秦皮乙素通过HIF-1α调控乏氧微环境中三阴性乳腺癌细胞干性

发布时间：2020-11-15 00:32

　　 目的考察秦皮乙素对乏氧微环境中三阴性乳腺癌细胞干性的影响。方法 Western blot法考察乏氧微环境(5%O_2-10%CO_2-85%N_2)中MDA-MB-231细胞特征,细胞增殖实验考察秦皮乙素对MDA-MB-231细胞在正常培养及乏氧培养下的影响。将培养的乳腺癌MDA-MB-231细胞分为正常组、乏氧组和秦皮乙素2.5、10、20μmol·L~(-1)组,流式细胞术、肿瘤球形成及Western blot法考察秦皮乙素对乏氧微环境中癌细胞干性的影响。结果与正常组相比,乏氧组细胞缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和干性标志物CD44的表达显著增多(P 0.01)。秦皮乙素对正常培养和乏氧培养的MDA-MB-231细胞均显示一定的抑制作用,其正常培养24 h和48 h半数抑制浓度(IC50)分别为66.87μmol·L~(-1)和28.65μmol·L~(-1),乏氧培养24 h和48 h IC50分别为40.21μmol·L~(-1)和16.09μmol·L~(-1)。与正常组比较,乏氧组CD44+/CD24-细胞比例显著升高,肿瘤球形成显著增多(P 0.01)。与乏氧组比较,秦皮乙素2.5、10、20μmol·L~(-1)组CD44+/CD24-细胞比例显著下降,肿瘤球形成减少,HIF-1α表达下调,干性相关标志物CD44、Nanog、Sox2、OCT4表达降低(P 0.05,P 0.01)。结论秦皮乙素可抑制三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231在乏氧微环境中的增殖,降低乳腺癌细胞干性,其作用机制可能与稳定HIF-1α表达,下调干性相关蛋白有关。
【部分图文】：

与正常组相比，乏氧组MDA-MB-231细胞中HIF-1α表达明显增多，干性标志物CD44的表达也显著增多，均具有非常显著差异（P<0.01），见图1。细胞增殖

秦皮乙素（0.78、1.56、3.13、6.25、12.5、25、50、100μmol·L-1）在正常培养和乏氧培养下均对MDA-MB-231细胞显示一定的抑制作用，作用48 h的细胞存活率有低于作用24 h的趋势，见图2。秦皮乙素作用24 h和48 h的IC50在正常培养下分别为66.87μmol·L-1和28.65μmol·L-1，在乏氧微环境下分别为40.21μmol·L-1和16.09μmol·L-1。根据48 h IC50结果，选择秦皮乙素浓度2.5、10、20μmol·L-1进行后续实验。CD44+/CD24-细胞比例

流式细胞检测显示，乏氧组MDA-MB-231细胞中CD44+/CD24-细胞比例较正常组明显增多（P<0.01）；秦皮乙素2.5、10、20μmol·L-1组CD44+/CD24-细胞比例显著减少，与乏氧组有显著差异（P<0.01），见图3。肿瘤球形成
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