锁阳对兔激素性股骨头坏死低氧状态下成骨细胞的影响

发布时间：2020-10-29 08:09

　　 目的:通过激素性股骨头坏死造模实验,观察造模过程中成骨细胞的变化,以及中药锁阳对此模型下成骨细胞的影响,研究中药锁阳在股骨头坏死治疗中的积极作用,为新的治疗方法提供参考依据。方法:实验1:通过随机抽签法将24只成年的健康新西兰大白兔分为3组,每组8只新西兰大白兔,其中1组为正常对照组、1组为2周模型组,另外1组为4周模型组。3组动物同时给予常规饲料正常喂养,正常对照组不采取特殊处理,而在实验第1天,使用规格20μg/kg大肠杆菌内毒素,通过耳缘静脉,分别注射于2组兔模型组动物体内。在第一次注射大肠杆菌内毒素24小时之后,即实验第2天的同一时间进行第2次注射,注射途径及药物剂量保持一致,同时使用20mg/kg甲基强的松龙进行臀部肌肉注射。之后每间隔1天,使用同样剂量的甲基强的松龙对2组兔模型组进行臀肌注射。2组兔模型在注射大肠杆菌内毒素前,每天给予4万U/rabbit青霉素肌肉注射,预防实验动物注射内毒素发生感染的情况,实验开始后每周进行同量的青霉素肌注2次。实验开始第1天、14天(2周)、28天(4周),对3组兔子进行抽取股动脉血,观察动脉血氧分压的差异。在实验开始时、第2周及第4周,3组实验动物分别随机选取2只兔子进行处死,进行影像学检查、组织病理学切片观察,根据组间各项指标的变化及差异性,同时对各组动物模型的股骨头进行取样,提取并培养股骨头内的成骨细胞,对照观察其变化,最终证实造模成功。实验2:造模方法和实验1方法一致,在造模过程中,26只实验动物给予常规饲料正常喂养,4周后即可造模成功。其中有一只兔子死于内毒死中毒,造模成功的25只新西兰大白兔采取随机抽取,分为3组,分别为安慰对照组、小剂量锁阳组、大剂量锁阳组,每组8只。给予药物干预,每天给予小剂量锁阳组中的新西兰兔锁阳提取液进行灌胃,分早晚两次进行,灌胃剂量按照50ml/kg计算;大剂量锁阳组中的新西兰兔每天使用锁阳提取液进行两次灌胃,灌胃剂量按照100ml/kg来换算,相当于230g生药,分两次进行灌胃;每天给予安慰对照组中的新西兰兔进行生理盐水灌胃,分两次进行,规格为100ml/kg。实验干预前、实验干预4周后及实验8周后,对各组动物模型的股骨头进行取样,使用经典的酶消化法-组织块法分离,提取并培养股骨头内的成骨细胞,在同一时间段观察各组成骨细胞增殖及传代速率。结果:实验1:实验造模的第5天,2周模型组中有1只兔子因内毒素中毒而导致死亡,在实验造模第14天,4周模型组,其中有1只兔子因麻醉不适而死亡。造模4周期间通过影像学检查、组织学切片检查、股动脉血氧分压检测的指标变化、证实造模成功。1在实验开始、2周和4周分别对各组兔子拍摄双侧股骨头X线片以及MRI检查:正常对照组X线显示股骨头外观无差异,形态正常,骨质均匀,骨密度正常,未见变化,M RI检查显示未见明显异常,关节信号正常;2周造模组X线显示股骨头形态未见明显变化,但骨密度有所下降,MRI检查显示T1、T2加权像有不均匀低信号出现,呈线样征,关节腔内伴有关节积液;4周造模组X线显示股骨头外观不光滑圆整,关节面不清晰,骨密度明显分布不均,MRI检查显示不均匀低信号区域面积增大,关节积液增多。2组织学切片检查:正常对照组新西兰兔子股骨头组织切片显示头内骨小梁结构排列有序,密度均匀、骨细胞数量正常。2周模型组新西兰兔子骨小梁差,骨细胞数量少,有空骨陷窝出现。4周模型组新西兰兔子股骨头组织切片显示头内骨小梁排列紊乱、间隙明显稀疏,骨细胞较2周模型组显著减少,空骨陷窝数量明显增多。3股动脉血氧分压检测:实验第1天,3组新西兰大白兔的股动脉血氧分压无差别;实验第14天,2周模型组和4周模型组的股动脉血氧分压之间差别不明显(P0.05),相对于正常对照组,2、4周模型组股动脉血氧分压明显不足(P0.05);实验第28天,股动脉血氧分压情况,正常对照组2周模型组4周模型组,其中4周模型组的股动脉血氧分压明显低于正常对照组(P0.01)。4酶消化法-组织块法:此方法安全有效,分离,提取,培养股骨头内的成骨细胞,实验第1天,3组新西兰大白兔的成骨细胞数量无差别;实验第14天,2周模型组和4周模型组的成骨细胞数量差别不明显(P0.05),2、4周模型组的成骨细胞数量相较于正常对照组明显减少(P0.05);实验第28天,成骨细胞数量情况,正常对照组2周模型组4周模型组,4周模型组兔子监测到的成骨细胞数量明显低于正常对照组(P0.05),差异有统计学意义。实验2:造模过程和实验1过程一致,其中造模过程中有1只兔子因内毒素中毒而导致死亡。在给予药物干预观察效果时,小剂量锁阳组有1只兔子在灌胃后死亡,第5周安慰对照组有1只兔子不明原因死亡。1在锁阳提取液开始干预时、4周和8周分别对各组兔子拍摄双侧股骨头X线片以及MRI检查:安慰对照组X线显示股骨头外观无改善,关节面不清晰,MRI检查显示不均匀低信号区域面积较之前未变小,关节积液较多;小剂量锁阳组X线显示股骨头形态有所改善,MRI检查显示不均匀低信号区域面积较有所缩减,仅有少量关节积液;大剂量锁阳组X线显示股骨头形态恢复正常,关节面清晰。MRI检查显示不均匀低信号区域面积基本修复,之前的关节积液消失。2组织学切片检查:安慰对照组新西兰兔子股骨头组织切片显示头内骨小梁排列紊乱、间隙明显稀疏等情况基本不变。小剂量锁阳组新西兰兔子股骨头组织切片显示骨小梁排列分布顺序稍乱,骨细胞数量增多,骨小梁间隙减小。大剂量锁阳组新西兰兔子股骨头组织切片显示股骨头坏死情况得到控制并恢复到正常水平,骨小梁结构清晰,结构正常。3股动脉血氧分压检测:使用锁阳喂养后,同一时间段的3组兔子检测显示的股动脉血氧分压情况由低到高依次是安慰对照组、小剂量锁阳组、大剂量锁阳组,其中在药物锁阳干预8周,大剂量锁阳组兔子的股动脉血氧压基本恢复到正常标准。4酶消化法-组织块法:药物锁阳干预之前,3组新西兰大白兔的成骨细胞数量均较低,无明显差别;药物锁阳干预第4周及8周的成骨细胞数量情况,大剂量锁阳组小剂量锁阳组安慰对照组,(P0.05),有统计学意义,其中实验12周时,大剂量锁阳组的成骨细胞数量基本恢复正常水平。结论:激素性股骨头坏死过程中,会有成骨细胞不足、被抑制,伴有缺血、缺氧等情况,可见坏死进程及程度与成骨细胞增殖数量成负相关。中药锁阳中的有效成分具有清除自由基、抗氧化、增强免疫功能等作用,能够作用于股骨头坏死中的成骨细胞,其增殖效果和锁阳剂量呈正相关,和安慰对照组相比,作用特点更加明显。
【学位单位】：河南中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R285.5
【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
实验1 激素性股骨头坏死兔子模型的造模实验
    材料与方法
        1 实验材料
        2 实验方法
    结果
        1 模型过程中的兔子一般状况
        2 影像学观察
        3 股动脉血氧分压检测
        4 组织病理学观察
        5 酶消化法-组织块法监测成骨细胞的情况
实验2 中药锁阳干预下对兔SANFH模型成骨细胞的影响
    材料与方法
        1 实验材料
        2 实验方法
    结果
        1 实验过程中兔子一般状况
        2 影像学观察
        3 股动脉血氧分压检测
        4 组织病理学观察
        5 锁阳药物干预后成骨细胞培养监测对比
讨论
    1 中医对SANFH的认识
    2 现代医学对SANFH的认识
    3 造模的可靠性
    4 药物的作用探讨
    5 问题与展望
结论
致谢
参考文献
附录
    附录1：实验室图片
    附录2：影像学图片
    附录3：病理图片
    附录4：实验1造模中的成骨细胞图片
    附录5：实验2药物干预实验中的成骨细胞图片
    附录6：文献综述
        参考文献
    附录7：在校期间论文论著和获奖情况

【参考文献】

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本文编号：2860620