/L甘草苷+UVB组Bcl-2蛋白表达量显著升高(P0.05,P0.01),Bax、Caspase-3 及 Caspase-9 蛋白表达量显著降低(P0.05,P0.01)。结论:甘草苷可促进光老化HaCaT细胞的增殖,提高细胞中SOD、GSH、CAT活性,降低MDA、ROS含量,抑制炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达,降低细胞总凋亡率,促进抗凋亡细胞因子Bcl-2mRNA及蛋白的表达,抑制促凋亡相关细胞因子Bax、Caspase-3、Caspase-9mRNA及蛋白的表达,从而有效的抑制皮肤光老化。
【学位单位】：黑龙江中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R285
【部分图文】：

甘草苷组；丨．１０＿３ｍｏｌ／Ｌ甘草苷组。??３．２甘草苷对光老化ＨａＣａＴ细胞增殖率的影响??如表２－２和图２－２所示，与空白对照组比较，ＵＶＢ组细胞增殖率显著降低??＜０．０１），差异有统计学意义；与ＵＶＢ组比较，１０－７、１０－６、ｌ〇－５ｍｏｌ／Ｌ甘草苷＋Ｕ??ＶＢ组细胞增殖率显著升高（Ｐ＜０．０１），差异有统计学意义。??表２－２甘草苷对光老化ＨａＣａＴ细胞增殖率的影响（：〒±．ｖ，ｎ＝６）??俎別?浓度（ｍｏｌ／Ｌ）?吸光值（０Ｄ）?细胞增殖率（％）??空白对照组?－?０．５４３?土?０．０１２?１００??ＵＶＢ?组?－?０．４５９±０．０２４“?８５＊＊??１〇－７?０．５２０±０．０１８ｒｆ＃?９６＃＃??甘草苷＋ＵＶＢ?组?丨０－６?０＿５３２±０．０１５＃＃?９８＃＃??１〇－５?０．５３７?±?０．０１２＃＃?９９ｍ??注：与空白对照组比较，，＊＊户＜０．０丨：与ＵＶＢ组比较，??２５??

０．８－１??ＡＢＣＤＥＦＧＨ?Ｉ??图２－１甘草苷有效安全浓度的筛选??注：与空白对照组比较，＊／？＜０．０５，?“ＰｃＯ．Ｏｌ。Ａ，空白对照组；Ｂ．丨〇－ｌ°ｍｏｌ／Ｌ甘草苷组；Ｃ．１０－９ｍｏｌ／Ｌ甘草苷??组；Ｄ．ＩＯ＿８ｍｏｌ／Ｌ?甘草苷组；Ｅ．ｌ〇－７ｍｏｌ／Ｌ?甘草苷组：Ｆ．ｌ〇－６ｍｏｌ／Ｌ?甘草苷组；Ｇ．１０－５ｍｏｌ／Ｌ?甘草苷组．，；Ｈ．ｌＣｒ＊ｍｏｌ／Ｌ??甘草苷组；丨．１０＿３ｍｏｌ／Ｌ甘草苷组。??３．２甘草苷对光老化ＨａＣａＴ细胞增殖率的影响??如表２－２和图２－２所示，与空白对照组比较，ＵＶＢ组细胞增殖率显著降低??＜０．０１），差异有统计学意义；与ＵＶＢ组比较，１０－７、１０－６、ｌ〇－５ｍｏｌ／Ｌ甘草苷＋Ｕ??ＶＢ组细胞增殖率显著升高（Ｐ＜０．０１），差异有统计学意义。??表２－２甘草苷对光老化ＨａＣａＴ细胞增殖率的影响（：〒±．ｖ，ｎ＝６）??俎別?浓度（ｍｏｌ／Ｌ）?吸光值（０Ｄ）?细胞增殖率（％）??空白对照组?－?０．５４３?土?０．０１２?１００??ＵＶＢ?组?－?０．４５９±０．０２４“?８５＊＊??１〇－７?０．５２０±０．０１８ｒｆ＃?９６＃＃??甘草苷＋ＵＶＢ?组?丨０－６?０＿５３２±０．０１５＃＃?９８＃＃??１〇－５?０．５３７?±?０．０１２＃＃?９９ｍ??注：与空白对照组比较，，＊＊户＜０．０

??如表３－４和图３－２、３－３所示。与空白对照组比较，ＵＶＢ组ＩＬ－ｌｐ、ＩＬ－６和??ＴＮＦ－ｃｔ蛋白表达量显著升高（尸＜０．０１），差异有统计学意义；与ＵＶＢ组比较，１０－７、??１０＿６、１０＿５ｍｏｌ／Ｌ甘草苷＋ＵＶＢ组ＩＬ－１（３、ＩＬ－６和ＴＮＦ－ａ蛋白表达量显著降低??（户＜０．０５，Ｐ＜０．０１），差异有统计学意义。且１０＿７、１０＿６、１０＿５ｍｏｌ／Ｌ甘草苷＋ＵＶＢ??组ＩＬ－１（３、ＩＬ－６和ＴＮＦ－ａ蛋白的表达呈浓度依赖性，随着甘草苷药物浓度的升高，??ＩＬ－ｌｐ、ＩＬ－６和ＴＮＦ－ａ蛋白的表达降低越显著。由此可知，１〇－７、１０＿６、］０＿５ｍｏｌ／Ｌ??甘草苷能够抑制光老化细胞中ＩＬ－ｉｐ、ＩＬ－６和ＴＮＦ－ａ蛋白的表达。??表３－４甘草苷对光老化ＨａＣａＴ细胞中ＩＬ－ｉｐ、ＩＬ－６、ＴＮＦ－ａ蛋白表达量的影响（〒：ｔｏ，?ｎ＝３）??组别?浓度（ｍｏｌ／Ｌ）?ＩＬ－Ｉ?ｐ／ｐ－ａｃｔｉｎ?ＩＬ－６／ｐ－ａｃｔｉｎ?ＴＮＦ－ａ／ｐ－ａｃｔｉｎ??空白对照组?－?０．１０８±０．０１６?０．１８３±０．０１２?０．１４７±０．０１２??ＵＶＢ?组?－?０．２４７±０＿０３广?０．６２６±０．０２７“?０．２６６土０．０２４＂??１〇－７?０．１８４±０．０３０＃?０．３８５±０．０５１＃＃?０．２１２±０．０１６＃＃??甘草苷＋ＵＶＢ?组?１〇－６?０．１３丨?±０．０３９＃＃?０．３３７±０．０２７＃＃?０．１６５±０．０２３＃＃??１〇－５?０．１２１?±０．０３６＃＃?０．２３８±０．０３４＃＃?０．１５９±０．０２３＃＃??注：与空白对照组比较
【参考文献】

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本文编号：2837586