补肝健腰方对大鼠腰椎间盘退变组织MMP-3、TIMP-1的影响

发布时间：2020-10-22 17:37

　　 目的:探讨补肝健腰方对于大鼠腰椎间盘退变组织MMP-3、TIMP-1的影响。方法:将75只SD大鼠随机抽取60只作为造模组,余下15只为假手术组。造模组给予大鼠腰椎间盘(L4/5)退变造模处理,造模成功后随机分为:模型组、中药组、强力霉素组、腰痹通组,每组15只,分别给予生理盐水、补肝健腰方、强力霉素,腰痹通喂养,假手术组只暴露椎间盘,不作退变处理,给予生理盐水喂养。分别于术后药物干预前、20天、40天分别收集大鼠腰椎间盘退变节段(L4/5)组织,标本采用HE染色后用200倍光学显微镜下对椎间盘组织进形组织形态学观察,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测椎间盘组织中的MMP-3m RNA、TIMP-1m RNA的含量,免疫组织化学(IHC)法检测椎间盘组织中的MMP-3、TIMP-1的含量。结果:1.造模后的大鼠腰椎间盘组织镜下观察在药物干预前呈现退变改变,药物干预后大鼠腰椎间盘组织得到修复改善;2.造模后大鼠腰椎间盘组织中的MMP-3、TIMP-1的含量表达增多,药物干预后MMP-3、TIMP-1的含量表达显著下降,MMP-3/TIMP-1的比值也下降,中药组和强力霉素组效果相当,且优于腰痹通组。结论:1.运用针刺大鼠腰椎间盘可成功制作成腰椎间退变模型,且模型的病理改变状态与人类相似,该动物模型中MMP-3与TIMP-1的表达明显上升。2.补肝健腰方与强力霉素能降低大鼠腰椎间盘退变模型的MMP-3与TIMP-1的表达,对于腰椎退变具有治疗作用,补肝健腰方治疗腰椎间盘作用与强力霉素作用相当,补肝健腰方能够降低MMP-3/TIMP-1的比值,说明腰椎间盘退行性病变与MMP-3/TIMP-1的比值也有明显关系,MMP-3/TIMP-1的比值越高说明腰椎退变越严重,比值越低,或越接近正常值说明腰椎间盘退变不严重或恢复良好。
【学位单位】：湖南中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

加 入 等 体 积 的 异 丙 醇 ， -20℃静 置 20min， 再 经 过 12000rpm， 15mi低 温离 心，去上清，沉淀中加入 1ml75%乙醇（无菌 DEPC 处理水配制），仪器震荡。又 12000rpm，5min 低温离心，去上清，空气干燥 5~10min。加入 50μl 无菌无酶水溶解沉淀。 紫外分光光度计测定浓度，吸取 2ul RNA 溶液于石英比色杯中，用无酶水定容至 100ul，在 260nm 与 280nm 处测其吸光度值，并计算其浓度跟纯度。RNA 浓度（ng/ul）=A260*稀释倍数*40，浓度在 500ng/ul-1000ng/ul，RNA 纯度=OD260/OD280，比值在 1.8-2.0 之间均可3． RNA 的琼 脂糖 凝胶 电泳电 泳 槽 用 3%的 双 蒸 水 处理 0.5h； 配 制 １ %变 性 琼 脂 糖凝 胶， 0.2g 琼脂 糖 ，20ml 无 菌 DEPC 处 理 水 ，加 热 至 琼 脂 糖溶 解 ，冷至 60℃,加 入 0.5μlE（10mg/ml），混 匀 后 倒 胶 ；取 2μl 提 取 的 RNA，按 1:5 的 比 例与 loadinbuffer premix 混 匀 ， 170V 恒 压 电 泳 ， 溴 酚 蓝 前 沿 迁 移 至 凝 胶 总 长 2/3 处停止 电 泳 ；凝 胶成 像系 统下 观察 。详 见 图 1

二、结果与分析结果造模后椎间盘组织形态学观察 模 后饲 养 2 周 ， 取 标本 采用 HE 染色 后 200 倍光 学镜 下预 前镜 下观 察术 组椎 间盘 髓 核 结 构 完 整， 纤维 板和 软 骨 细胞 分 层排 列中 药组 、腰 痹通 组及 强力 霉素 组 可 见 纤维 板断 裂髓 核 部 骨细 胞反 应性 增生 。详 见图 2

鼠 第 20 天 验 证 时 腰 椎 间 盘 组 织 形 态 学 观 察 图 （ A， 假 手药 组 D， 腰 痹 通 组 E， 强 力 霉 素 组 ）天 镜 下观 察 组 纤 维 板 变 薄 ， 软 骨 细 胞 有 规 则 地 增 生 ， 髓 核 处 髓 核 结 构 仍 然 可 以 辨 认 。 模 型 组 纤 维 板 基 本 已 经 乱 ， 还 可 形 成 骨 小 梁 。 髓 核 结 构 消 失 。 中 药 组 、 仍可 看 到 一 些 残 留的 纤维 板 ，纤 维 板 局 部 有杂 乱的糊 可见 。详 见图 4
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本文编号：2851901