养正散结汤对胃癌干细胞自我更新与分化的调控作用及机制研究

发布时间：2020-10-22 23:13

　　 目的探讨中药复方养正散结汤(Yangzheng Sanjie decoction,YZSJD)对胃癌干细胞(Gastric cancer stem cells,GCSCs)自我更新与分化的调控作用及其作用机制。方法通过无血清悬浮培养法分离GCSCs,采用Western Blot法检测"干性"标志CD44、Oct-4、Nanog、Sox-2及相关靶基因c-Myc、Ras的蛋白表达;以细胞球连续传代实验检测GCSCs自我更新能力;采用免疫荧光法及流式细胞术检测GCSCs分化情况;采用实时荧光定量PCR法检测let-7a表达。结果分离出的球囊细胞能在无血清培养基中连续传代,与亲本细胞比较,球囊细胞"干性"标志CD44、Oct-4、Nanog和Sox-2的表达均明显升高(P0.01);与GCSCs比较,GCSCs贴壁分化24、48、72 h后其分化标志CK18表达逐渐升高(P0.01)。与空白对照组比较,养正散结汤组中CD44、Oct-4、Nanog、Sox-2及c-Myc、Ras蛋白表达均显著降低(P0.01),CK18、let-7a表达均显著升高(P0.01)。空白对照组细胞球形成率为(16.46±0.32)%,养正散结汤1.0、2.0 mg·mL~(-1)浓度组细胞球形成率分别为(2.83±0.85)%、(0.17±0.15)%,与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P0.01)。结论养正散结汤能上调let-7a抑制其靶基因c-Myc、Ras表达,抑制GCSCs自我更新、促进其分化,这可能是养正散结汤发挥抗癌作用的机制之一。
【部分图文】：

结果见图1。人胃癌SGC-7901细胞株在无血清培养基中形成悬浮细胞球，随着培养时间的延长，细胞球的细胞数目逐渐增多，细胞球体积逐渐增大。2.2 GCSCs鉴定

结果见图6。空白对照组细胞球形成率为（16.46±0.32)%,1.0、2.0 mg·mL-1养正散结汤组细胞球形成率分别为（2.83±0.85）%、（0.17±0.15）%，与空白对照组比较，差异均有统计学意义（P<0.01）。结果表明，养正散结汤能抑制GCSCs自我更新。图3 GCSCs体外连续传代（×400)

GCSCs体外连续传代（×400)
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本文编号：2852210