苦水玫瑰精油对AD线虫的治疗作用及作用机制研究

发布时间：2020-10-28 19:13

　　 阿尔兹海默症(AD)作为世界第一大老年性的神经退行性疾病,给家庭和社会带来难以承受的负累,因此,发现与研发有效的抗AD药物一直是研究热点。文献显示,大马士革玫瑰精油具有显著的抗氧化活性,同时能够极大地抑制乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶活性。另外,它也能够显著提升大鼠的学习和记忆能力,这些结果提示玫瑰精油具有抗AD的潜力。本研究利用转入Aβ1-42基因的人源化秀丽隐杆线虫作为AD病理模型,探讨苦水玫瑰精油对于AD线虫的治疗作用,同时解析其抗AD作用机制。秀丽隐杆线虫CL4176株系因转入了人源Aβ1-42蛋白基因,在其体壁肌肉细胞中可过度表达Aβ1-42蛋白从而导致线虫产生AD样症状的麻痹表型,以苦水玫瑰精油处理CL4176株系线虫,结果显著抑制了受试线虫的AD样病理症状,且呈明显的浓度依赖关系。但是,苦水玫瑰精油的两个主要成分香茅醇和香叶醇对于AD线虫麻痹作用的逆转作用不及精油本身。另一转基因秀丽隐杆线虫株系CL2355的神经细胞中大量表达Aβ1-42蛋白,导致该株系线虫对外源性5-HT超敏感,以苦水玫瑰精油处理CL2355,结果显示苦水玫瑰精油能够显著地扭转因Aβ毒性造成的线虫对于外源性5-HT的超敏感,这些结果支持苦水玫瑰精油对AD线虫具有显著的治疗作用。采用肌肉细胞中组成型表达人源Aβ1-42蛋白的CL2006株系线虫模拟AD的进行性病程,检测苦水玫瑰精油对Aβ蛋白在线虫体内异常沉积的影响。结果表明苦水玫瑰精油能够显著地抑制Aβ的异常沉积。采用RNAi敲低CL4176株系线虫skn-1、daf-16和hsf-1基因表达,结果显示苦水玫瑰精油对于skn-1被敲低后的线虫麻痹行为的逆转作用消失,而daf-16和hsf-1基因敲低则无影响。同时,苦水玫瑰精油可显著诱导SKN-1核转位激活及其下游gst-4基因的表达上调。最后,WB实验的结果证明苦水玫瑰精油显著下调秀丽隐杆线虫体内高毒的Aβ寡聚体的水平,以此减轻Aβ蛋白对机体的损伤。采用RNAi敲低skn-1的表达,这一作用消失。这些研究结果表明SKN-1信号通路参与苦水玫瑰精油对AD线虫的治疗作用。本研究的结果将为苦水玫瑰精油的二次开发及应用提供有力的数据支持和理论依据。
【学位单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R285.5
【文章目录】：
缩略词表
中文摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1.1 芳香类精油概况
    1.2 芳香类物质的药理学活性研究概况
    1.3 阿尔兹海默症及抗阿尔兹海默症药物研究进展
    1.4 芳香类物质抗AD研究进展
    1.5 玫瑰精油药理学活性概况
    1.6 立论依据
第二章 苦水玫瑰精油对AD线虫的治疗作用研究
    2.1 引言
    2.2 实验材料及试剂
        2.2.1. 实验生物材料
        2.2.2 试剂、培养基及仪器
    2.3 实验方法
        2.3.1 苦水玫瑰精油药液的制备
        2.3.2 含有苦水玫瑰精油的NGM培养基的制备
        2.3.3 LB固体培养基的制备
        2.3.4 大肠杆菌OP50的培养
        2.3.5 秀丽隐杆线虫的同步化
        2.3.6 麻痹实验
        2.3.7 苦水玫瑰精油对秀丽隐杆线虫体内转基因外源蛋白GFP表达的影响
        2.3.8 5-HT敏感性实验
        2.3.9 统计学分析
    2.4 实验结果
        2.4.1 苦水玫瑰精油对AD线虫麻痹表型的影响
        2.4.2 苦水玫瑰精油对线虫体内转基因外源蛋白GFP表达的影响
        2.4.3 苦水玫瑰精油对AD秀丽隐杆线虫 5-HT超敏感性的影响
        2.4.4 苦水玫瑰精油GC-MS分析
        2.4.5 苦水玫瑰精油主要成分citronellol和geraniol对AD线虫麻痹表型的影响
    2.5 讨论
第三章 苦水玫瑰精油抗AD作用的机制研究
    3.1 引言
    3.2 实验材料
        3.2.1 实验生物材料
        3.2.2 试剂、培养基及仪器
    3.3 实验方法
        3.3.1 不同浓度苦水玫瑰精油的制备
        3.3.2 含有苦水玫瑰精油的NGM培养基的制备
        3.3.3 RNAi实验LB固体培养基的制备
        3.3.4 RNAi实验干扰菌的培养
        3.3.5 秀丽隐杆线虫的同步化
        3.3.6 秀丽隐杆线虫体内Aβ 蛋白沉积物数量的分析
        3.3.7 秀丽隐杆线虫RNAi实验
        3.3.8 秀丽隐杆线虫DAF-16::GFP核转位实验
        3.3.9 秀丽隐杆线虫SKN-1b::GFP核转位实验
        3.3.10 秀丽隐杆线虫gst-4p::GFP基因表达强度分析实验
        3.3.11 western blot实验
        3.3.12 数据处理与分析
    3.4 实验结果
        3.4.1 苦水玫瑰精油对秀丽隐杆线虫咽部肌肉组织中淀粉样斑数量的影响
        3.4.2 苦水玫瑰精油对SKN-1 分子信号通路的影响
        3.4.3 苦水玫瑰精油对DAF-16 分子信号通路的影响
        3.4.4 苦水玫瑰精油对HSF-1 分子信号通路的影响
        3.4.5 苦水玫瑰精油对AD线虫体内Aβ 寡聚体的水平的影响
    3.5 讨论
第四章 结论
参考文献
在校期间研究成果
致谢

【参考文献】

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本文编号：2860489