北虫草总生物碱的提

发布时间：2020-11-07 07:13

　　 北虫草不仅含有丰富的氨基酸、蛋白质、维生素和微量元素等,还具有增强人体免疫力、抗肿瘤、抗疲劳等功能,是一种有很高的食用价值及药用价值的食药用真菌。试验以北虫草子实体为原料,提取、分离纯化北虫草中生物碱类化合物,并初步探究其抗氧化能力及抑菌能力,可为进一步开发和利用北虫草提供一定的参考。试验结果如下:1.试验用生物碱特有的颜色反应和沉淀反应对粗提物进行了初步的鉴定,并用紫外-可见光分光光度计和高效液相色谱仪对提取物进行了进一步的确认,通过颜色反应、沉淀反应、紫外全波段光谱图和高效液相色谱图可以初步确认粗提物中含有生物碱,并确定了其测定波长为268 nm。2.通过研究紫外-可见分光光度计直接测定法得到的图谱、稳定试验和精密度试验结果进行比较,得出直接测定法较好,适用于北虫草总生物碱的测定,此法操作简单易行;虽然很多人都在用酸性染料比色法,但是在本试验中,相对于直接测定法,酸性染料比色法操作步骤繁琐,对样品的破坏较大,不利于生物碱的收集与纯化。3.在单因素的基础上,采用响应面法对北虫草总生物碱的提取工艺进行了优化了,在提取温度为52℃,提取时间为23 min,固液比为1:5,乙醇浓度为64%的条件下,生物碱粗提液为0.79 mg/mL,与预测值0.80 mg/mL的RSD(相对标准偏差)为0.62%,表明该模型可靠,换算为提取得率为3.93 mg/g,比优化前(2.46 mg/g)提高了近1.6倍。4.通过研究五种树脂不同类型的性能,如吸附率、解吸附率、静态吸附动力学等,筛选出较为合适的树脂对生物碱进行纯化工艺研究,结果表明:732阳离子树脂比较合适用来纯化北虫草总生物碱工艺的材料。然后对732树脂进行简单的纯化工艺进行研究,结果表明:用pH为4.0的上样浓度为1.8 mg/m L,流速为2 BV/h的条件进行吸附;用0.8%的氨水、2 BV/h的流速进行洗脱,可使总生物碱纯度提高到74.71%,比纯化前(43.15%)提高了1.73倍。表明732树脂能够较好的纯化北虫草中的总生物碱。5.试验采用打孔法考察了纯化后生物碱的体外抑菌效果,采用不同浓度梯度对8种菌株进行试验,以抑菌圈直径为响应值,探究生物碱对各菌株的最小抑菌浓度。结果表明,北虫草总生物碱对各菌株的最小抑菌浓度分别为大肠杆菌20mg/mL、伤寒杆菌40 mg/mL、福氏痢疾杆菌20 mg/mL、铜绿假单胞杆菌20 mg/m L、白色念珠菌60 mg/mL。试验结果表明,北虫草生物碱具有较好的抑菌效果。6.对纯化后的生物碱进行体外抗氧化试验,包括超氧根阴离子清除能力、羟基自由基清除能力和二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基清除能力的测定。结果表明,北虫草总生物碱具有较好的体外抗氧化能力,且与其浓度呈明显的正比关系。生物碱对DPPH清除率为90.60%,对超氧根阴离子的清除率为85.46%,对羟基自由基的清除率为77.41%,在试验浓度范围内均优于二丁基羟基甲苯(BHT)的体外抗氧化能力,试验结果说明北虫草总生物碱具有较好的体外抗氧化能力。
【学位单位】：延安大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R284.2;R285
【部分图文】：

图 2-1 生物碱颜色/沉淀反应图Fig.2-1 Color and precipitation reaction of alkaloids生物碱的色谱检识反应结果外吸收光谱结果-2 可知，标品和总生物碱从最小波长 200 nm 开始就有很大的加大在 208.5 nm 和 215 nm 处就达到了最大吸光度，随后 258 nm 和 268 nm 处又有最大吸收波长。由于本实验选择的溶nm 附近对光谱有很大的吸收，从而可以排除 208.5 nm 和 21确定本次试验的目标波长是 258 nm 和 268 nm,溶剂吸收在最干扰，除去 208.5 nm 和 215 nm 最大吸收波长外还有其他较，遵循了吸收最大干扰最小的原则。由此可初步把测定生物m，同时也能初步确定提取液中含有生物碱。

图 2-2 北虫草总生物碱的紫外吸收光谱Fig. 2-2 UV absorption spectra of alkaloids from Cordyceps militarisStandard:虫草素标品 Sample:试样混合液 高效液相色谱结果 2-2 为虫草素标品的高效液相色谱图，图 2-3 为提取液的色谱图，在，保留时间基本一致，可初步判断样品和标品为同一种物质。 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 测器 A:260nm图 2-3 虫草素标品高效液相色谱图Fig.2-3 HPLC of standard

- 17 -图 3-2 北虫草总生物碱提取流程Fig.3-2 Extraction process of alkaloids from Cordyceps militaris3.1.5 总生物碱含量测定将北虫草子实体用粉碎机粉碎后过 40 目筛，准确称取 1 g 于 50 mL 离心管中，加入 10 mL 50 %乙醇酸水溶液，摇晃充分浸透虫草粉，然后于超声清洗仪中在功率为 200 W、温度为 40 ℃的条件下提取 20 min，在 5 ℃、8000 r/min 的条件下离心，取上清液，减压回收溶剂得酸水液，加入 10 mL 石油醚萃取脱脂，重复 3 次，用10 %的氨水加入到酸水液中,调节 pH 至 10~11，在 5 ℃、8000 r/min 的条件下离心
【参考文献】

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本文编号：2873615