白头翁醇提物诱导白血病CEM细胞凋亡及其机制的研究

发布时间：2020-11-18 07:31

　　 目的:通过体外实验研究白头翁醇提物对白血病CEM细胞生长的影响,进一步探讨其对白血病CEM细胞生长的影响机制。方法:称取白头翁饮片150 g,粉碎,70%乙醇浸泡,加热回流提取,正丁醇萃取,萃取液减压浓缩,干燥浓缩液,得固体称重。用三蒸水溶解,备用;采用CCK8实验检测不同浓度白头翁醇提物作用于CEM细胞不同时间段的抑制率;光镜技术观察不同浓度白头翁醇提物作用于CEM细胞不同时间段的形态学改变;DNA琼脂糖凝胶电泳观察白头翁醇提物作用于CEM细胞后细胞凋亡情况;采用Western blot检测不同浓度白头翁醇提物作用于白血病CEM细胞24 h、48 h、72 h后p53、Bax和Bcl-2的蛋白表达。结果:1.白头翁有效成分(白头翁皂苷)的提取率将150 g白头翁饮片粉碎,乙醇浸泡,加热回流提取,正丁醇萃取,合并萃取液,减压浓缩、干燥后得白头翁皂苷粗品8.6 g,提取率5.73%。2.白头翁醇提物对CEM细胞生长的抑制率用不同浓度的白头翁醇提物作用于CEM细胞同一时间后,随着白头翁醇提物浓度(195.3125μg/ml、390.625μg/ml、781.25μg/ml、1562.5μg/ml、3125μg/ml、6250μg/ml、12500μg/ml)的增加OD值逐渐降低,即抑制率逐渐增加;同一浓度,不同时间(24 h、48 h、72 h),随着作用时间的延长,抑制率逐渐增大。白头翁醇提物作用白血病CEM细胞24 h、48 h、72 h的IC_(50)值分别1452μg/ml、774.2μg/ml、589.6μg/ml。3.细胞形态学变化倒置显微镜下观察对照组CEM细胞生长状况良好,细胞外形圆润,大小均匀,细胞密集,并出现抱团现象,饱满透亮,折光率好;使用不同浓度白头翁醇提物作用于CEM细胞可见细胞出现不同程度的生长密度偏低,细胞大小不一、细胞体积变小,出现细胞残渣、碎片,折光率较差等;使用不同浓度白头翁醇提物作用于CEM细胞24 h、48 h、72 h后,油镜下观察细胞结构的变化,对照组细胞呈现大而圆的细胞核,核浆比例失调,细胞膜完整;加药组细胞出现不同程度的细胞膜皱缩破损,染色质凝聚,细胞核裂解,部分有似凋亡小体的出现。4.DNA琼脂糖凝胶电泳观察凋亡条带白头翁醇提物(6250μg/ml、3125μg/ml、1562.5μg/ml、781.25μg/ml,390.625μg/ml)作用于CEM细胞后,提取不同时间段(24 h、48 h、72 h)的DNA,DNA琼脂糖凝胶电泳结果显示,加药组DNA均在10000 bp以上出现条带,即在180 bp~200 bp的整数倍出现条带,说明细胞发生凋亡;对照组DNA仅有一条大分子条带,说明对照组细胞未发生凋亡。5.p53、Bax和Bcl-2蛋白的表达Western blot实验显示用白头翁醇提物浓度为390.625μg/ml、781.25μg/ml、1562.5μg/ml、3125μg/ml、6250μg/ml处理CEM细胞24 h、48 h、72 h后,以β-actin条带做参照下,结果可见:同一时间段,加药组的p53、Bax蛋白的表达均比对照组(未加药)多,且随着白头翁醇提物浓度的增加p53、Bax蛋白的表达增多(P0.05或P0.01);加药组的Bcl-2蛋白的表达均比对照组(未加药)少,且随着药物浓度的增加Bcl-2蛋白的表达减少(P0.05或P0.01);同一药物浓度,随着时间的延长,p53、Bax蛋白的表达逐渐增多(P0.05或P0.01),Bcl-2蛋白的表达逐渐减少(P0.05或P0.01)。结论:1.白头翁醇提物能抑制白血病CEM细胞的生长。2.白头翁醇提物对白血病CEM细胞生长的抑制是通过诱导细胞凋亡来实现的。3.白头翁醇提物诱导白血病CEM细胞凋亡的可能机制是通过调控细胞凋亡信号通路线粒体途径中相关蛋白的表达:(1)下调Bcl-2蛋白的表达,上调Bax蛋白的表达,使Bcl-2/Bax的比值下降;(2)上调p53蛋白的表达,激活下游Bax蛋白表达,抑制Bcl-2蛋白表达,从而促进细胞凋亡。
【学位单位】：江西中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

胞膜皱缩破损，染色质凝聚，细胞核裂解，部分有似凋亡小体的出现(图 15-17、图 19-21、图 23-25)。图2 对照组CEM细胞24 h，细胞有凸起，折光性好；×100图3 781.25 μg/ml白头翁醇提液作用于 CEM 细胞 24 h，部分细胞有凸起，折光性一般；×100图 5 12500 μg/ml 白头翁醇提液作用于 CEM 细胞 24 h，细胞数目减少，体积减小，有细胞残渣；×100图6 对照组CEM细胞48h，细胞有凸起，折光性好；×100图 4 3125 μg/ml 白头翁醇提液作用于 CEM 细胞 24 h

图2 对照组CEM细胞24 h，细胞有凸起，折光性好；×100图3 781.25 μg/ml白头翁醇提液作用于 CEM 细胞 24 h，部分细胞有凸起，折光性一般；×100图 5 12500 μg/ml 白头翁醇提液作用于 CEM 细胞 24 h，细胞数目减少，体积减小，有细胞残渣；×100图 4 3125 μg/ml 白头翁醇提液作用于 CEM 细胞 24 h，细胞数目减少，体积大小不均，折光性较差；×100

图 5 12500 μg/ml 白头翁醇提液作用于 CEM 细胞 24 h，细胞数目减少，体积减小，有细胞残渣；×100图6 对照组CEM细胞48h，细胞有凸起，折光性好；×100图 4 3125 μg/ml 白头翁醇提液作用于 CEM 细胞 24 h，细胞数目减少，体积大小不均，折光性较差；×100图 7 781.25 μg/ml 白头翁醇提液作用于CEM细胞48 h，细胞有凸起，折光性一般；×100
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本文编号：2888476