七叶皂苷钠改善脑出血小鼠神经及血脑屏障功能作用及机制

发布时间：2020-11-18 09:58

　　 目的:研究七叶皂苷钠(Escin)改善脑出血(ICH)小鼠神经及血脑屏障(BBB)功能作用及机制。方法:1.雄性CD-1小鼠随机分为假手术组、模型组。脑立体定位仪在小鼠右侧基底核注射Ⅶ型胶原酶制备脑出血模型,造模完成后尾静脉注射给予七叶皂苷钠(0.45mg/kg),检测给药0.5 h、2 h、6 h、12 h后小鼠血药浓度以及脑组织七叶皂苷钠浓度。2.雄性CD-1小鼠随机分为假手术组、模型组、七叶皂苷钠(0.45 mg/kg)组、七叶皂苷钠(0.9 mg/kg)组、七叶皂苷钠(1.8 mg/kg)组。制备脑出血模型,24 h、72 h后,Carcia Test行为学实验评价小鼠神经功能;干湿重法检测脑水含量;检测脑组织内伊文思蓝含量评价小鼠血脑屏障通透性;ELISA试剂盒检测小鼠血清IL-1β水平。3.雄性CD-1小鼠随机分为假手术组、模型组、七叶皂苷钠(0.9 mg/kg)组、七叶皂苷钠(0.9 mg/kg)+IL-1β(10 ng/m L)组。制备脑出血模型,24 h后,Carcia Test行为学实验评价小鼠神经功能;干湿重法检测脑水含量;检测脑组织内伊文思蓝含量评价小鼠血脑屏障通透性;ELISA试剂盒检测小鼠血清IL-1β水平;Western blot方法检测小鼠脑组织Rho A、ROCK1、IκBα、核NF-κB、胞质NF-κB、Occludin、Claudin-5蛋白表达水平。结果:1.注射七叶皂苷钠0.5 h后假手术组及模型组小鼠血清中检测到七叶皂苷钠,随着给药时间延长,血药浓度降低,12 h后,仍可以检测到七叶皂苷钠;注射七叶皂苷钠后,假手术组及模型组小鼠出血侧及非出血侧脑组织均未检测到七叶皂苷钠。2.脑出血24 h、72 h后,与假手术组相比,模型组小鼠Garcia Test分值明显降低(P0.01);与模型组相比,七叶皂苷钠组小鼠Garcia Test分值明显升高(P0.05或P0.01)。模型组小鼠右侧基底核脑水含量明显升高(P0.05或P0.01);应用七叶皂苷钠后小鼠脑水含量明显降低(P0.05或P0.01)。与假手术组相比,模型组小鼠右侧脑半球伊文思蓝含量明显升高(P0.01);七叶皂苷钠可降低小鼠出血侧脑半球伊文思蓝含量(P0.05或P0.01)。与假手术组比,模型组小鼠血清IL-1β水平明显升高(P0.01);与模型组相比,七叶皂苷钠组小鼠血清IL-1β水平明显降低(P0.05或P0.01)。3.脑出血24 h后,与七叶皂苷钠组相比,七叶皂苷钠+IL-1β组小鼠Garcia Test分值明显降低(P0.01);小鼠右侧基底核脑水含量、伊文思蓝含量明显升高(P0.05);同时,七叶皂苷钠+IL-1β组小鼠血清IL-1β水平明显升高(P0.05)。Western blot结果显示,与假手术组比,模型组小鼠Rho A、ROCK1、核NF-κB、Occludin、Claudin-5蛋白表达水平明显升高(P0.05或P0.01),IκBα、胞质NF-κB蛋白表达水平明显降低(P0.05或P0.01);与模型组相比,七叶皂苷钠组小鼠Rho A、ROCK1、核NF-κB、Occludin、Claudin-5蛋白表达水平明显降低(P0.05),IκBα、胞质NF-κB蛋白表达水平明显升高(P0.05);与七叶皂苷钠组相比,七叶皂苷钠+IL-1β组小鼠Rho A、ROCK1、核NF-κB、Occludin、Claudin-5蛋白表达水平明显升高(P0.05),IκBα、胞质NF-κB蛋白表达水平明显降低(P0.05或P0.01)。结论:七叶皂苷钠不能透过血脑屏障;七叶皂苷钠可改善脑出血小鼠神经及血脑屏障功能,其作用机制与抑制脑出血所致的外周炎症,降低血液循环IL-1β水平,调节中枢IL-1β/Rho A/NF-κB信号通路有关。创新点:明确了七叶皂苷钠不能透过血脑屏障;明确了七叶皂苷钠可改善脑出血小鼠脑神经及血脑屏障功能,其作用机制与七叶皂苷钠抑制脑出血所致外周炎症、调节IL-1β/Rho A/NF-κB信号通路有关。
【学位单位】：烟台大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R285.5
【文章目录】：
摘要
Abstract
符号说明
1 前言
    1.1 脑出血的介绍
        1.1.1 脑出血概述
        1.1.2 脑出血动物模型
    1.2 脑出血的发病机制
        1.2.1 高血压
        1.2.2 淀粉样血管病
        1.2.3 抗凝血药
        1.2.4 动脉瘤
        1.2.5 海绵状血管畸形
    1.3 脑出血与炎症
    1.4 脑出血与血脑屏障
    1.5 七叶皂苷钠的药理作用
2 七叶皂苷钠血药浓度及脑组织浓度
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验动物
        2.1.2 实验药品
        2.1.3 实验试剂
        2.1.4 实验仪器
        2.1.5 药品与试剂配制
    2.2 实验原理及方法
        2.2.1 实验分组
        2.2.2 脑出血模型制备
        2.2.3 观察指标及测定方法
    2.3 统计学处理方法
    2.4 实验结果
        2.4.1 七叶皂苷钠血药浓度及脑组织浓度
    2.5 小结
3 七叶皂苷钠对脑出血后神经及血脑屏障功能的影响
    3.1 实验材料
        3.1.1 实验动物
        3.1.2 实验药品
        3.1.3 实验试剂
        3.1.4 实验仪器
        3.1.5 药品与试剂配制
    3.2 实验原理及方法
        3.2.1 实验分组
        3.2.2 脑出血模型制备
        3.2.3 观察指标及测定方法
    3.3 统计学处理方法
    3.4 实验结果
        3.4.1 七叶皂苷钠对ICH小鼠神经功能的影响
        3.4.2 七叶皂苷钠对ICH小鼠脑水肿程度的影响
        3.4.3 七叶皂苷钠对ICH小鼠血脑屏障通透性的影响
        3.4.4 七叶皂苷钠对ICH小鼠血清IL-1β水平的影响
    3.5 小结
4 七叶皂苷钠改善脑出血小鼠神经及血脑屏障功能作用机制
    4.1 实验材料
        4.1.1 实验动物
        4.1.2 实验药品
        4.1.3 实验试剂
        4.1.4 实验仪器
        4.1.5 药品与试剂配制
    4.2 实验原理及方法
        4.2.1 实验分组
        4.2.2 脑出血模型制备
        4.2.3 观测指标及检测方法
    4.3 统计学处理方法
    4.4 实验结果
        4.4.1 IL-1β对七叶皂苷钠改善ICH小鼠神经功能作用的影响
        4.4.2 IL-1β对七叶皂苷钠减弱ICH小鼠脑水肿程度的影响
        4.4.3 IL-1β对七叶皂苷钠改善ICH小鼠血脑屏障通透性的影响
        4.4.4 IL-1β对七叶皂苷钠降低ICH小鼠血清IL-1β水平的影响
        4.4.5 七叶皂苷钠对ICH小鼠RhoA蛋白表达水平的影响
        4.4.6 七叶皂苷钠对ICH小鼠ROCK1 蛋白表达水平的影响
        4.4.7 七叶皂苷钠对ICH小鼠IκBα蛋白表达水平的影响
        4.4.8 七叶皂苷钠对ICH小鼠核NF-κB蛋白水平的影响
        4.4.9 七叶皂苷钠对ICH小鼠胞质NF-κB蛋白水平的影响
        4.4.10 七叶皂苷钠对ICH小鼠Occludin蛋白表达水平的影响
        4.4.11 七叶皂苷钠对ICH小鼠Claudin-5 蛋白表达水平的影响
    4.5 小结
5 讨论
6 结论
参考文献
攻读学位期间公开发表的论文目录
致谢

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本文编号：2888592