鳄嘴花鲜药抗肾纤维化作用的实验研究

发布时间：2020-11-15 03:10

　　 目的:基于观察体外TGF-β_1诱导的HK-2细胞损伤模型,并结合鳄嘴花新鲜药物对于阿霉素诱导的肾病综合征(NS)大鼠模型的治疗作用及其相应的作用机制,评价鳄嘴花鲜药对肾纤维化的保护作用,为鳄嘴花的临床应用和进一步开发提供实验依据。方法:主要分为两大部分展开研究:(1)鳄嘴花鲜榨汁(CN)对HK-2细胞抗增殖作用的实验研究a大鼠经CN提取物连续灌胃7天,于末次给药1 h后,采用腹主动脉采血,以制备含药血清。b取对数生长期的HK-2细胞进行分组,即细胞对照组、模型对照组、CN不同浓度组及含药血清高、中、低剂量组。除了空白对照组以外,其余各组均采用TGF-β_1造模,48 h后终止造模,所有组均加入与之相对应的药物,干预48 h后终止培养,随后采用CCK-8法检测细胞的存活率及生长状态。(2)CN药液对肾病综合征保护作用的药效作用及机制研究将大鼠按体重随机分组,即空白对照组、模型对照组、醋酸泼尼松组、CN高剂量组、CN中剂量组、CN低剂量组,每组10只。除空白对照组以外,其余各组通过尾静脉注射阿霉素的方法来建立大鼠肾病综合征模型,造模第5周开始给予药物干预。分别于给药第1、2、3、4、5周,分别检测大鼠的体重、24 h尿蛋白,并于给药5周后检测血清白蛋白、尿素氮、肌酐、总胆固醇、甘油三酯、钠、钾、氯及肾脏指数等相关作用的指标;之后留取肾脏组织标本,用于做光镜的检查及免疫组化,并应用Western blotting方法观察肾脏组织中α-SMA、E-cadherin蛋白含量的表达情况的变化。结果:(1)CN提取物含药血清及CN提取物直接给药均对HK-2细胞增殖有明显抑制作用。(2)模型对照组24 h尿白蛋白含量逐渐增加,血清总胆固醇、肌酐、尿素氮、甘油三酯的含量均有所升高,并于第5周达到高峰;血清白蛋白的含量有所下降,于第5周达到最低值。(3)给药后,模型对照组24 h尿白蛋白量逐渐升高,并于造模第4周达到高峰,同一时间点的醋酸泼尼松组、CN各剂量组明显低于模型对照组,与模型对照组相比较,24 h尿白蛋白,血清白蛋白,总胆固醇,尿素氮,甘油三酯,肌酐的含量变化有统计学意义。光镜下可见模型对照组有明显损伤,与模型对照组比较,CN各剂量组的肾损伤有所改善,给予CN的各剂量组的α-SMA蛋白水平均明显降低,CN高剂量组效果更佳,E-cadherin蛋白的表达显著升高。结论:1采用分两次尾静脉注射阿霉素的方法,可以成功地复制阿霉素肾病综合征模型,且所用时间较短,与人类肾病综合征表现更为接近。2鳄嘴花可以改善肾病综合征的高蛋白尿症状,减轻肾脏损伤,延缓肾病综合征肾小管上皮转分化肾间质纤维化的进程。3鳄嘴花可以通过上调肾组织中E-cadherin蛋白含量的表达,下调α-SMA蛋白水平,抑制肾病综合征大鼠肾脏肾小管上皮细胞分化,从而延缓肾间质纤维化。
【学位单位】：广州中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

图 1 肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化（EMT）在肾间质纤维化发生发展中作用EMT 主要表现为：细胞形态的改变，E-cadherin 表达量的减少，基底膜断裂α-SMA 蛋白的重新表达，肌动蛋白微丝重组以及细胞迁移和浸润性增加。其中以细胞形态的改变、E-cadherin 含量表达的减少和α-SMA 的重新表达作为 EMT 的重要志（见图 2）。E-黏性蛋白表达的下调和α-SMA 的上调是 EMT 的特征性标志之一。

图 2 肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化（EMT）的表现鳄嘴花作为一味治疗肾脏疾病的新中药，其药效作用及作用机制鲜有报道，作用机制更是尚未明确。本文首次采用动物实验、体外细胞实验从 EMT 信号通路角度全面阐明了鳄嘴花鲜药水提取物改善阿霉素（ADR）引起的 NS 肾脏纤维化的分子机制此外，本文还从整体、细胞、分子三个层次，从细胞黏附分子α-SMA、E-cadherin 角度深入研究了鳄嘴花对肾损伤的保护作用及作用机制，为肾脏疾病的治疗提供了新的思路。本课题通过阿霉素 NS 大鼠模型，以活血药鳄嘴花为代表，考查鳄嘴花对 NS 大鼠的药效作用，并应用 Western blotting 法测定鳄嘴花对大鼠肾脏细胞黏性分子α-SMA、E-cadherin 蛋白含量表达的影响，探讨了鳄嘴花对 NS 的作用机理，是本课题的创新之处，为鳄嘴花的临床应用及发展奠定了一定的基础。

CN 高剂量组图 3 鳄嘴花对 HK-2 细胞1.3.2 鳄嘴花药液对 TGF-β1诱导 HK-2 细CN 含药血清干预 24 h、48 h、72 h 的经单因素方差分析，24 h 五组间 OD ＜0.05），五组间的均值总体比较有统计经 Dunnett’s -T3 检验，结果显示，与空白
【参考文献】

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1 王贤儿;钟希文;张文霞;汪亚飞;;基于忧遁草化学成分研究分析其抗肿瘤作用[J];中国药房;2013年43期

2 黄达;潘征;蓝景生;何金龙;韦宝敏;;瑞舒伐他汀对TGF-β1诱导的新生大鼠心脏成纤维细胞增殖及其胶原合成与分泌的作用和机制[J];中国动脉硬化杂志;2013年07期

3 朱碧红;张慧芳;陈永平;;大鼠肝纤维化组织中TGF-β1的研究[J];中国微生态学杂志;2013年02期

4 易博;徐文彤;邓盾;邓涛;;鳄嘴花叶氨基酸和微量元素分析及其化学成分研究[J];解放军药学学报;2012年05期

5 宋小乐;;TGF-β_1/Smad信号转导通路对肾间质纤维化的影响[J];南昌大学学报(医学版);2011年06期

6 杨维娜;于琳华;郭尚温;成少利;柴云;;改良阿霉素肾病大鼠模型的建立[J];西安交通大学学报(医学版);2009年04期

7 梁学书;;试述难治性肾病综合征辨治中的六大辩证关系[J];浙江中医杂志;2009年08期

8 邓跃毅;林钐;;肾脏病治疗激素抵抗与依赖的中医药应用[J];中国中西医结合肾病杂志;2009年04期

9 韩敏;徐钢;曾锐;刘蔚;;β-连环素酪氨酸磷酸化调控E-钙黏蛋白表达参与转化生长因子β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化[J];中华肾脏病杂志;2006年08期

10 王彩云,邓虹珠,李辉;胡枝子总黄酮治疗大鼠微小病变型肾病综合征的实验研究[J];中国中药杂志;2005年08期

本文编号：2884275