紫花苜蓿根部多糖的结构鉴定，硒化修饰和体外活性研究

发布时间：2020-10-21 23:05

　　 紫花苜蓿(Medicago sativa L.),属于苜蓿属,豆科植物,又名―牧草之王‖,是一种多年生牧草作物,广泛栽培于世界各地的温带地区。紫花苜蓿多糖(alfalfa polysaccharide)是从紫花苜蓿植株中提取出来的植物多糖。目前国内外对紫花苜蓿多糖的研究主要集中在其茎叶部分,而对其地下部分的根部研究较少,为了全面地利用和开发苜蓿这一天然植物资源,本论文对紫花苜蓿根部的多糖进行纯化,结构修饰,并对其体外活性进行了研究。在本论文研究中,使用热水提取法对紫花苜蓿根部的粗多糖进行提取,通过对sevage法和酶+sevage法去蛋白的比较,发现使用酶+sevage法1次即可将多糖中蛋白质去除干净,接着通过DEAE-52色谱柱和Sephadex G-200色谱柱分离纯化得到两个多糖组分DAPS-1和DAPS-2,两者皆为棕黄色粉末。然后采用Na_2SeO_3/NHO_3的条件对DAPS-2进行硒化结构修饰,得到Se-DAPS-2,硒含量为320μg/g。DAPS-1,DAPS-2和Se-DAPS-2(DAPSs)的化学结构采用高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)、紫外光谱(UV)、傅立叶变换红外光谱(FT-IR)和核磁共振光谱(~1H NMR和~(13)CNMR)进行鉴定;首次采用高效液相色谱(HPLC),示差检测器(IR)和氨基柱(NH_2)对苜蓿多糖的单糖组成进行分析。结果表明,DAPS-1分子量为10.0 KDa,由鼠李糖,木糖,阿拉伯糖,葡萄糖醛酸和葡萄糖组成,摩尔比为:1.00:3.19:2.67:5.44:5.10。DAPS-2分子量为15.8KDa,由鼠李糖,木糖,葡萄糖醛酸,甘露糖,葡萄糖和半乳糖组成,摩尔比为:1.21:1.49:3.49:3.11:2.73:1.00。而Se-DAPS-2相比于DAPS-2的分子量明显降低,由15.8KDa降低到11.0 KDa。Se-DAPS-2的FT-IR光谱和~(13)C NMR光谱表明主要在Se-DAPS-2的C-6处发生了硒化反应。另外,采用扫描电镜(SEM)和热重分析(TGA)对DAPSs的表面形态和热稳定性进行研究。在苜蓿多糖的体外抗氧化活性试验中,与DAPS-1和DAPS-2相比,Se-DAPS-2具有更好的对DPPH、ABTS自由基的清除作用,并且具有剂量依赖性。细胞毒活性的实验表明,DAPS-1和Se-DAPS-2有一定的抗HepG-2肿瘤活性,并呈浓度依赖性,Se-DAPS-2的抗HepG-2肿瘤活性高于DAPS-1和DAPS-2。
【学位单位】：沈阳化工大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R284;R285
【部分图文】：

硒标准曲线

沈阳化工大学硕士学位论文 第四章 紫花苜蓿多糖的化学结构和理化性质Se-DAPS-2 主要官能团峰位， Se-DAPS-2 中，在 925cm-1和 840cm-1处出现了两个新的吸收峰，分别归属为 C-O-Se 伸缩振动和 Se=O 不对称振动。这些吸收峰表明，Se-DAPS-2中确实发生了硒化修饰反应[53]。4.8.4 DAPS-1、DAPS-2 和 Se-DAPS-2 的核磁光谱分析DAPS-1、DAPS-2 和 Se-DAPS-2 的结构进一步使用核磁光谱进行鉴定。DAPS-1 的1H 和13C 谱图如图所示：

图 4-7 DAPS-1 的13C NMR 谱图Fig. 4-713C NMR spectrum of DAPS-1在碳谱中,异头碳原子的共振出现在 90-110 ppm，相反，非异头碳原子的共振出现在 60-85 ppm。高场区的 15-20 ppm 共振信号归属于鼠李糖的甲基。含有糖醛酸的多糖其羧基信号出现在低场区的 170-180 ppm 信号处[122]。由图 4-7 可知, 16.5 代表了鼠李糖甲基的信号。 60.7-75.8 ppm 的信号范围代表了DAPS-1 中的非异头碳原子,信号范围在 96.0-107.1 ppm 处是由于糖残基中 C-2 到 C-6的共振引起的。 170.6-174.1 处的信号说明 DAPS-1 中存在糖醛酸。
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本文编号：2850716