去氢木香内酯对大鼠海马脑片氧糖剥夺损伤的保护作用及其机制研究

发布时间：2020-11-11 20:29

　　 目的:研究去氢木香内酯(dehydrocostuslactone,DHL)对离体大鼠海马脑片氧糖剥夺损伤的保护作用,并从线粒体凋亡的角度探讨其机制。方法:建立大鼠海马脑片氧糖剥夺损伤模型(oxygen glucose deprivation,OGD),将脑片随机分为空白组、模型组、Nimodipine组(10μM)、DHL低、中、高剂量组(1、5和10μM)。空白组脑片用正常aCSF孵育,持续通入95%O2/5%CO2气体。模型组、Nimodipine组、DHL低、中、高剂量组脑片在无糖aCSF中孵育,持续通入95%N2/5%CO2气体30 min后,转移到95%O2/5%CO2气体环境中复氧复糖孵育1 h。1 h后收集孵育上清液,测孵育上清液LDH的含量;脑片与2%TTC,在37℃避光孵育10 min,按各样本脑片重量加入20μl/mg的抽提液(无水乙醇:DMSO=1:1),室温密封避光抽提24 h,测490nm处吸光度值;收集各组脑片,利用Western blot技术检测脑片中Cyto-c,Apaf-1,Noxa,Mcl-1,Bcl-2,Bax,Caspase-9,Caspase-7和Caspase-3蛋白含量。Caspase抑制剂实验操作如上,脑片随机分为空白组、模型组、Nimodipine组(10μM)、Z-VAD-FMK组和Z-VAD-FMK+DHL高剂量组。实验结束后,收集各组脑片,利用Western blot技术检测脑片中Cyto-c,Apaf-1,Caspase-9,Caspase-7和Caspase-3蛋白含量。结果:1、与模型组相比,DHL低、中、高剂量组(1、5和10μM)使LDH的释放量减少(p0.05),使TTC染色的吸光度值升高(p0.05);使Bax的蛋白表达明显降低(p0.05),使Bcl-2和Mcl-1的蛋白表达明显升高;使Caspase-9,Caspase-7,Caspase-3,Cyto-c,Apaf-1和Noxa的蛋白表达明显降低(p0.05)。2、与模型组相比,Z-VAD-FMK组和Z-VAD-FMK+DHL高剂量组使Caspase-9,Caspase-7,Caspase-3,Cyto-c和Apaf-1的蛋白表达明显降低(p0.05)。结论:1、去氢木香内酯可以保护大鼠海马脑片氧糖剥夺的损伤,其保护机制可能是通过减少细胞LDH的释放量,提高线粒体呼吸酶的活性,以及下调Bax,Caspase-9,Caspase-7,Caspase-3,Cyto-c,Apaf-1和Noxa及上调Bcl-2和Mcl-1的蛋白表达来实现的。2、去氢木香内酯可能与Caspases蛋白酶抑制剂Z-VAD-FMK作用相似。
【学位单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

图 3.蛋白浓度标准曲线至合适浓度，在 96 孔板中加入 20 μL 样本；根据样品数量，制适量的 BCA 工作液，现配现用，各孔加入 200 μL BCA 工

图 4.去氢木香内酯对大鼠海马脑片氧糖剥夺损伤后 Bax 和 Bcl-2 蛋白表达的影响Fig.4.Effects of DHL（dehydrocostuslactone）on expression of Bax and Bcl-2 . A and Crepresent Western blot analysis of Bax and Bcl-2 , β-actin is shown as loading control. Band D represent quantitative analysis of expression of Bax and Bcl-2 . Values are

香内酯对大鼠海马脑片氧糖剥夺损伤后 Caspase-9 蛋白表达的ts of DHL（dehydrocostuslactone）on expression of Casnalysis of Caspase-9, β-actin is shown as loading colysis of expression of Caspase-9. Values are presented a control group:#p<0.05.Compared with OGD group:*p<0.0内酯对大鼠海马脑片氧糖剥夺损伤后 Caspase-7 蛋白表7 也称作 Mch3,ICE-LAP3 或 CMH-1，是天冬氨酸特异和 Caspase-3 共同被认为是凋亡的最终执行者。两者的发生。本实验发现与模型组比较，尼莫地平，去氢spase-7 蛋白水平均降低（p<0.05），结果见 Fig.6。
【参考文献】

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1 仝岚;张婷;秦威;;昆山市脑卒中发病的季节及年龄规律分析[J];预防医学情报杂志;2016年11期

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3 何一博;南丽红;黄枚;郑燕芳;杨澜;谢晴晴;李煌;;芍药苷对OGD海马脑片中NLRP3炎症小体介导细胞凋亡的影响[J];福建中医药;2016年02期

4 马剑波;孙恺;马冲;曹垒;赵建平;陈陆馗;;青年脑卒中研究进展[J];中华神经创伤外科电子杂志;2016年01期

5 王利苹;奉建芳;胡凯莉;;芳香开窍中药对血脑屏障通透性的调节作用及其机制研究进展[J];中国中药杂志;2014年06期

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8 何志慧;蒋莉;陈恒胜;张晓萍;;培养大鼠海马脑片模拟痫性发作后pCREB在细胞凋亡中的作用的初步研究[J];重庆医科大学学报;2012年04期

9 谈粉祥;;脑梗死的危险因素及治疗[J];职业与健康;2011年06期

10 冯彩琴;贾孟辉;贺晓慧;牛阳;刘本臣;杨东;李国辉;;《回回药方》防治脑系疾病的剂型及用药规律探析[J];宁夏医科大学学报;2011年02期

本文编号：2879698