蓝莓叶活性成分及体外保健功能研究

发布时间：2020-11-04 06:55

　　 本论文对同一季节不同品种及不同季节不同品种蓝莓叶的活性成分及体外保健功能进行了系统评价,并对蓝莓叶活性多酚和多糖的分离纯化、结构鉴定及作用机理进行了研究,为蓝莓叶资源的开发利用提供科学依据。主要研究方法及结果如下:(1)选取同一季节12个品种蓝莓叶为材料,以总糖和总酚含量、α-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶及胰脂肪酶抑制率、胆酸盐结合率、DPPH·清除率为指标,对其活性成分含量和体外保健功效进行了系统评价。结果表明,不同品种中'杰兔'叶的总酚含量最高,为(12.85±0.18)%;'明星'叶的总糖含量最高,为(8.90±0.12)%。相同浓度提取液条件下,'泽西'和'钱德勒'叶抑制α-葡萄糖苷酶最好;‘奥尼尔'叶抑制α-淀粉酶最好;'薄雾'叶抑制胰脂肪酶和结合胆酸钠能力最高;'明星'叶结合牛磺胆酸钠能力最好;'杰兔'和'蓝雨'叶清除DPPH·能力最好。(2)选取不同季节4个品种蓝莓叶为材料,以原花青素、黄酮和总糖含量、DPPH·、ABTS+·和·OH清除率为指标,对其功效成分含量及活性进行比较。结果表明,从春、夏、秋到冬季,4个品种蓝莓叶中原花青素、黄酮和总糖含量皆呈逐步增加的趋势。其中冬季‘蓝雨'叶的原花青素含量最高,为(14.14±0.03)%;冬季'杰兔'叶的黄酮含量最高,为(1.62±0.02)%;冬季'薄雾'叶的总糖含量最高,为(15.42±0.06)%。抗氧化能力测定结果表明,冬季'杰兔'叶多酚粗提液和多糖溶液的DPPH·清除能力显著性最好,秋季‘杰兔'叶多酚粗提液、秋季'薄雾'叶和夏季'蓝雨'叶多糖溶液的ABTS+·的清除能力显著性最好;秋季'蓝雨'叶多酚粗提液和秋季'薄雾'叶粗多糖溶液的.OH的清除能力显著性最好(P0.05)。另外,在试验浓度范围内,抗氧化活性与多糖浓度呈线性依赖关系;抗氧化活性与原花青素及黄酮含量存在较大的正相关性,且与黄酮含量的相关性更大(相关系数r皆大于0.75)。(3)选取'杰兔'蓝莓叶为材料,采用乙醇浸提、有机溶剂分级萃取、硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析等分离方法,并结合活性跟踪法对蓝莓叶多酚进行分离纯化。利用核磁共振谱、质谱分析技术鉴定活性成分的结构。结果显示,正丁醇萃取物(LBF)有最高的清除DPPH·、抑制α-葡糖苷酶和α-淀粉酶活性,其IC5o值分别为(11.08±0.21)μg/mL、(9.60±0.21)μg/mL 和(176.64±5.53)μg/mL。乙酸乙酯萃取物(LEAF)有最高的抑制胰肪脂酶和结合胆酸盐活性,其IC50值分别为(0.59±0.01)mg/mL、(1.87±0.11)mg/mL(结合胆酸钠)和(3.23±0.03)mg/mL(结合牛磺胆酸钠)。从LEAF和LBF中分别纯化得到7个和4个化合物,鉴定为β-谷甾醇(C1)、槲皮素-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖苷(C3)、槲皮素(C4)、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡糖苷(C6)、1-O-咖啡酰基奎宁酸(C7)、槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯糖(C8)和槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(C11),其余化合物结构有待进一步鉴定。化合物C1,C3,C7和C8为首次从蓝莓叶中分离得到。对上述单体化合物进行活性研究,结果表明,C1、C4和C5有较好的α-葡萄糖苷酶抑制活性;C1、C3、C4、C6、C7和C8表现出了不同强度的胰脂肪酶抑制活性,其中C4能力最强,且强于阳性对照-奥利司他;C1、C4、C5、C7和C8有较好的DPPH·清除能力,其中C4强于阳性对照-VC,C7与VC能力相当。进一步研究C4对胰脂肪酶的抑制类型和其动力学特征,其对酶-底物络合物的抑制常数Ki’为0.32 mmol/L,对游离酶的抑制常数Ki为0.88mmol/L,为混合型可逆抑制。(4)选取'杰兔'蓝莓叶为材料,采用Sevage法、膜分离法、DEAE离子交换和Sephadex G-100凝胶柱层析等分离方法,并结合活性跟踪法对蓝莓叶多糖进行提取、分离纯化及结构分析。结果显示,从蓝莓叶粗多糖中分离得到BLP1-BLP4四个多糖组分,BLP3显示出最好的清除DPPH·和α-葡萄糖苷酶抑制能力。BLP3纯化后得均一多糖(BLP3-1),测得其重均分子量Mw为54192Da,数均分子量Mn为4880Da,Z均分子量Mz为1.19×108Da。红外光谱对BLP3-1的特征官能团进行了分析,PMP衍生化后反相高效液相色谱法测得BLP3-1由半乳糖醛酸、半乳糖、木糖、阿拉伯糖和岩藻糖五种单糖组成。
【学位单位】：浙江师范大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R284;R285
【部分图文】：

?夏秋冬??季节??图３．３不同季节、不同品种蓝莓叶的总糖含量??Ｆｉｇ．３．３?Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｏｆ?ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｖａｒｉｅｔｉｅｓ?ｏｆ?ｂｌｕｅｂｅｒｒｙ?ｌｅａｖｅｓ?ｉｎ?ｆｏｕｒ?ｓｅａｓｏｎｓ??２．４不同季节、不同品种蓝莓叶的抗氧化活性??２．４．１清除ＤＰＰＨ．能力??２．４．１．１多酚粗提液清除ＤＰＰＨ．能力??不同季节４种蓝莓叶多酚粗提液对ＤＰＰＨ？清除能力测定，结果如图３．４所示，在??试验浓度范围内，随着浓度的增加，对应的清除率增大，两者呈明显的量效关系，说??明蓝莓叶多酚多酚粗提液有较好的ＤＰＰＨ？清除能力。??不同季节４种蓝莓叶多酚粗提液对ＤＰＰＨ？清除率的ＩＣ５Ｑ值，如表３．１所示。由表??可知，对同一品种在不同季节，‘杰兔’、‘薄雾’和布里吉塔’叶的ＩＣ５〇值从春季到冬季??均呈现减小的趋势，即从春季到冬季对ＤＰＰＨ？清除能力逐渐增强。而‘蓝雨’叶在夏季??和秋季的ＩＣ５Ｇ值显著小于春季和冬季，即在夏季和秋季的能力显著较强〇Ｐ＜０．０５）。对??同一季节不同品种，在春季‘杰兔’和‘薄雾’叶的ＩＣ５（）值显著小于其它２品种，ｇ卩‘杰兔’??和‘薄雾’叶的ＤＰＰＨ？清除能力显著较强（Ｐ＜０．０５）；在夏季‘蓝雨’叶的ＩＣ５Ｇ值显著小于其??它

浓度／（吗／ｍＬ）?浓度／（ｆｉｇ／ｍＬ）??图３．５不同季节、不同品种蓝莓叶粗多糖对ＤＰＰＨ？的清除率??Ｆｉｇ．３．５?ＤＰＰＨ?ｒａｄｉｃａｌ?ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ?ｒａｔｅ?ｏｆ?ｂｌｕｅｂｅｒｒｙ?ｌｅａｖｅｓ?ｃｒｕｄｅ?ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ?ｆｒｏｍ?ｆｏｕｒ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ??ｖａｒｉｅｔｉｅｓ?ｉｎ?ｆｏｕｒ?ｓｅａｓｏｎｓ??表３．２不同季节、不同品种蓝莓叶粗多糖对ＤＰＰＨ？清酴率的ＩＣ５０值??Ｔａｂ．３．２?ＩＣ５０?ｖａｌｕｅｓ?ｏｆ?ＤＰＰＨ?ｒａｄｉｃａｌ?ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ?ｒａｔｅ?ｏｆ?ｂｌｕｅｂｅｒｒｙ?ｌｅａｖｅｓ?ｃｒｕｄｅ?ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ??ｆｒｏｍ?ｆｏｕｒ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｖａｒｉｅｔｉｅｓ?ｉｎ?ｆｏｕｒ?ｓｅａｓｏｎｓ??ＩＣ５０?（ｆｉｇ／ｍＬ）??季节???＾?ｍｗ－?ＭＭ?布里吉塔??春?５２．１２±１．０７?２７．４４±３．８?３５．８７±１．０４?３３．５６±１．３１??夏?３６．４６±１．２２?３８．６０±１．３４?３３．８４±１．８２?２４．０６±１．２９??秋?６１．１０±１．２３?２６．４９±１．１３?４９．５３±０．７３?２１．６１±０．１２??冬?２１．０７±０．４１?３０．６６±１．２４?４０．１３±３．５７?２８．７９±０．１１??ＶＣ?７．７２±０．１１??２．４．２清除ＡＢＴＳ＋．能力??２．４．２．１多酚粗提液清除ＡＢＴＳ＋？能力??不同季节４种蓝莓叶多酚粗提液对ＡＢＴＳ＋？清除能力测定结果，如图３．６所示。??由图可知

ｖａｒｉｅｔｉｅｓ?ｉｎ?ｆｏｕｒ?ｓｅａｓｏｎｓ??２．４．３．２蓝莓叶粗多糖清除．ＯＨ能力??不同季节４种蓝莓叶粗多糖对＿ＯＨ清除能力，结果如图３．９所示。在试验浓度范??围内，随着粗多糖溶液浓度的增加，其清除‘ＯＨ能力增加，且两者呈明显的量效关系，??说明蓝莓叶粗多糖溶液有较好的．０Ｈ清除能力。??不同季节４种蓝莓叶粗多糖对＿〇Ｈ清除率的ＩＣ５〇值，如表３．５所示。对同一品种??蓝莓叶在不同季节比较可知，‘杰兔’叶在冬季的ＩＣ５〇值显著小于其它三季，即冬季的??清除＿〇Ｈ能力最强；‘薄雾’叶在秋季的ＩＣ５〇值显著小于其它三季，即秋季的清除．ＯＨ??能力最强；‘蓝雨’叶在夏季的ＩＣ５Ｇ值显著小于其它三季，即夏季的清除．ＯＨ能力最强；??‘布里吉塔’叶在秋季的ＩＣ５〇值显著小于其它三季，即秋季的清除．ＯＨ能力显著最强??（Ｐ＜０．０５）。对同一季节种不同品种蓝莓叶比较可知，在春季和夏季中，‘蓝雨’叶的ＩＣ５０??值都显著小于其它品种
【参考文献】

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本文编号：2869785