穿心莲内酯调控TCF-1/SOX9信号轴促进软骨肉瘤细胞凋亡的研究

发布时间：2021-05-09 18:43

　　目的:探讨穿心莲内酯（Andrographolide,Andro）诱导软骨肉瘤（Chondrosarcoma,CHS）细胞凋亡的作用机制。方法:1.采用cell20counting20kit-8（CCK-8）法、结晶紫染色法、流式细胞术、蛋白质印迹法（Western20Blotting,WB）等相关技术检测穿心莲内酯对软骨肉瘤细胞增殖,细胞周期、凋亡及相关蛋白的影响。2.采用免疫组织化学法（Immunohistochemical,IHC）检测SOX9蛋白在不同病理分级软骨肉瘤组织中的表达;WB法检测穿心莲内酯对SOX9蛋白表达的影响。3.利用RNA干扰技术在软骨肉瘤细胞中分别敲低SOX9、β-catenin、TCF-1后,检测软骨肉瘤细胞增殖情况和下游相关基因的表达。4.利用免疫荧光法、蛋白核质分离法、WB法检测穿心莲内酯对β-catenin和TCF-1蛋白细胞亚定位的影响。5.利用MG132和环己酰亚胺（Cycloheximide,CHX）处理软骨肉瘤细胞,探索穿心莲内酯对TCF-1和SOX9蛋白稳定性或者内源性蛋白合成的影响。6.采用si20RNA干扰技术、RT-PCR和WB法探索... 

【文章来源】：广州中医药大学广东省

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
引言
第一章 文献研究
    1.1 软骨肉瘤发病的分子机制
    1.2 软骨肉瘤的病理分类及临床表现
        1.2.1 软骨肉瘤的病理分类
        1.2.2 软骨肉瘤的临床表现
    1.3 软骨肉瘤的诊断
        1.3.1 软骨肉瘤的影像学诊断
        1.3.2 软骨肉瘤的病理组织学诊断
    1.4 软骨肉瘤的治疗现状
        1.4.1 软骨肉瘤的手术治疗
        1.4.2 软骨肉瘤的放射治疗
        1.4.3 软骨肉瘤的化学疗法
        1.4.4 软骨肉瘤的分子靶向治疗
        1.4.5 软骨肉瘤的中药有效活性成分治疗
第二章 实验材料和方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞及细胞培养
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要溶液及试剂的配置
        2.1.4 主要仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 免疫组织化学法(Immunohistochemical,IHC)
        2.2.2 细胞免疫荧光染色法
        2.2.3 蛋白质印迹(Westernblotting,WB)实验
        2.2.4 细胞核质蛋白分离法
        2.2.5 细胞活力实验(CCK-8)
        2.2.6 流式细胞学相关检测
        2.2.7 结晶紫染色
        2.2.8 RNA干扰敲低实验
        2.2.9 总RNA的收集与提取
        2.2.10 实时定量荧光PCR(RT-PCR)实验
        2.2.11 统计分析
第三章 实验结果
    3.1 穿心莲内酯抑制软骨肉瘤细胞生长并诱导细胞周期G2/M期阻滞
        3.1.1 穿心莲内酯减弱软骨肉瘤细胞的活力
        3.1.2 穿心莲内酯诱导软骨肉瘤细胞G2/M期阻滞
    3.2 穿心莲内酯通过Caspase-3依赖的信号通路促进软骨肉瘤细胞凋亡
        3.2.1 穿心莲内酯促进软骨肉瘤细胞凋亡
        3.2.2 穿心莲内酯激活caspase-3信号通路
    3.3 SOX9在软骨肉瘤中高表达,而且被穿心莲内酯调控
        3.3.1 SOX9在软骨肉瘤中高表达,敲低SOX9抑制软骨肉瘤细胞的生长
        3.3.2 穿心莲内酯下调SOX9的表达
    3.4 穿心莲内酯下调软骨肉瘤细胞TCF-1(非β-catenin)的表达
        3.4.1 敲低β-catenin抑制软骨肉瘤细胞的生长
        3.4.2 穿心莲内酯不影响β-catenin的表达及细胞核转位
        3.4.3 穿心莲内酯调控TCF-1蛋白的表达
    3.5 穿心莲内酯通过靶向调控TCF-1/SOX9信号轴抑制软骨肉瘤细胞的生长
        3.5.1 SOX9负反馈调节β-catenin和TCF-1的表达
        3.5.2 穿心莲内酯通过TCF-1调控SOX9的表达
第四章 讨论
结语
参考文献
附录
在校期间发表论文情况
致谢
附件


【参考文献】：
期刊论文
[1]Berberine20displays20antitumor20activity20in20esophageal20cancer20cells20in20vitro[J]. Shu-Xian Jiang,Bo Qi,Wen-Jian Yao,Cheng-Wei Gu,Xiu-Feng Wei,Yi Zhao,Yu-Zhen Liu,Bao-Sheng Zhao.  World Journal of Gastroenterology. 2017(14)
[2]穿心莲内酯及其衍生物的药理活性最新研究进展[J]. 李雪,吴东风,赵诗云,张娣.  实用中西医结合临床. 2017(02)
[3]穿心莲的药理作用及研究进展[J]. 何恩其,赵烽.  中医药导报. 2007(05)



本文编号：3177823