基于“性—效—物三元论”及“谱—效关联分析”的疏风解毒胶囊药效物质基础研究

发布时间：2020-11-17 00:21

　　 疏风解毒胶囊是依据我国知名老中医向楚贤的家传密方研制的中药新药,由虎杖、连翘、败酱草、柴胡、马鞭草、板蓝根、芦根、甘草八味药组成,具有疏风清热,解毒利咽之功,临床应用多年疗效确切,为治疗急性上呼吸道感染的重要中药品种。目前,对疏风解毒胶囊的研究多见于其临床应用及其含量测定和指纹图谱等质量控制研究,而对其药效物质基础研究尚少报道,更未见与中药“性味”关联的药效物质基础的报道。目的:基于“性-效-物”三元论,利用“谱效”研究方法,阐释疏风解毒胶囊的药效物质基础。方法:1.采用均匀设计法得到疏风解毒胶囊中8味药材的22个不同配比组,在胶囊原制备工艺的基础上,获取22个样品的冻干粉。利用UPLC-MS技术建立了22个样品的LC-MS谱库;2.疏风解毒胶囊具有疏风清热的功效,而疏风清热多通过促进机体发汗、开泄腠理来发散肌表热邪。M3乙酰胆碱受体主要分布于腺体,支配腺体分泌,与发汗密切相关。因此,利用构建的M3乙酰胆碱受体高表达的中国仓鼠卵巢癌细胞为体外药效筛选模型,选择以Ca~(2+)反应元件(NFAT-RE)为特异性启动子的萤火虫荧光素酶报告基因检测体系,测试了22个样品对M3受体的激动活性。3.疏风解毒胶囊所治疗的病症“风热证”,其病因病机相当于现代医学的上呼吸道感染,苦味能清泻火热,治疗风热证,与其抗炎作用有关。因此以脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞(RAW264.7)为实验炎症模型,随机分为地塞米松阳性药组、空白对照组、模型组及22个样品给药组,每组至少3个重复。采用ELISA法对细胞上清液中的TNF-α和IL-6进行检测,4.以22个不同配比疏风解毒样品中44个成分的相对峰面积为自变量,以其对M3受体的激动率及对LPS诱导的IL-6、TNF-α炎症因子的抑制率为因变量,使用Matlab 7.13结合ga工具箱进行模型研究,采用BP-神经网络算法,并对于模型隐含层神经元个数和训练算法进行筛选和对比研究,运用遗传算法对模型参数进行寻优完成谱效关系建模,对“谱”和“效”进行关联分析。结果:运用Markerlynx软件对22个样品的正、负模式数据进行峰提取、峰匹配以及PCA分析,得44个特征峰的相对峰面积,作为后续谱效分析实验的自变量。获取疏风解毒不同配比的22样品对M3受体的激动率药效数据以及抗炎药效数据。通过建立的最佳人工神经网络模型,计算得到16个特征峰对M3受体的激动活性影响最大,14个特征峰与抗炎活性关系密切,可能为其关键药效成分。结论:本文基于“性-效-物”三元论及“谱-效”关联分析初步明晰了疏风解毒胶囊“疏风解表”、“清热解毒”的药效物质基础,为疏风解毒胶囊的“药性-药效-物质基础”研究奠定了基础,为其质量标志物(Q-Marker)的确定提供了依据。
【学位单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R286.0;R285
【部分图文】：

天津医科大学硕士学位论文效-物质基础进行关联研究，以阐释其药性药效物质基础。研究目的、方法本研究首先利用均匀设计法得到疏风解毒胶囊 8 味药材不同配比的 22 个组合样品；然后利用 LC-MS 获取 22 个样品的谱库；选择与其传统功效“疏风解表（辛）”和“清热解毒（苦）”相关的两个体外药效模型，即 M3 受体激动模型和 LPS 诱导的 RAW264.7 炎症模型进行 22 个样品的药效学评价；最后利用人工神经网络分析（ANN）等数理统计方法对获取的图谱数据和体外活性数据进行整合分析，建立疏风解毒胶囊“谱－效关系”，筛选得到与发汗（辛）、抗炎（苦）作用密切相关成分，从“疏风解表”和“清热解毒”两方面阐释疏风解毒胶囊辛味和苦味药效物质基础，并为“性－效－物”三元论中药药效物质基础与作用机制研究提供科学依据。研究思路及技术路线如下：

硕士学位论文 一、疏风解毒胶囊 LC-M0 576 216 396 540 180 513 0 324 288 0 216 720 540 5 540 720 216 252 252 459 0 72 252 504 360 468 0 5 360 684 360 108 432 27 0 0 396 720 180 216 162 解毒胶囊原制备工艺，获取 8 味药材干膏， 各药材制备工 200g粉碎成粗颗粒，第一次加 5 倍量 70%乙醇加热回流；药渣再加 3 倍量 70%乙醇加热回流提取 1 小时，滤过乙醇并减压浓缩至稠膏，减压干燥后称量，工艺流程图见

图 1.2 板蓝根提取流程图Fig.1.2 Extraction flow chart of Isatidis radix 200g加 7 倍量的水，加热回流提取挥发油 4 小时，分取分备用。药渣和药液粗滤，滤液离心分离，上清液保存备用二次，第一次加 18 倍量水提取 2 小时，第二次加 12 倍量水滤液离心分离，合并上清液，减压浓缩至稠膏，减压干燥图 1.3。
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本文编号：2886844