益气活血通络方通过NGF调控JNK信号通路保护背根神经节细胞的分子机制研究
发布时间：2020-12-29 12:21
实验目的:观察益气活血通络方含药血清通过调控NGF与其受体的结合对背根神经节细胞内JNK信号通路的影响,探讨本方保护糖尿病周围神经病变的作用机制。实验方法:选取新生48h的SD大鼠,提取乳鼠的背根神经节进行原代背根神经节细胞（DRGn）培养,并采用免疫荧光技术鉴定原代培养的背根神经节细胞,将生长状况良好的原代背根神经节细胞随机分为正常对照组、高糖模型组、益气活血通络方高、中、低剂量组（其含药血清浓度分别为10%、5%和2.5%）及西药对照组共6组。除正常对照组外,其余组别均用100mmol/L高糖浓度造模,高糖环境下建立损伤模型。24h后除高糖模型组外,其余各组分别加入10%、5%和2.5%含药血清及西药对照血清继续培养24h。采用ELISA法检测DRG细胞上清中神经生长因子的表达;采用Western bolt法检测各组细胞中Trk A、P75NTR、JNK、P-JNK、Bax和Bcl-2等蛋白的表达;采用实时荧光定量PCR技术检测各组细胞中P53和Bax等基因的表达。实验结果:1.NSE免疫荧光染色法鉴定结果显示,FITC标记的NSE作为一抗在DRGn的胞浆中表达,染色发出绿色荧光,...
【文章来源】：安徽中医药大学安徽省
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
初贴壁的原代背根神经节细胞（x200）
图 2 原代培养的背根神经节细胞形态（x400）Fig2 The shape of primary cultured dorsal root ganglia cells3.2 原代培养的 DRGn 鉴定结果实验采用 NSE 免疫荧光染色法鉴定原代培养的背根神经节细胞，并用 Hochest染核，镜下观察可见如图 3 所示，FITC 标记的 NSE 作为一抗在 DRGn 的胞浆中表达，染色发出绿色荧光（图 3A）；Hochest 染核阳性，发出蓝色荧光（图 3B），两图融合后（图 3C），可计算出 DRGn 的纯度大于 95%。
图 2 原代培养的背根神经节细胞形态（x400）Fig2 The shape of primary cultured dorsal root ganglia cells的 DRGn 鉴定结果NSE 免疫荧光染色法鉴定原代培养的背根神经节细胞，可见如图 3 所示，FITC 标记的 NSE 作为一抗在 DRGn色荧光（图 3A）；Hochest 染核阳性，发出蓝色荧光 3C），可计算出 DRGn 的纯度大于 95%。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Nerve growth factor protects against palmitic acid-induced injury in retinal ganglion cells[J]. Pan-shi Yan,Shu Tang,Hai-feng Zhang,Yuan-yuan Guo,Zhi-wen Zeng,Qiang Wen. Neural Regeneration Research. 2016(11)
[2]中西医结合治疗气虚血瘀型糖尿病周围神经病变疗效观察[J]. 陈杰,张科. 四川中医. 2016(10)
[3]益气活血通络方对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞炎性因子表达的影响[J]. 王芹,申国明,王浩,何莹,尤良震,叶树,王柳,姚永传. 安徽中医药大学学报. 2016(05)
[4]益气活血通络方对糖尿病大鼠坐骨神经细胞凋亡及相关蛋白表达的影响[J]. 江爱娟,王浩,李道卫,王芹,何莹. 中华中医药杂志. 2016(08)
[5]糖尿病周围神经病变中医临床及实验研究近况[J]. 吕树泉,张淑芳,苏秀海,宋慧丽,刘爱茹. 中国实验方剂学杂志. 2016(13)
[6]糖尿病周围神经病变从络论治及其通络八法[J]. 陈俊,肖万泽,赵映前. 时珍国医国药. 2016(04)
[7]活血通络汤配合舒血宁治疗糖尿病性周围神经病变疗效[J]. 刘丛群. 糖尿病新世界. 2016(07)
[8]浅谈自拟益气活血通络方治疗糖尿病周围神经病变[J]. 龚腾芬,陈霞波. 中国乡村医药. 2016(07)
[9]益气活血通络法治疗糖尿病周围神经病变的临床研究[J]. 兰博雅,王秀阁,米佳,王国强. 中国中医药现代远程教育. 2016(06)
[10]中医辨证论治糖尿病周围神经病变研究概况[J]. 程征. 河南中医. 2016(03)
博士论文
[1]通络糖泰方对实验性糖尿病周围神经病变大鼠JNK信号转导通路的影响及机制研究[D]. 段金娜.成都中医药大学 2015
[2]槲皮素、水蛭素、桂皮醛及其复方对高糖致大鼠DRGn细胞凋亡的影响[D]. 石玥.北京协和医学院 2013
[3]炎性因子对人树突状细胞表达神经生长因子及其受体的调控作用及其信号转导机制研究[D]. 蒋应明.第二军医大学 2005
硕士论文
[1]益气活血通络法治疗糖尿病周围神经病变临床研究[D]. 程若东.北京中医药大学 2016
[2]益气活血法综合治疗2型糖尿病周围神经病变的临床研究[D]. 赵艳.北京中医药大学 2016
[3]通络糖泰方对自发性2型糖尿病GK大鼠糖尿病周围神经病变JNK表达水平的实验研究[D]. 胡芸.成都中医药大学 2015
[4]益气活血通络方对糖尿病周围神经病变患者促炎因子干预的影响的研究[D]. 刘伟花.河北医科大学 2015
[5]益气活血通络法对糖尿病周围神经病变中医证候和神经电生理的影响[D]. 赵海彬.河北医科大学 2015
[6]2型糖尿病周围神经病变证候研究[D]. 伍云洲.北京中医药大学 2014
[7]早期脑出血后细胞凋亡与p75NTR、TrkA的相关性研究[D]. 钟湘平.南华大学 2014
[8]益气活血通络汤治疗糖尿病周围神经病变气虚血瘀证临床疗效观察[D]. 韩佳妮.南京中医药大学 2012
[9]糖尿病周围神经病变的中医研究进展[D]. 邓林.北京中医药大学 2011
[10]益气养阴通络法治疗糖尿病周围神经病变的临床研究[D]. 杨依霖.南京中医药大学 2011
本文编号：2945629
【文章来源】：安徽中医药大学安徽省
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
初贴壁的原代背根神经节细胞（x200）
图 2 原代培养的背根神经节细胞形态（x400）Fig2 The shape of primary cultured dorsal root ganglia cells3.2 原代培养的 DRGn 鉴定结果实验采用 NSE 免疫荧光染色法鉴定原代培养的背根神经节细胞，并用 Hochest染核，镜下观察可见如图 3 所示，FITC 标记的 NSE 作为一抗在 DRGn 的胞浆中表达，染色发出绿色荧光（图 3A）；Hochest 染核阳性，发出蓝色荧光（图 3B），两图融合后（图 3C），可计算出 DRGn 的纯度大于 95%。
图 2 原代培养的背根神经节细胞形态（x400）Fig2 The shape of primary cultured dorsal root ganglia cells的 DRGn 鉴定结果NSE 免疫荧光染色法鉴定原代培养的背根神经节细胞，可见如图 3 所示，FITC 标记的 NSE 作为一抗在 DRGn色荧光（图 3A）；Hochest 染核阳性，发出蓝色荧光 3C），可计算出 DRGn 的纯度大于 95%。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Nerve growth factor protects against palmitic acid-induced injury in retinal ganglion cells[J]. Pan-shi Yan,Shu Tang,Hai-feng Zhang,Yuan-yuan Guo,Zhi-wen Zeng,Qiang Wen. Neural Regeneration Research. 2016(11)
[2]中西医结合治疗气虚血瘀型糖尿病周围神经病变疗效观察[J]. 陈杰,张科. 四川中医. 2016(10)
[3]益气活血通络方对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞炎性因子表达的影响[J]. 王芹,申国明,王浩,何莹,尤良震,叶树,王柳,姚永传. 安徽中医药大学学报. 2016(05)
[4]益气活血通络方对糖尿病大鼠坐骨神经细胞凋亡及相关蛋白表达的影响[J]. 江爱娟,王浩,李道卫,王芹,何莹. 中华中医药杂志. 2016(08)
[5]糖尿病周围神经病变中医临床及实验研究近况[J]. 吕树泉,张淑芳,苏秀海,宋慧丽,刘爱茹. 中国实验方剂学杂志. 2016(13)
[6]糖尿病周围神经病变从络论治及其通络八法[J]. 陈俊,肖万泽,赵映前. 时珍国医国药. 2016(04)
[7]活血通络汤配合舒血宁治疗糖尿病性周围神经病变疗效[J]. 刘丛群. 糖尿病新世界. 2016(07)
[8]浅谈自拟益气活血通络方治疗糖尿病周围神经病变[J]. 龚腾芬,陈霞波. 中国乡村医药. 2016(07)
[9]益气活血通络法治疗糖尿病周围神经病变的临床研究[J]. 兰博雅,王秀阁,米佳,王国强. 中国中医药现代远程教育. 2016(06)
[10]中医辨证论治糖尿病周围神经病变研究概况[J]. 程征. 河南中医. 2016(03)
博士论文
[1]通络糖泰方对实验性糖尿病周围神经病变大鼠JNK信号转导通路的影响及机制研究[D]. 段金娜.成都中医药大学 2015
[2]槲皮素、水蛭素、桂皮醛及其复方对高糖致大鼠DRGn细胞凋亡的影响[D]. 石玥.北京协和医学院 2013
[3]炎性因子对人树突状细胞表达神经生长因子及其受体的调控作用及其信号转导机制研究[D]. 蒋应明.第二军医大学 2005
硕士论文
[1]益气活血通络法治疗糖尿病周围神经病变临床研究[D]. 程若东.北京中医药大学 2016
[2]益气活血法综合治疗2型糖尿病周围神经病变的临床研究[D]. 赵艳.北京中医药大学 2016
[3]通络糖泰方对自发性2型糖尿病GK大鼠糖尿病周围神经病变JNK表达水平的实验研究[D]. 胡芸.成都中医药大学 2015
[4]益气活血通络方对糖尿病周围神经病变患者促炎因子干预的影响的研究[D]. 刘伟花.河北医科大学 2015
[5]益气活血通络法对糖尿病周围神经病变中医证候和神经电生理的影响[D]. 赵海彬.河北医科大学 2015
[6]2型糖尿病周围神经病变证候研究[D]. 伍云洲.北京中医药大学 2014
[7]早期脑出血后细胞凋亡与p75NTR、TrkA的相关性研究[D]. 钟湘平.南华大学 2014
[8]益气活血通络汤治疗糖尿病周围神经病变气虚血瘀证临床疗效观察[D]. 韩佳妮.南京中医药大学 2012
[9]糖尿病周围神经病变的中医研究进展[D]. 邓林.北京中医药大学 2011
[10]益气养阴通络法治疗糖尿病周围神经病变的临床研究[D]. 杨依霖.南京中医药大学 2011
本文编号：2945629
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