归元剔络养血方改善非动脉炎性前部缺血性视神经病变作用机制的实验研究

发布时间：2020-10-22 08:59

　　 非动脉炎性前部缺血性视神经病变(nonarteritic anterior ischemic optic neuropathy,NAION)是指由于各种原因造成供应视神经的血管发生循环障碍的视神经功能异常,是导致中老年人视力严重受损,甚至失明的常见眼病。由于该病病机尚不明确,故目前缺乏公认有效的治疗方法,成为一项眼科疑难病。导师冯俊主任医师在辨病与辨证相结合基础上,结合眼底病气血辨证理论以及络病学理论,将NAION的病机概括为精血亏虚、目络瘀阻,并提出相关治法剔络化瘀、养血明目法,总结经验方归元剔络养血方。本方由当归、土鳖虫、桃仁、川芎、黄芪、丹参组成,前期在临床观察取得了一定的疗效。此次拟探讨归元剔络养血方改善NAION的作用机制。目的:观察不同剂量归元剔络养血方对大鼠NAION模型视神经组织病理学改变的影响,探讨归元剔络养血方可能改善大鼠NAION模型视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)凋亡的作用机制,探讨归元剔络养血方改善大鼠NAION模型血管舒缩、氧化应激的作用机制。方法:选用健康SD大鼠96只,随机分为正常组,模型组,甲钴胺组以及中药低、中、高剂量组,除正常组外其他组均采用光动力法制备NAION模型。造模成功后,正常组常规饲养,模型组采用蒸馏水灌胃,其他药物组分别采用相对应药物灌胃,总共干预28天。第28天取材,分别通过经上丘逆行标记RGC、HE染色、视神经透射电镜、Western blotting、酶联免疫法、放射免疫法、比色法从形态和功能角度讨论归元剔络养血方改善NAION的作用机制。结果:1.视神经病理切片HE染色后,正常组大鼠纤维排列规则有序,其间可见胶质细胞。模型组大鼠4周后视神经萎缩,视盘周围神经纤维层变薄,视神经内可见细胞增生,红细胞溢出。甲钴胺组大鼠视神经萎缩,盘周视神经纤维层结构疏松明显。中药低剂量组大鼠视神经萎缩,盘周神经纤维层欠规则,网状改变。中药中剂量组大鼠视神经萎缩,盘周神经纤维层排列疏松。中药高剂量组大鼠视神经纤维排列有序,盘周神经纤维层结构略疏松;视网膜病理切片HE染色后,正常组大鼠视网膜层次清晰,结构完整,RGC数量丰富,排列紧凑,致密有序。模型组大鼠RGC结构疏松,排列散乱,大部RGC缺失。甲钴胺组大鼠RGC结构疏松,排列散乱,较多RGC缺失。中药低剂量大鼠RGC结构疏松,排列散乱,较多RGC缺失。中药中剂量组大鼠RGC结构略紧密,排列有序,间有缺失。中药高剂量组大鼠RGC结构紧凑有序,RGC数量较丰富,偶有缺失。视神经透射电镜观察正常大鼠视神经内神经纤维束大小不等,视神经纤维束膜内包裹大量排列较为规整的轴突。模型组大鼠视神经大量轴突消失,胶质瘢痕明显,轴索肿胀,髓鞘解体。甲钴胺组大鼠视神经轴突消失较多,排列不规则,胶质瘢痕严重,轴索肿胀。中药低剂量组大鼠视神经轴突消失较多,排列不规则,胶质瘢痕严重,轴索肿胀。中药中剂量组大鼠视神经轴突排列略紊乱,轴突部分缺失,轴索肿胀。中药高剂量组大鼠视神经轴突排列有序,缺失较少,偶有髓鞘异常。荧光显微镜大鼠RGC分布:荧光显微镜下可见RGC形态清晰,分布呈放射状排列,与视网膜血管走形方向一致,邻近视盘处RGC排列较为紧密,向视网膜周边部延伸分布的RGC排列逐渐稀疏。正常组大鼠实验眼各象限RGC密度无明显差异,模型组大鼠实验眼RGC数量明显减少,视乳头上方区域减少较其他区域更为明显,可见胞体形状不规则之小胶质细胞散在分布,甲钴胺组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组均可见实验眼RGC数量减少并呈区域性分布。RGC存活率:不同组别RGC存活率存在统计学意义。经LSD法两两比较:模型组,甲钴胺组,中药低、中、高剂量组RGC数量均低于正常组;中药低、中、高以及甲钴胺组的RGC存活率均高于模型组;中药中、高剂量组的RGC数量高于甲钴胺组;中药中、高剂量组的RGC数量高于中药低剂量组;中药高剂量组RGC数量高于中药中剂量组;甲钴胺组与中药低剂量组间不存在统计学意义。2.不同组别caspase-3存在统计学意义(P0.05)。经过LSD法两两比较:中药低、中、高剂量组及甲钴胺组均与正常组之间存在统计学意义;甲钴胺组及中药高剂量组caspase-3表达低于模型组;中药低剂量组、中药中剂量组caspase-3表达高于甲钴胺组;中药高剂量组caspase-3表达低于中药低剂量组;中药高剂量组caspase-3表达低于中药中剂量组;中药高剂量组与甲钴胺组无统计学意义。不同组别caspase-9存在统计学意义。经过LSD法两两比较:模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、甲钴胺组均与正常组之间存在统计学意义;中药高剂量组caspase-9表达低于模型组;中药高剂量组caspase-9表达低于甲钴胺组;中药高剂量组caspase-9表达低于中药低剂量组;中药高剂量组caspase-9表达低于中药中剂量组;模型组、甲钴胺组、中药低剂量组、中药中剂量组之间均无统计学意义。不同组别fas存在统计学意义,经过LSD法两两比较:中药高剂量组及甲钴胺组fas表达低于正常组;甲钴胺组及中药高剂量组fas表达低于模型组;中药低剂量组、中药中剂量组fas表达高于甲钴胺组,中药高剂量组fas表达低于甲钴胺组;中药高剂量组fas表达低于中药低剂量组;中药高剂量组fas表达低于中药中剂量组。不同组别fas配体(fas-ligand,fas-1)存在统计学意义,经过LSD法两两比较:中药高剂量组及甲钴胺组均与正常组之间存在统计学意义;甲钴胺组及中药高剂量组fas-1表达低于模型组;中药低剂量组、中药中剂量组fas-1表达高于甲钴胺组;中药高剂量组fas-1表达低于中药低剂量组;中药高剂量组fas-1表达低于中药中剂量组。不同组别bcl-2存在统计学意义。经过LSD法两两比较:模型组、低、中、高、甲钴胺组的bcl-2表达均高出正常组表达;中药高剂量组bcl-2表达高于模型组、甲钴胺组、中药低剂量组、中药中剂量组。中药模型组、甲钴胺组、中药低剂量组、中药高剂量组之间均不存在统计学意义。不同组别bax存在统计学意义,经过LSD法两两比较:模型组、中药低剂量组均与正常组之间存在统计学意义;甲钴胺组及中药低、中、高剂量组与模型组之间存在统计学意义;中药低剂量组bax表达高于甲钴胺组、中药高剂量组bax表达低于甲钴胺组;中药中、高剂量组bax表达低于中药低剂量组;中药高剂量组bax表达低于中药中剂量组。3.不同组别活性氧(reactive oxygen species,ROS)存在统计学意义,经过LSD法两两比较:模型组ROS表达高于正常组,中药高剂量组ROS表达低于正常组;中药低、中、高剂量组ROS表达低于模型组;中药高剂量组ROS表达低于中药低剂量组;中药高剂量组ROS表达低于中药中剂量组。不同组别在超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)上存在显著差异。经过LSD法两两比较,模型组与正常组、高组之间均存在显著差异。不同组别一氧化氮(nitric oxide,NO)不存在统计学意义。不同组别在血管内皮素-1(endothelin-1,'ET-1)上存在统计学意义。经过LSD法两两比较:模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组ET-1表达均高于正常组;中药低、中、高组ET-1表达全部低于模型组;中药中、高剂量组ET-1表达全部低于中药低剂量组;中药高剂量组ET-1表达低于中药中剂量组。结论:1.归元剔络养血方对NAION模型大鼠病理组织形态的修复起到一定积极作用,可能具有防止或延缓RGC死亡的作用,高剂量归元剔络养血方效果更优。2.高剂量组中药归元剔络养血方可能具有从抑制外源性途径及内源性途径蛋白凋亡双重作用并刺激凋亡抑制蛋白表达等方面起到抑制RGC凋亡的作用。3.高剂量组中药归元剔络养血方针对大鼠NAION模型可能具有一定的保证血管张力稳定,保护器官灌流以及修复损伤的作用;高剂量组中药归元剔络养血方可以通过抑制自由基在体内不断堆积,促进自由基清除剂生成,减少脂质过氧化物的生成和堆积,降低氧化应激反应的负面效应,维护氧化与抗氧化之间作用的平衡等方式保护视神经。
【学位单位】：中国中医科学院
【学位级别】：博士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

诊为“双眼缺血性视神经病变”，中医诊断“双眼暴盲精血亏虚、目络瘀阻”。??予归元剔络养血方治疗，１个月后双眼视力均恢复至１．０，查视野缺损范围明显??改善（图１）。??２２??

诊为“双眼缺血性视神经病变”，中医诊断“双眼暴盲精血亏虚、目络瘀阻”。??予归元剔络养血方治疗，５０天后右眼视力恢复至０．６，左眼视力恢复至０．２，查??视野缺损范围明显改善（图２）。??ｍ??＿?＇￣７＾．．?國■－、丨丨」■＿■＿??—一?一一?？?．ｒ?ｖ??图２：患者治疗前后视野情况。Ａ．右眼治疗前，视力０．１２；?Ｂ．右眼治疗后，视力??０．６；?Ｃ．左眼治疗前，视力眼前指数；Ｄ．左眼治疗后，视力０．２。??２４??

诊为“右眼缺血性视神经病变”，中医诊断“右眼暴盲精血亏虚、目络瘀阻”。??予归元剔络养血方治疗，３０天后右眼视力恢复至０．６，左眼视力恢复至０．４，查??视野缺损范围明显改善（图３）。??２５??
【参考文献】

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本文编号：2851388