齐墩果酸(Oleanolic acid,OLA)是一种三萜类有机化合物,常以游离酸或苷元的形式分布于自然界的多种植物中,具有保肝降酶、抗炎、免疫调节、降血糖血压、抗心律失常、抑制血小板聚集和抗多氧化、抗肿瘤、抗HIV病毒等多种药理作用。根据生物药剂分类系统(BCS,biopharmaceutics clas-sification system),其属于IV类,具有较低的渗透性和溶解性,限制了其临床应用与开发。为改善齐墩果酸的溶出度,增加其在体内的吸收,本研究应用固体分散技术,以聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和聚乙烯己内酰胺-聚乙酸乙烯酯-聚乙二醇接枝共聚物(Soluplus)为载体,采用溶剂蒸发法和微波冷淬法制备复合载体固体分散体;以累积溶出度为评价指标,考察不同制备方法、两种载体之间的比例、药物与载体的比例等因素对齐墩果酸的增溶作用,最终确定最佳制备工艺,并进行相关质量评价;通过大鼠灌胃给药的方式研究齐墩果酸复合载体固体分散体的药代动力学,比较其与原料药及单一载体固体分散体的药代动力学参数的差异。目的:建立测定齐墩果酸含量及齐墩果酸固体分散体溶出度的分析方法;采用溶剂蒸发法和微波冷淬法制备固体分散体,筛选最佳制备工艺及处方,并对其进行相关质量评价;建立超高效液相-质谱联用(UPLC-MS/MS)法测定大鼠血浆中齐墩果酸含量的方法,对齐墩果酸固体分散体的药代动力学进行相关研究。方法:1采用高效液相色谱(HPLC)法测定齐墩果酸固体分散体的含量及齐墩果酸固体分散体溶出度,并进行方法学考察;通过对溶出介质浓度、取样时间、投药方式、转速等条件的考察,筛选出齐墩果酸固体分散体的溶出条件。2溶剂蒸发法和微波冷淬法分别制备齐墩果酸复合载体固体分散体,以累积溶出度为指标,应用单因素试验考察药物-载体比例和载体之间比例,在此基础上,采用正交设计试验优化处方工艺,最终确定最佳制备工艺。3采用X射线衍射(X-RD)、电子显微镜扫描(SEM)、红外光谱分析(IR)及差示扫描量热分析(DSC)等方法,对齐墩果酸原料药、载体、物理混合物及固体分散体进行物相鉴别;同时对齐墩果酸原料药及固体分散体的油水分配系数、稳定性等进行分析。4建立UPLC-MS/MS测定大鼠血浆中齐墩果酸含量的方法,并进行方法学考察;选用大鼠为试验对象,通过灌胃给药方式,分别给予齐墩果酸原料药和固体分散体(单一载体固体分散体和复合载体固体分散体),研究其在大鼠体内的药代动力学特征,计算药动学参数。结果:1以HPLC法进行含量测定,检测波长为215 nm,齐墩果酸的线性范围是2~200μg/mL,标准曲线Y=6.1745X-2.7218(r=0.9998),精密度RSD为0.21%,平均加样回收率为99.47%,RSD=0.21%,稳定性良好。以HPLC法测定固体分散体的累积溶出度,回归方程为Y=6.032X-0.927(r=0.9999),在2~200μg/mL线性范围内关系良好;溶出条件:以0.3%十二烷基硫酸钠(SDS)为溶出介质,桨法,溶出介质温度(37±0.5)℃,转速100 r/min,投药方式为不装胶囊,取样时间为120 min。2以单因素试验分别考察溶剂蒸发法和微波冷淬法、药物-载体比例及载体之间比例,结果显示:溶剂蒸发法制备的齐墩果酸复合载体固体分散体,药物与载体质量比为1:7,两种载体PVP k30和Soluplus的质量比为1:2,120min的累积溶出度达到87%,明显高于原料药及物理混合物累积溶出度。而在相同比例下以微波冷淬法制备的样品,累积溶出度仅为47%。采用正交设计试验优化处方工艺,以药载比、载体之间比、旋蒸温度为影响因素,以120 min的溶出度(P)和溶出50%所用的时间(t_(1/2))的综合评分为指标,计算综合评价分值,最终确定最佳制备工艺:药载比为1:7,载体比为1:2,旋蒸温度为40℃,此结果与以单因素考察相关因素后制备的固体分散体的结果一致。3齐墩果酸固体分散体为黄白色粉末,均一,无结块。X-RD结果:齐墩果酸原料药在6o~20o的范围内显示出多个衍射峰,表明药物具有结晶性,而齐墩果酸固体分散体,衍射图缺乏特征峰,表明原料药以无定形形式分散在两种载体中;SEM结果:齐墩果酸原料药以细针状结晶形式存在,PVP k30和Soluplus为球形或类球状存在,固体分散体的显微特征与上述结构有着明显的不同,且未发现针状晶体;IR结果:齐墩果酸原料药分别在1700 cm~(-1)和3450 cm~(-1)处有较强的峰,为C=O和-OH的伸缩振动,而齐墩果酸固体分散体,在3450 cm~(-1)处的吸收峰强度显著降低,这表明,齐墩果酸固体分散体中原料药与两种载体之间可能存在氢键相互作用;DSC结果:齐墩果酸原料药在314℃处存在一个熔点峰。载体PVP k30在127℃处存在熔点峰,而Soluplus在320℃左右出现宽钝的特征熔点峰,固体分散体的热分析图中不存在原料药峰而存在载体峰。综上,推测齐墩果酸原料药以无定形状态均匀分散在两种载体中。4通过测定齐墩果酸原料药及固体分散体的油水分配系数,得出以下结论:固体分散体与原料药相比,Papp值明显减小,表明将齐墩果酸原料药制成固体分散体后,药物的水溶性明显增强,促进了齐墩果酸的体内吸收与分布。5初步稳定性研究发现,在高温(60℃)的条件下,齐墩果酸固体分散体样品粉末外观和累积溶出度都发生了改变,而样品含量变化不太明显;而在高湿(RH 90%±5%)和强光照(4500 Lx±500 Lx)的条件下,齐墩果酸固体分散体的外观形态和含量变化幅度较大,表明其稳定性易受湿度和光照强度影响。6采用UPLC-MS/MS法测定大鼠血浆中齐墩果酸的含量,血浆样品中齐墩果酸的线性范围是1~1200 ng/mL,标准曲线方程为:Y=337.98453X+12190.30630(r=0.99706)最低定量限为1 ng/mL;QC样品准确度100.1~101.4%,精密度RSD3.97%;齐墩果酸基质效应范围为93.4~99.5%,内标甘草次酸的基质效应为108.3%;提取回收率85%,稳定性良好,且所有样品RSD值都符合生物样品要求。大鼠灌胃给药后,测定血浆中齐墩果酸的浓度,结果表明:三个组达峰时间不相同,固体分散体组C_(max)是原料药组的7~11倍左右,复合载体固体分散体组的C_(max)明显高于原料药组和单一载体组;相应的,生物利用度有所增加。结论:应用溶剂蒸发法制备的复合载体齐墩果酸固体分散体,能明显提高齐墩果酸溶出度,药代动力学结果表明,应用固体分散技术制备的复合载体齐墩果酸新型制剂,能显著提高其生物利用度。
【学位单位】：承德医学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R283.6;R285
【文章目录】：中文摘要
英文摘要
中英文对照缩略词表
引言
第一部分 齐墩果酸体外分析方法的建立
前言
材料与方法
结果
附图
附表
讨论
小结
参考文献
第二部分 齐墩果酸固体分散体的制备
前言
材料与方法
结果
附图
附表
讨论
小结
参考文献
第三部分 齐墩果酸固体分散体的质量评价
前言
材料与方法
结果
附图
附表
讨论
小结
参考文献
第四部分 齐墩果酸固体分散体的药代动力学研究
前言
材料与方法
结果
附图
附表
讨论
小结
参考文献
结论
综述
参考文献
致谢
个人简历
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本文编号：
2891218
