茶叶（-）表没食子酸儿茶素没食子酸酯抗UVB辐射损伤作用研究

发布时间：2020-11-04 07:13

　　 皮肤是人体与环境接触并保护人体免受外界逆境因素伤害的第一道防线。日光中紫外线辐射能引起多种皮肤损伤,其中中波紫外线(UVB)能量较高,能诱发色素沉着、DNA损伤甚至皮肤癌,显得尤为关键。表没食子酸儿茶素没食子酸酯(EGCG)是茶叶中的一种生物活性物质,具有抗菌、抗病毒、抗辐射及抗肿瘤等功效。目前人们已对EGCG抗UV的作用展开了广泛研究,然而其中的许多细胞及分子生物学机制尚有待深入探索,涉及多少与EGCG发挥作用相关的信号通路亦未得知。本论文拟通过建立UVB诱导的裸鼠光损伤模型以及UVB诱导的L929细胞损伤模型,探究EGCG抗UVB辐射损伤的作用及其可能机制。获得如下主要研究结果:1.UVB辐射使引起裸鼠背部皮肤老化、产生红斑甚至表皮脱落;用0-50mg/mL的EGCG预处理对UVB辐射引起裸鼠皮肤损伤的保护作用呈现剂量依赖关系。2.EGCG预处理浓度达到10mg/mL以上时,对抑制UVB辐射诱导的裸鼠表皮角质层增厚产生显著效果。3.UVB照射导致裸鼠细胞线粒体损伤、变性,高浓度EGCG(50mg/mL)预处理对线粒体的保护作用明显,同时可抑制UVB诱导的裸鼠皮肤黑素体数量增加。4.体外小鼠成纤维细胞L929实验表明,UVB照射能诱发磷酸化P38MAPK表达上调,显著抑制细胞增殖;EGCG溶液处理可以抑制磷酸化P38MAPK表达上调,减轻UVB对细胞增殖的抑制作用。5.荧光定量PCR检测表明,UVB照射引起细胞凋亡相关基因Caspase-3、P53、C-jun、C-fos、NF-κB、Bax等表达上调;EGCG溶液处理可抑制这些细胞凋亡相关基因表达上调。表明EGCG参与细胞凋亡相关基因表达调控,减轻UVB辐射对皮肤细胞的伤害。
【学位单位】：浙江大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R285
【部分图文】：

辐射剂量时，细胞形态膨胀变圆，少数梭形，细胞数量呈减少趋势（图３．?１，?ｂ）；??４０ｍＪ／ｃｍ２辐射剂量时，细胞形态进一步异常，出现许多不规则形状，且体积明显??变小，细胞呈现聚集趋势（图３．１，ｃ）；当辐射剂量达到５０ｍＪ／ｃｍ２时，细胞形态??缩小变圆、普遍发生核浓缩（图３．２，?ｄ）；辐射剂量为６０ｍＪ／ｃｍ２时，细胞数量显??著减少，细胞体积进一步变小，核质浓缩，细胞大量死亡（图３．２，?ｅ）。??ＭＴＴ?法检测细胞增殖率显不，在?３０ｍＪ／ｃｍ２、４０ｍＪ／？ｎ２、５０ｍＪ／ｃｍ２?及?６０ｍＪ／ｃｍ２??的情况下，细胞增殖率相对空白对照均显著降低（尸＜〇．?０５）（图３．?３）。表明ＵＶＢ辐??射对细胞生长具有抑制作用，且由图可得出抑制作用随ＵＶＢ辐射剂量的提升而增??强。计箅结果显示，当辐射剂量为４０ｒａＪ／ｃｍ２时，细胞增殖率为４８．?０１％，已超过半?，??数

３．?３．?２?ＥＧＣＧ对Ｌ９２９细胞形态及增殖活性的影响??以ＥＧＣＧ处理Ｌ９２９细胞，在低浓度情况下，细胞数量未发生明显变化，细胞??形态呈现变圆趋势（图３．３，?ｂ）。随着ＥＧＣＧ浓度的提升，细胞数量开始减少。在??１５０?ｕＭ?ＥＧＣＧ条件下，细胞数量相比对照组明显减少，细胞形态呈椭圆形，仍有??少数呈梭形；当ＥＧＣＧ浓度达到２００?ｕＭ时，细胞体积进一步缩小，细胞核呈增大??趋势，细胞形态不规则，细胞趋于死亡（图３．３，?ｇ）；在高浓度条件下，ＥＧＣＧ产??生较强细胞毒性，使细胞数量显著降低，细胞体积显著变小，细胞大量死亡（图??３．?３，?ｈ，ｉ）。??检测各浓度ＥＧＣＧ处理下细胞相对增殖率，发现ＥＧＣＧ在一定范围内对Ｌ９２９??细胞增殖表现出抑制作用。当ＥＧＣＧ浓度为２５?ｕ?Ｍ时，细胞增殖率是对照的９７．?２６％，??差异不显著；当ＥＧＣＧ浓度为１００?ｙＭ及１５０ｕＭ时

?７０??ＵＶＢ辐射剂量（ｍＪ／ｃｍ２）??图３．?２不同剂量ＵＶＢ对Ｌ９２９细胞增殖活性的影响??Ｆｉｇｕｒｅ?３．２?Ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｄｏｓｅｓ?ｏｆ?ＵＶＢ?ｏｎ?Ｌ９２９?ｃｅｌｌ?ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ??３．?３．?２?ＥＧＣＧ对Ｌ９２９细胞形态及增殖活性的影响??以ＥＧＣＧ处理Ｌ９２９细胞，在低浓度情况下，细胞数量未发生明显变化，细胞??形态呈现变圆趋势（图３．３，?ｂ）。随着ＥＧＣＧ浓度的提升，细胞数量开始减少。在??１５０?ｕＭ?ＥＧＣＧ条件下，细胞数量相比对照组明显减少，细胞形态呈椭圆形，仍有??少数呈梭形；当ＥＧＣＧ浓度达到２００?ｕＭ时，细胞体积进一步缩小，细胞核呈增大??趋势，细胞形态不规则，细胞趋于死亡（图３．３，?ｇ）；在高浓度条件下，ＥＧＣＧ产??生较强细胞毒性，使细胞数量显著降低，细胞体积显著变小，细胞大量死亡（图??３．?３，?ｈ，ｉ）。??检测各浓度ＥＧＣＧ处理下细胞相对增殖率
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本文编号：2869800