庚酮类化合物EB30诱导肺癌细胞凋亡机制的研究

发布时间：2021-02-06 18:32

　　研究目的:槲寄生植物提取物1,7-二（4-羟基苯基）-1E,4E-庚二烯-3-酮（EB30）抑制肺癌细胞增殖、促进肺癌细胞凋亡的机制研究。研究方法:本实验以肺癌细胞株A549和NCI-H292为研究对象,采用CCK-8法和RTCA法检测EB30对肺癌细胞增殖活性的影响;PI染色后利用流式细胞仪分析检测EB30对肺癌细胞周期的影响;DAPI染色法协同Annexin V/PI双染法分析EB30作用后肺癌细胞凋亡情况;采用了DCFH-DA染色法,流式细胞仪检测EB30处理细胞内ROS的含量变化;采用JC-1染料进行染色,流式细胞学观察分析EB30处理后肺癌细胞MMP的变化;Western blot实验检测EB30对于凋亡相关蛋白以及PI3K/Akt、ERK1/2信号通路蛋白的表达。结果:EB30在一定浓度范围内能够明显抑制肺癌细胞增殖,而对正常肺组织细胞不产生明显毒性,进一步研究表明EB30不仅能够诱导细胞周期阻滞、促进胞内活性氧（ROS）的大量产生,而且能够激活细胞内、外凋亡途径从而诱导肺癌细胞凋亡。此外,EB30能够上调p-ERKl/2和p-P90RSK蛋白表达,下调Akt和P70RSK... 

【文章来源】：山东大学山东省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
符号说明
1 前言
2 实验材料
    2.1 A549细胞株、NCI-H292细胞株以及HBE细胞株
    2.2 EB30化合物的获取
    2.3 实验过程使用的主要试剂
    2.4 实验相关溶液配制
    2.5 实验过程使用的主要仪器
3 研究内容及方法
    3.1 A549、NCI-H292及HBE细胞培养
    3.2 细胞复苏、传代和冻存
        3.2.1 细胞复苏
        3.2.2 细胞传代
        3.2.3 细胞冻存
    3.3 细胞活性检测
        3.3.1 CCK-8法
        3.3.2 RTCA法检测细胞活力
    3.4 细胞凋亡检测
        3.4.1 DAPI染色法
        3.4.2 Annexin V FITC/PI双染法
    3.5 细胞内活性氧（ROS）测定
    3.6 细胞周期检测
    3.7 线粒体膜电位（MMP）检测
    3.8 免疫荧光染色
    3.9 Western blot
        3.9.1 蛋白提取
        3.9.2 线粒体的分离及蛋白提取
        3.9.3 SDS-PAGE电泳
    3.10 统计学处理
4 EB30促进肺癌细胞凋亡研究内容及结果
    4.1 EB30对肺癌A549、NCI-H292细胞增殖活性的影响
    4.2 EB30诱导肺癌A549、NCI-H292细胞凋亡
        4.2.1 DAPI染色法观察EB30引起肺癌A549、NCI-H292细胞的凋亡
        4.2.2 Annexin V-FITC/PI双染法检测肺癌A549、NCI-H292细胞的凋亡
    4.3 EB30对A549、NCI-H292细胞周期的影响
    4.4 EB30诱导肺癌A549、NCI-H292细胞内ROS过量产生
    4.5 EB30降低肺癌A549、NCI-H292细胞线粒体膜电位（MMP）、促进细胞色素c释放以及AIF入核
    4.6 EB30引起凋亡相关蛋白的改变
    4.7 EB30通过调节PI3K/Akt和ERK1/2通调节肺癌细胞凋亡
5 讨论
6 结论
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表的学术论文
学位论文评阅及答辩情况表


【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3020901