麦冬皂苷B对人胃癌MGC-803细胞抑制作用的研究

发布时间：2020-10-26 02:26

　　 研究的目的和意义:胃癌作为全球最常见的恶性肿瘤之一,严重危害人类生命和健康。我国是胃癌高发区,在我国恶性肿瘤的死因中,胃癌排列第二。目前,对于胃癌的治疗仍以包括手术切除、放化疗、靶向治疗和免疫治疗在内的多学科综合性治疗为主,但预后不甚乐观,5年总生存率不到3 0%。其中,肿瘤细胞的侵袭转移直接影响了胃癌的治疗及预后。肿瘤的转移是受多环节、多因素调控的复杂且多步骤的过程,肿瘤细胞向周围正常组织浸润并发生转移是通过细胞外基质(ECM)的降解这一基本途径实现的。相关研究表明,基质金属蛋白酶(MMPs)在这一过程中发挥了重要作用,其中,作为MMPs家族中重要成员的MMP-2和MMP-9已被多数研究证实与胃癌侵袭、转移最为密切相关。目前,中医药治疗肿瘤在临床上已经获得了显著的疗效,尤其在稳定瘤体、降低肿瘤复发、减轻放化疗的毒副作用、提高患者生活质量、增强免疫力等方面展现出了独特的优势。消癌解毒方是由国医大师周仲瑛教授根据长期的临床实践及经验总结,并在其提出的癌毒学说指导下,所创制的具有化痰祛瘀、益气养阴、抗癌祛毒等功效的抗肿瘤验方。消癌解毒方已被证实在临床治疗具有显著的优势;实验研究证实消癌解毒方对肺癌、肝癌均有明显的抗癌作用,但是其对胃癌的作用及机制尚有待进一步研究证实。麦冬作为组成此抗癌方剂中一味不可或缺的中药,具有包括抗肿瘤作用在内的多种药理作用。甾体皂苷类、高异黄酮类、多糖类及氨基酸类等均是从麦冬中分离出的主要化合物。其中,麦冬皂苷B(ophiopogonin-B,OP-B)是从麦冬中分离提取的一种甾体皂苷类单体成分,具有明显的抗癌作用,本实验旨在观察麦冬皂苷B对人胃癌细胞MGC-803增殖、侵袭转移及凋亡的影响,并进一步探讨其抗胃癌作用的机制。方法:通过查阅相关文献资料,挑选出低分化人胃癌MGC-803细胞作为研究对象。体外培养人胃癌MGC-803细胞,利用CCK-8法观察麦冬皂苷B对其增殖的影响;通过细胞侵袭实验观察麦冬皂苷B对人胃癌MGC-803细胞侵袭能力的变化;通过划痕实验检测麦冬皂苷B对人胃癌MGC-803细胞迁移能力的影响;Western Blot技术从蛋白水平验证麦冬皂苷B对人胃癌MGC-803细胞中MMP-2、MMP-9蛋白表达水平的影响;Annexin V-FITC/PI双染法结合流式细胞术检测麦冬皂苷B对MGC-803细胞凋亡率的影响。结果:1.麦冬皂苷B作用人胃癌MGC-803细胞24 h,48 h后,相较于空白组,麦冬皂苷B能够显著地抑制MGC-803细胞增殖,并且表现出一定的浓度依赖效应。2.麦冬皂苷B作用MGC-803细胞24 h后,相较于空白对照组,麦冬皂苷B能明显抑制MGC-803细胞的侵袭能力,在10μmol/L和15μmol/L浓度中,用药组细胞侵袭数目明显低于空白对照组,并且呈现出浓度依赖效应。3.细胞划痕实验显示,相较于对照组,麦冬皂苷B对MGC-803细胞的迁移能力有显著抑制,并表现出浓度依赖效应。4.Western Bolt实验证明麦冬皂苷B能下调MGC-803细胞中MMP-2、MMP-9蛋白表达。5.麦冬皂苷B作用于MGC-803细胞后,显示出显著的促凋亡作用。结论:1.麦冬皂苷B能够抑制人胃癌细胞MGC-803增殖。2.麦冬皂苷B可抑制MGC-803细胞的侵袭和迁移能力。3.麦冬皂苷B可能通过下调MGC-803细胞中MMP-2、MMP-9蛋白表达,从而发挥抗癌作用。4.麦冬皂苷B可以显著增加MGC-803细胞的凋亡,这可能也是其抗胃癌作用的另一途径。
【学位单位】：南京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R285
【部分图文】：

当其浓度达到２０?ｐｍｏＩ／Ｌ时，对ＭＧＣ－８０３细胞２４?ｈ、４８?ｈ的抑制率分别达到了?６８．９０％ｔｌ．０１°／〇??和８４．４６％±０．３１％。与空白对照组相比较，该差异具有统计学意义（／）＜０．０５），结果见表??１和图１。??表１不同浓度麦冬皂苷Ｂ对人胃癌ＭＧＣ－８０３细胞增殖抑制率（ｉ土ｓ，ｎ＝６）????２４ｈ?４８ｈ???２０?６８．９０％ｔｌ．０１°／〇＊?８４．４６％±０．３１％＊??１５?５２．５７％±２．３１％＊?５３．２０％ｔ２．６６°／〇＊??１０?４２．５５％ｔ２．５５％＊?２６．１４％±３．２５％＊??５?２６．１５％ｔ２．１１％＊?１６．７０％ｔｌ．７７°／〇＊??１?１８．４１％±４．１４％＊?７．９５％±１．０９％＊??０．１?１５．９１％ｔ５．５４％＊?６．０５％ｔ５．８９°／〇＊??Ｃｏｎｔｒｏｌ?０．００％?０．００％??ｌｉ??

的麦冬皂苷Ｂ来进行对其侵袭和迁移能力的检测。用麦冬皂苷Ｂ处理细胞２４?ｈ后，ＭＧＣ－８０３??细胞的穿膜数目相对于空白组明显减少，差异具有统计学意义（ｐ＜〇．〇５），并且随着ＯＰ－Ｂ??浓度的增加，其抑制作用增强，如图２所示，５、１０、１５?ｐｍｏｌ／Ｌ麦冬皂苷Ｂ对细胞侵袭的??抑制率分别为１７．３％、４２．７％、６８％。由此可见，麦冬皂苷Ｂ能够有效的抑制ＭＧＣ－８０３细??胞迁移能力。??Ａ?Ｃｏｎｔｒｏｌ?０Ｐ－Ｂ５ｍＭ?ＯＰ－Ｂ?１０ｐＭ?ＯＰ－Ｂ１５ｐＭ??ｍｍｍｍ??ｂ?，Ｓ］??〇?ｔ?＊??ＩＳ０５＇?？??一?．，－Ｔ－??〇－０ｌ．．．ｌ？－，Ｔ．．ｌｌＩｎｉ．．，．—■ｒ．．．Ｊ￣￣ｒ—＊??Ｃｃ？ｎｔｆ〇］?５ｐＭ?１０?１５｜｜Ｍ??＂ｏｐ＾ａ￣??图２?ＯＰ－Ｂ对ＭＧＣ－８０３细胞侵袭能力的影响??Ａ：?ＯＰ－Ｂ作用２４?ｈ实验组与空白组细胞侵袭图，Ｂ：侵袭抑制率统计图，＝＊＞＜０．０５。??３．２麦冬皂苷Ｂ可以抑制人胃癌ＭＧＣ－８０３细胞迁移??划痕实验结果显示，质量浓度分别为５、１０、１５?ｐｍｏｌ／Ｌ的麦冬皂苷Ｂ作用人胃癌??１６??

ｏｉｔｒ５ｊｉ＊?１〇｛＾?Ｓ＾ｖｌ??ＯＦ－Ｂ??图３?ＯＰ－Ｂ对ＭＧＣ－８０３细胞迁移能力的影响??Ａ：?ＯＰ－Ｂ抑制胃癌细胞迁移能力的细胞划痕实验，Ｂ：划痕结果统计图，＊／７＜麦冬皂苷Ｂ可以下调人胃癌ＭＧＣ－８０３细胞中ＭＭＰ－２、
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本文编号：2856349