基于TLR2、TLR4基因沉默探索青藤碱对小鼠DC2.4炎性因子表达的影响
发布时间：2021-02-09 07:19
目的:采用细胞质粒转染技术选择性抑制小鼠树突状细胞上的TLR2、TLR4受体蛋白表达,探索青藤碱对类风湿关节炎的抗炎机制,明确青藤碱对小鼠DC2.4调控作用的关键靶点,为治疗类风湿关节炎的实验研究提供新思路以及新药的研发提供实验依据。方法:1.针对小鼠树突状细胞上TLR2、TLR4受体蛋白,分别设计与合成重组质粒,应用细胞质粒转染技术选择性抑制TLR2、TLR4受体蛋白表达。Western blot法分别测定TLR2、TLR4蛋白表达情况,筛选出针对TLR2、TLR4蛋白最佳沉默组质粒。2.按单一和联合沉默TLR2、TLR4原则,将DC2.4细胞分为空白组、沉默TLR2空白组、沉默TLR4空白组、共沉默TLR2+4空白组、模型组、沉默TLR2模型组、沉默TLR4模型组、共沉默TLR2+4模型组、青藤碱组、沉默TLR2青藤碱组、沉默TLR4青藤碱组、共沉默TLR2+4青藤碱组、甲氨蝶呤组。除空白组、沉默TLR2空白组、沉默TLR4空白组、共沉默TLR2+4空白组外,其余各组分别加入1μg/ml的R848溶液培养24h,诱导小鼠DC2.4成熟产生免疫反应,青藤碱组、沉默TLR2青藤碱组、沉...
【文章来源】：成都中医药大学四川省
【文章页数】：126 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
干扰载体pLKD-CMV-G&PR-U6-shRNA示意图
成都中医药大学 2018 届硕士研究生学位论文载体鉴定-CMV-G&PR-U6-shRNA 大小为 8509bp，条带，大小介于 8-10kb 之间，约 8500bp限制性内切酶 Age I 酶和 EcoR I U6-shRNA 的 U6 启动子下游的 ccdB 毒性，其大小分别介于 8-10kb 与 250-500bp片段和 300bp 的 ccdB 毒性基因片段，与预der Marker 条带，对应图 4 右的：10 kb、82kb、1.5kb、1kb、750 bp、500 bp、250
重组质粒部分基因序列检测图谱
【参考文献】：
期刊论文
[1]滑膜成纤维细胞在类风湿关节炎治疗中的研究进展[J]. 吕永智. 广东医学. 2017(17)
[2]创伤性关节炎患者X线分期与患者关节液中炎症因子表达及关节功能的关系[J]. 曹英,曹勇. 国际检验医学杂志. 2017(13)
[3]甲状腺癌组织中NF-κB p65、NF-κB p50及HMGB1表达及意义[J]. 杜朝阳,陈燕玲,谌秋华. 解放军医药杂志. 2017(05)
[4]瑞喹莫德（R848）具有更强的免疫佐剂效应[J]. 沈沅,曾梦华,邱峰,唐华. 细胞与分子免疫学杂志. 2017(05)
[5]不同时期类风湿关节炎患者血清炎性因子的变化及临床意义[J]. 苏江,朱静,程佳,陈栖栖,龙丽. 中国老年学杂志. 2017(09)
[6]芍药苷对AGEs刺激下RAW264.7巨噬细胞TLR2/4通路的影响[J]. 刘超然,邵云侠,徐兴欣,王坤,吴永贵. 中国药理学通报. 2017(05)
[7]青藤碱对肝细胞癌模型大鼠肝移植术后免疫应答的影响[J]. 王欣玲,罗霞,孙建琴,邹艳,陈德森. 中国中医急症. 2017(02)
[8]类风湿关节炎治疗药物的研发进展及趋势[J]. 胡晓敏,宗英,余珊珊,袁伯俊,陆国才,王庆利. 中国新药杂志. 2017(01)
[9]Toll样受体4（TLR4）的内吞通路及其调控机制研究进展[J]. 庄宁彤,赵冬久,史丽云. 细胞与分子免疫学杂志. 2016(11)
[10]青藤碱对细菌内毒素刺激的小鼠及巨噬细胞嘌呤受体A2A、P2X7表达的影响[J]. 李景,吴阳阳,周海松,朱瑞丽,易浪,董燕,王培训. 广州中医药大学学报. 2016(01)
博士论文
[1]鸭坦布苏病毒诱导的宿主天然免疫反应及与RLR信号通路的互作研究[D]. 李宁.山东农业大学 2017
[2]青藤碱对DC2.4成熟的影响及诱导成熟DC2.4凋亡的作用机制研究[D]. 谢怡敏.成都中医药大学 2016
[3]VIP及Bay11-7082诱导耐受性树突状细胞治疗类风湿关节炎疗效和作用机制研究[D]. 吴华香.浙江大学 2015
[4]青藤碱对类风湿关节炎模型大鼠TLRs及JAK-STAT信号通路调控基因的影响[D]. 赵静.成都中医药大学 2014
硕士论文
[1]Foxp3在DC细胞中的表达及其对免疫调节作用的影响[D]. 崔大广.苏州大学 2015
[2]青藤碱诱导的imDC对同种异基因大鼠肾移植外周血Th1/Th2细胞因子的影响[D]. 陈拓.南华大学 2015
[3]青藤碱对类风湿关节炎模型小鼠BMDC表面模式识别受体TLR2/TLR4的免疫调节机制研究[D]. 王冰冰.成都中医药大学 2015
[4]基于有效成分配伍的抗炎复方优选及其对急性痛风性关节炎大鼠NLRP3、IL-1β和TGF-β1表达的影响[D]. 路占忠.河北医科大学 2015
[5]共刺激分子CD28/CTLA-4在白癜风患者外周血T淋巴细胞的表达[D]. 杜军波.郑州大学 2012
[6]可溶性PD-1分子在类风湿性关节炎患者中的表达及其临床意义[D]. 高犁.苏州大学 2012
[7]RA患者外周血miR-146a、miR-16表达与疾病活动、中医证型相关性及青藤碱制剂对其干预的研究[D]. 冯知涛.南方医科大学 2011
本文编号：3025273
【文章来源】：成都中医药大学四川省
【文章页数】：126 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
干扰载体pLKD-CMV-G&PR-U6-shRNA示意图
成都中医药大学 2018 届硕士研究生学位论文载体鉴定-CMV-G&PR-U6-shRNA 大小为 8509bp，条带，大小介于 8-10kb 之间，约 8500bp限制性内切酶 Age I 酶和 EcoR I U6-shRNA 的 U6 启动子下游的 ccdB 毒性，其大小分别介于 8-10kb 与 250-500bp片段和 300bp 的 ccdB 毒性基因片段，与预der Marker 条带，对应图 4 右的：10 kb、82kb、1.5kb、1kb、750 bp、500 bp、250
重组质粒部分基因序列检测图谱
【参考文献】：
期刊论文
[1]滑膜成纤维细胞在类风湿关节炎治疗中的研究进展[J]. 吕永智. 广东医学. 2017(17)
[2]创伤性关节炎患者X线分期与患者关节液中炎症因子表达及关节功能的关系[J]. 曹英,曹勇. 国际检验医学杂志. 2017(13)
[3]甲状腺癌组织中NF-κB p65、NF-κB p50及HMGB1表达及意义[J]. 杜朝阳,陈燕玲,谌秋华. 解放军医药杂志. 2017(05)
[4]瑞喹莫德（R848）具有更强的免疫佐剂效应[J]. 沈沅,曾梦华,邱峰,唐华. 细胞与分子免疫学杂志. 2017(05)
[5]不同时期类风湿关节炎患者血清炎性因子的变化及临床意义[J]. 苏江,朱静,程佳,陈栖栖,龙丽. 中国老年学杂志. 2017(09)
[6]芍药苷对AGEs刺激下RAW264.7巨噬细胞TLR2/4通路的影响[J]. 刘超然,邵云侠,徐兴欣,王坤,吴永贵. 中国药理学通报. 2017(05)
[7]青藤碱对肝细胞癌模型大鼠肝移植术后免疫应答的影响[J]. 王欣玲,罗霞,孙建琴,邹艳,陈德森. 中国中医急症. 2017(02)
[8]类风湿关节炎治疗药物的研发进展及趋势[J]. 胡晓敏,宗英,余珊珊,袁伯俊,陆国才,王庆利. 中国新药杂志. 2017(01)
[9]Toll样受体4（TLR4）的内吞通路及其调控机制研究进展[J]. 庄宁彤,赵冬久,史丽云. 细胞与分子免疫学杂志. 2016(11)
[10]青藤碱对细菌内毒素刺激的小鼠及巨噬细胞嘌呤受体A2A、P2X7表达的影响[J]. 李景,吴阳阳,周海松,朱瑞丽,易浪,董燕,王培训. 广州中医药大学学报. 2016(01)
博士论文
[1]鸭坦布苏病毒诱导的宿主天然免疫反应及与RLR信号通路的互作研究[D]. 李宁.山东农业大学 2017
[2]青藤碱对DC2.4成熟的影响及诱导成熟DC2.4凋亡的作用机制研究[D]. 谢怡敏.成都中医药大学 2016
[3]VIP及Bay11-7082诱导耐受性树突状细胞治疗类风湿关节炎疗效和作用机制研究[D]. 吴华香.浙江大学 2015
[4]青藤碱对类风湿关节炎模型大鼠TLRs及JAK-STAT信号通路调控基因的影响[D]. 赵静.成都中医药大学 2014
硕士论文
[1]Foxp3在DC细胞中的表达及其对免疫调节作用的影响[D]. 崔大广.苏州大学 2015
[2]青藤碱诱导的imDC对同种异基因大鼠肾移植外周血Th1/Th2细胞因子的影响[D]. 陈拓.南华大学 2015
[3]青藤碱对类风湿关节炎模型小鼠BMDC表面模式识别受体TLR2/TLR4的免疫调节机制研究[D]. 王冰冰.成都中医药大学 2015
[4]基于有效成分配伍的抗炎复方优选及其对急性痛风性关节炎大鼠NLRP3、IL-1β和TGF-β1表达的影响[D]. 路占忠.河北医科大学 2015
[5]共刺激分子CD28/CTLA-4在白癜风患者外周血T淋巴细胞的表达[D]. 杜军波.郑州大学 2012
[6]可溶性PD-1分子在类风湿性关节炎患者中的表达及其临床意义[D]. 高犁.苏州大学 2012
[7]RA患者外周血miR-146a、miR-16表达与疾病活动、中医证型相关性及青藤碱制剂对其干预的研究[D]. 冯知涛.南方医科大学 2011
本文编号：3025273
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