益智仁健脑的神经保护作用药效物质筛选

发布时间：2020-11-02 04:05

　　 中药益智仁,又名益智、益智子,姜科、山姜属的多年生草本植物益智Alpinia oxyphylla Miq.的果实,收载于《中国药典》2015版,为卫生部101个首批药食同源品种,为我国四大南药之一。益智具有补肾、摄唾、固精、缩尿的功效。按照“脑为髓海”的说法,我们查阅文献发现,补肾药物多有神经保护、提高智力的作用。而益智仁,民间称谓“益智”,有用于提高记忆力的记载。因此,我们对益智中有效成分进行提取分离鉴定和神经保护药效筛选,并进行机制探讨。我们从益智仁中提取了白杨素、圆柚酮、杨芽黄素等6种主要成分。采用我们课题组前期构建启动子筛选模型进行初筛的结果显示:白杨素的最佳浓度是1μM,可以将NF (神经因子)启动子上调2.21倍。圆柚酮的最佳浓度是1μM,可以将NF启动子上调2.3倍。杨芽黄素的最佳浓度是1μM,可以将NF启动子上调1.6倍。在此基础上我们以大鼠骨髓间充质干细胞(rMSCs)为模型细胞进行神经保护功能的进一步验证。实时定量PCR的结果显示,白杨素、圆柚酮这2种单体在1μM的浓度下,均能够一定程度上促进五种神经标志物的转录水平,并体现出一定的剂量依赖性。在给药72h的时候mRNA的转录水平达到高峰,效果优于阳性对照(全反式维甲酸)。免疫荧光的实验表明,在骨髓间充质干细胞被诱导72h的时候,五种神经标志物所对应的蛋白也均被检测到。由此可见,这两种化合物具有一定的诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的能力。本研究通过筛选,初步确认了来自中药益智仁的两种可以诱导干细胞向神经细胞分化的单体化合物,初步确认了益智的神经保护、其可能促进神经再生的药效物质基础,为来自中药的小分子化合物快速筛选提供了新方法,为中药现代化和益智仁质量标准提高提供了参考。
【学位单位】：西南交通大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

不同种类外界诱导剂存在的培养条件下，骨髓间充质干细胞有向脂肪细胞、软骨细胞分化的潜能。２００６年，国际干细胞库定下了间充质干定最低标准：（１）在标准培养条件下能够贴壁生长。（２）能够表达表面抗原??１０５、ＣＤ９０、ＣＤ７３、ＣＤ４４、ＣＤ２９；不表达表面抗原?ＣＤ４５、ＣＤ３４、ＣＤ１４ｌｌｂ、ＣＤ７９ａ或ＣＤ１９、ＨＬＡ－ＤＲ。（３）能够在特定的培养条件下被诱导分肪细胞、成骨细胞、软骨细胞。骨髓间充质干细胞分化的条件分别如下２．１成骨细胞??成骨细胞诱导培养基配制条件如下：ＤＭＥＭ低糖培养基中，按照下述浓同的诱导因子：２０ｎｍｏｌ／ＬＰ－甘油隣酸二钠、ｌｎｍｏｌ／Ｌ地塞米松、５０｜ｉｇ／ｍ血酸－２－磷酸。每３ｄ吸去旧的培养基换成新的培养基，共诱导培养２１?ｄ成后，用碱性磷酸酶（ＡＫＰ）染色法检测被诱导的细胞钙化程度，从而判能否表现成骨细胞的功能［５２］。??

用碱性磷酸酶（ＡＫＰ）染色法检测被诱导的细胞钙化程度，从而判定该??细胞能否表现成骨细胞的功能［５２］。??＿??图１－２?ＡＩＣＰ染色向成骨细胞分化的骨髓间充质干细胞??

养基换成新的培养基，共诱导培养２１?＆５２］。诱导完成后，用甲苯胺蓝染色法检??测软骨化程度，从而判定该细胞能否表现软骨细胞的功能［５３］。??图１－３甲苯胺蓝染色向软骨细胞分化的骨髓间充质干细胞??１．４．２．３脂肪细胞??按照下述浓度配制脂肪细胞诱导培养基：０．５?ｐｍｏｌ／Ｌ地塞米松、０．５ｎｍｏｌ／Ｌ吲??味美辛、〇．５ｍｍｏｌ／Ｌｉｓｏｂｕｔｙｌ－ｍｅｔｈｙｌ－ｘａｎｔｈｉｎｅ，加入?ＤＭＥＭ低糖培养基中。每３ｄ??吸去旧的培养基换成新的培养基，共诱导培养２１?ｄ。诱导完成后，用油红０染??色法检测细胞内的脂肪滴，从而判断该细胞能否具有积累脂肪的能力１５２］。??
【参考文献】

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1 Abiodun Humphrey Adebayo;;Oxyphyllones A and B,novel sesquiterpenes with an unusual 4,5-secoeudesmane skeleton from Alpinia oxyphylla[J];Chinese Chemical Letters;2009年08期

2 吴志奎;王蕾;方素萍;刘咏梅;王文娟;王蕾;陈玉英;李敏;柴立民;张冲;吕鑫霞;李成军;姜葆华;陈智松;;中医肾生髓理论在抗衰老与临床实践中的应用[J];医学研究杂志;2009年04期

3 徐俊驹;谭宁华;曾广智;韩洪金;黄火强;嵇长久;朱梅菊;张玉梅;;益智仁化学成分的研究[J];中国中药杂志;2009年08期

4 李林;魏海峰;张兰;楚晋;赵玲;;中医“肾生髓,脑为髓海”现代生物学基础探讨[J];中国中药杂志;2006年17期

5 嵇志红,于新宇,张晓利,韩慧,张伟,汪永富;益智仁水提取物对东莨菪碱所致记忆获得障碍大鼠的干预效应[J];中国临床康复;2005年28期

6 王平,马作峰,刘萍;中老年记忆力减退的中医病机探析[J];中国中医基础医学杂志;2003年05期

7 庄剑青,郭瑞新,曾兆麟,王星禹,蔡承妹;“肾生髓”与神经系统功能关系的实验观察[J];中国中医基础医学杂志;2002年11期

8 钟恒亮,王荔萍,陈力;益智仁口服液镇静催眠作用实验研究[J];贵阳医学院学报;2002年02期

9 朱爱华,田金洲,杨惠民,邹忆怀,刘峘,杨承芝,盛彤,钟剑,韩丽蓓;健脑安改善老年人记忆减退症状的对照研究[J];中国中药杂志;2002年01期

10 罗秀珍,余竞光,徐丽珍,李克明,潭沛,冯锦东;中药益智化学成分的研究[J];药学学报;2000年03期

本文编号：2866549