目的:参考中医古籍关于元气的论述,通过手术切除右肾作为元气亏虚模型,并以切除左肾作为对照组,使用培元固本健脑法进行干预,观察klotho(kl)蛋白及相关蛋白在肾和海马的表达和培元固本健脑法的干预效果,探讨元气亏虚对肾功能、记忆功能的影响,培元固本健脑法对肾和海马的干预作用及机制。方法:1.理论探讨:通过整理中医古籍文献和研究进展,分析中医学元气的作用,现代疾病与元气的关系,其他虚证动物模型对元气亏虚动物模型的借鉴意义,为元气亏虚动物模型的建立提供理论基础。2.实验研究:以空白组作为对照组,以单侧肾切除大鼠作为元气亏虚动物模型,使用培元固本健脑法进行干预,随机分为模型组、左肾组、固本健脑方高剂量组(固高组)、固本健脑方中剂量组(固中组)和固本健脑方低剂量组(固低组)。以kl蛋白为切入点,探索单侧肾切除作为元气亏虚动物模型的可行性;以左侧、右侧分别肾切除,探索命门与肾的关系;观察单侧肾切除肾功能、血常规;通过自发活动、Morris水迷宫,探讨元气亏虚动物模型的学习、记忆能力;使用ELISA方法检测kl蛋白、TNF-α、IL-6和8-OHDG的变化;使用Real-time PCR和western blot方法,检测肾脏、海马kl、NF-κB和MAPK1 mRNA和蛋白表达;观察元气亏虚大鼠肾脏和海马的病理改变。结果:1.(1)一般情况单侧肾切除大鼠普遍出现毛发枯黄、活动减少,部分出现躁动、大便稀溏、喘息;左肾切除与右肾切除两者之间一般情况没有明显差别。(2)各组不同时间点体重和处死后肾重的比较:术前各组体重比较,无明显差异(p0.05);术后1周,固高组低于固低组(p0.05);术后2周、4周、6周、8周体各组间体重没有明显改变(p0.05)。8周处死后,肾重比较,模型组、左肾组、固高组、固中组和固低组均大于空白组(p0.05)。(3)各组大鼠肾功能、血常规检测与模型组比较:尿素氮比较,各组之间没有明显差异(p0.05)。血肌酐比较,模型组、左肾组、固低组高于空白组(p0.05);左肾组、固低组低于模型组(p0.05);固中组、固高组低于模型组、左肾组和固低组(p0.05)。各组血WBC、RBC没有差异(p0.05);Hb比较,模型组、左肾组低于空白组(p0.05);固高组、固中组高于模型组、左肾组(p0.05)。2.元气亏虚大鼠行为学研究及培元固本健脑法的干预作用:(1)自发活动检测结果:自发活动总路程比较,模型组、左肾组低于空白组(p0.01),固高组、固中组和固低组低于空白组(p0.05),固高组、固中组高于模型组和左肾组(p0.05);平均速度比较,模型组、左肾组低于空白组(p0.01),固高组、固中组和固低组低于空白组,高于模型组和左肾组(p0.05);休息时间比较,模型组、左肾组高于空白组(p0.01),固高组、固中组和固低组高于空白组,少于模型组和左肾组(p0.05);中央时间,模型组、左肾组少于空白组(p0.01),固高组、固中组和固低组少于空白组,多与模型组和左肾组(p0.05)。(2)大鼠Morris水迷宫定位航行和空间探查实验结果:90s游泳找到平台总路程比较,模型组、左肾组高于空白组(p0.01),固高组、固中组和固低组高于空白组,低于模型组和左肾组(p0.05);平均速度比较,模型组和左肾组比空白组慢(p0.01),固高组、固中组、固低组比空白组慢(p0.05),固高组比模型组和左肾组快(p0.05);第一次抵原平台时间,模型组、左肾组多与空白组(p0.01),固高组、固中组、固低组比空白组慢(p0.05),比模型组和左肾组快(p0.05);穿越平台次数,模型组、左肾组少于空白组(p0.01),固高组、固中组、固低组少于空白组(p0.05),固高组、固中组多于模型组和左肾组(p0.05)。3.元气亏虚大鼠炎症因子及氧化应激反应及培元固本健脑法的干预作用:ELISA法检测血清结果:各组血清kl蛋白浓度比较,模型组、左肾组低于空白组(p0.01);固高组、固中组、固低组低于空白组,高于模型组和左肾组(p0.05)。血清TNF-α浓度比较,模型组、左肾组高于空白组(p0.01),固高组、固中组和固低组低于模型组和左肾组(p0.05)。血清IL-6浓度比较,模型组、左肾组分别高于空白组(p0.01,0.05);固高组、固中组、固低组高于空白组和模型组(p0.05);固高组低于左肾组(p0.05)。血清8-OHDG浓度比较,模型组、左肾组高于空白组(p0.01);固高组低于模型组和左肾组、固低组(p0.05);固中组、固低组高于空白组、低于模型组和左肾组(p0.05)。4.元气亏虚大鼠肾脏、海马kl、MAPK1、NF-κB的表达及培元固本健脑法的干预作用Real-time PCR检测肾脏组织结果:(1)kl mRNA比较,模型组、左肾组、固低组低于空白组(p0.01),固中组和固高组低于空白组(p0.05);固中组和固高组高于模型组和左肾组(p0.05)。(2)NF-κB mRNA比较,模型组、左肾组高于空白组(p0.01),固高组、固中组、固低组高于空白组(p0.05),低于模型组和左肾组(p0.05)。(3)MAPK1 mRNA比较,模型组、左肾组高于空白组(p0.01),固高组、固中组、固低组高于空白组(p0.05),固中组、固高组低于模型组和左肾组(p0.05)。Real-time PCR检测海马组织结果:(1)Kl mRNA比较,模型组、左肾组、固低组、固中组低于空白组(p0.01),固高组低于空白组(p0.05);固低组、固中组和固高组高于模型组(p0.05),固中组、固高组高于左肾组(p0.05)。(2)NF-κB mRNA比较,模型组、左肾组高于空白组(p0.01);固高组、固中组、固低组高于空白组,低于左肾组(p0.05)。(3)MAPK1 mRNA比较,模型组、左肾组高于空白组(p0.05),固低组、固中组和固高组低于模型组(p0.05)。western blot检测肾脏组织结果:(1)Kl比较,模型组、左肾组低于空白组(p0.01),固低组、固中组和固高组低于空白组(p0.05);固中组、固高组高于模型组和左肾组(p0.05)。(2)NF-κB P65比较,模型组、左肾组高于空白组(p0.01),固低组、固中组、固高组高于空白组(p0.05),低于模型组和左肾组(p0.05)。(3)MAPK1比较,模型组、空白组高于空白组(p0.05);固低组、固中组和固高组低于模型组、左肾组(p0.05)。western blot检测海马组织结果:(1)Kl比较,模型组、左肾组低于空白组(p0.01)、固低组、固中组低于空白组(p0.05);固低组、固中组、固高组高于模型组和左肾组(p0.05)。(2)NF-κB比较,模型组和左肾组高于空白组(p0.01),固低组高于空白组(p0.05);固低组、固中组、固高组低于模型组和左肾组(p0.05)。(3)MAPK1比较,模型组、左肾组、固低组、固中组和固高组均高于空白组(p0.05)。5.元气亏虚大鼠肾和海马病理改变及培元固本健脑法的干预作用光镜下观察肾脏组织:空白组大鼠肾小球形态正常,肾小管形态正常。模型组肾小球增生,系膜基质增生,细胞增生,胞浆可见红染颗粒,近曲小管上皮细胞坏死、肿胀。左肾组肾小球肥大,细胞增多,鲍曼氏腔狭窄,肾小管形态基本正常,刷状缘清晰。固低组肾小球肥大,红细胞增多,毛细血管内内皮细胞增生,毛细血管扩张,肾间质无明显改变。固中组肾小球肥大,系膜基质增生,肾间质无明显改变。固高组肾小球肥大,系膜增生,毛细血管内皮细胞增生明显,肾间质充血。光镜下观察海马组织:空白组锥体细胞层次排列整齐,无明显病理改变;模型组局部可见锥体细胞层次排列欠整齐,可见锥体细胞变性(细胞肿胀,胞浆淡染),坏死(核固缩);左肾组锥体细胞排列层次尚可,变性、坏死程度比模型组轻;固低组锥体细胞层次尚可,变性、坏死程度较模型组、左肾组轻;固中组锥体细胞层次尚可,变性、坏死程度较固低组轻;固高组锥体细胞排列层次尚可,变性坏死程度较轻。结论:(1)单侧肾切除大鼠表现出与元气亏虚相似的症状,可以作为元气亏虚动物模型的其中一种。(2)培元固本健脑法可以改善元气亏虚大鼠肾脏、脑的功能,其机制可能与促进kl蛋白表达,从而抑制炎症和氧化应激有关。(3)Kl蛋白或可作为反映元气盛衰的参考指标之一,而炎症和氧化可能是损害元气的主要因素之一。(4)左肾和右肾在肾功能、kl蛋白表达、对学习记忆的影响等方面无明显的差别,因此左肾为肾,右肾为命门的说法仍需要进一步研究来证实。
【学位单位】：湖北中医药大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：
表 1-1 各组大鼠不同时间点体重和处死后肾脏重的比较（x±s,g）组别 术前 术后 1 周 术后 2 周 术后 4 周 术后 6 周 术后 8 周 处死后肾重空白组 369.20±25.64388.40±27.09440.00±22.15461.80±32.53487.20±35.77491.20±34.122.56±0.14模型组 361.00±25.77380.00±23.74406.40±21.92454.80±19.38489.20±28.03424.20±43.823.0440±0.22*左肾组 348.80±26.82370.00±18.66428.00±24.50459.20±29.57480.40±35.13436.00±34.863.1080±0.13*固低组 373.60±30.17408.00±22.63434.60±28.59473.40±29.51440.20±33.58447.80±32.983.0600±0.18*固中组 346.20±26.11378.00±31.64449.80±36.187470.00±37.39495.00±36.67461.60±40.423.1500±0.28*固高组 337.60±19.16354.60±17.61410.40±28.96436.40±31.64456.40±36.22486.60±40.403.0020±0.23*注：与空白组比较，*p＜0.05，与固低组比较， p＜0.05
±26.11±31.64±36.187±37.39±36.67±40.42±固高组 337.60±19.16354.60±17.61410.40±28.96436.40±31.64456.40±36.22486.60±40.403.±注：与空白组比较，*p＜0.05，与固低组比较， p＜0.05 图 1-1 不同时间点各组大鼠体重的比较200
（p＜0.05）；固中组 固高组低于模型组 左肾组和固低组（p＜0.05） 各组血 WBC RBC 没有差异（p＞0.05）；Hb 比较，模型组 左肾组低于空白组（p＜0.05）；固高组 固中组高于模型组 左肾组（p＜0.05） （见表 2，图 1-3 和 1-4）表 1-2 各组大鼠肾功能、血常规的比较（x±s）组别肾功能 血常规尿素氮（mmol/L）肌酐（μmoI/L）WBC（*109/L） RBC（*1012/L）Hb（g/L）空白组 3.38±1.18 64.26±13.29 7.10±2.56 8.59±0.28 155.50±4.95模型组 4.17±1.25 86.46±14.99* 8.35±1.49 8.55±0.56 135.00±4.24*左肾组 3.78±1.65 72.21±15.53* 9.75±1.56 8.68±0.57 132.08±4.57*固低组 4.13±0.83 73.35±11.02* 10.30±2.83 9.95±1.22 146.66±8.50固中组 4.46±0.99 65.39±10.64 9.63±2.75 9.64±1.43 153.00±4.24 固高组 3.91±0.52 68.50±11.45 7.43±1.25 9.09±1.36 151.33±5.13 注：与空白组比较，*p＜0.05；与模型组比较， p＜0.05；与左肾比较， p＜0.05；与固低组比较， p＜0.05
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本文编号：
2855512
