淫羊藿次苷Ⅱ抗氧糖剥夺/复氧复糖诱导的PC12细胞损伤作用及机制研究
发布时间：2021-07-25 14:48
目的:研究淫羊藿次苷Ⅱ（ICS Ⅱ）对氧糖剥夺/复氧复糖（OGD/R）诱导的PC12细胞损伤的作用及其作用机制。方法:通过OGD 2 h/R 24 h诱导PC12细胞氧化应激损伤在体外模拟体内脑缺血再灌注损伤,N-乙酰半胱氨酸（NAC）作为阳性对照药。将PC12细胞按药效学分组随机分为7组:空白组,空白+ICS Ⅱ 50μM组,OGD/R组,OGD/R+ICS Ⅱ 12.5μM组,OGD/R+ICS Ⅱ 25μM组,OGD/R+ICS Ⅱ 50μM组,OGD/R+NAC100μM组。采用MTT法检测细胞活力,酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞乳酸脱氢酶（LDH）漏出率及细胞活性氧（ROS）含量,Mito-SOX Red荧光染色检测PC12细胞线粒体内ROS,罗丹明123检测PC12细胞线粒体膜电位（MMP）,一步法TUNEL细胞凋亡检测试剂盒检测PC12细胞凋亡情况。通过Western blot法检测Nrf2、Keap1、HO-1、NQO-1、SIRT3、IDH2、Bax、Bcl-2蛋白表达及active-Caspase-3水平的变化。结果:OGD/R组较空白组细胞活力明显降低（P&...
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：44 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
ICSII对OGD2h/R24h诱导的PC12细胞氧化损伤的影响
were treated with ICS II (12.5, 25, and 50 μM) and NAC (100 μM) for 24 h after OGD 2 h. (A) Cell viability; (B)LDH release (C) The morphological changes. **P<0.01 vs control group;#P<0.05 vs OGD/R group;##P<0.01 vsOGD/R group; ( x ± SD, n=6).2.2 ICS II 减轻 OGD/R 诱导的细胞内和线粒体内 ROS 的产生并降低 MMP为了探究 OGD/R 能否导致 PC12 细胞内过量 ROS 蓄积以及线粒体损伤，本研究采用大鼠来源ROS ELISA试剂盒检测PC12细胞内ROS含量，Mito-SOX RedMito-tracker green 荧光双染检测线粒体内 ROS 以及罗丹明 123 检测 MMP。结果发现，OGD/R 组较空白组与空白+ICS II 50 μM 组，ROS 水平显著升高，给予 ICSII（12.5, 25, 50 μM）作用 24 h，ROS 水平明显降低，且 OGD/R 组与 OGD/R+ICSII 50 μM 组相比较具有显著差异（P＜0.01）（图 2A）。同时，OGD/R 较空白组与空白+ICS II 50 μM 组，线粒体内 ROS 水平显著升高，说明 OGD/R 能诱导线粒体 ROS 的过量产生（图 2B），给予 ICS II 后降低 OGD/R 诱导的线粒体 ROS增加并呈浓度依赖性。此外，OGD/R 组较空白组和空白+ICS II 50 μM 组，MMP显著降低，而 ICS II 或 NAC 同样呈浓度依赖性提高线粒体 MMP（图 2C）。
0.05 vs OGD/R 组 ；##P＜0.01 vs OGD/R 组；（ x ± SD, n=3）。Fig.2. Effects of ICS II on OGD 2 h/R 24 h-induced intracellular ROS production, mitochondrial ROS production and MMP in PC12 cells. The cells were treated with ICS II (12.5, 25, and 50 μM)and NAC (100 μM) for 24 h after OGD 2 h. (A) Intracellular ROS production level; (B) Mitochondrial ROS production; (C) MMP. **P＜0.01 vs control group;#P＜0.05 vs OGD/R group;##P＜0.01 vs OGD/R group; ( x ± SD,n=3).2.3 ICS II 对 OGD/R 诱导的 PC12 细胞 SIRT3 以及 IDH2 表达的影响为了确定 SIRT3 信号通路是否在 OGD/R 诱导的细胞凋亡中发挥重要作用，本研究采用 Western blot 法检测 SIRT3 及其下游基因的蛋白表达。 结果表明OGD/R 组较空白组和空白+ICS II 50 μM 组，SIRT3 蛋白水平显着降低，而 ICS II作用后可明显提高 SIRT3 的表达（P＜0.01）（图 3A，B）。此外，OGD/R 组较空白组和空白+ICS II 50 μM 组，IDH2 表达明显降低（P＜0.01）。而给予 ICS II后，IDH2 的水平显著提高（P＜0.01）（图 3C，D），此结果说明 SIRT3/IDH2信号通路参与了 ICS II 对 OGD 2 h/R 24 h 诱导的 PC12 细胞损伤的改善作用。
【参考文献】：
期刊论文
[1]丹参酮ⅡA通过PI3K/Akt/mTOR信号通路调控自噬抗内皮细胞氧化应激损伤研究[J]. 曹慧敏,宋囡,张妮,杨关林,陈文娜,张哲,贾连群. 北京中医药大学学报. 2017(11)
[2]淫羊藿次苷Ⅱ对大鼠脑缺血再灌注损伤的作用[J]. 龙隆,徐应淑,雷鸣,徐凡,龚其海,高健美. 中国新药与临床杂志. 2017(10)
[3]七氟醚后处理对大鼠脑缺血-再灌注时氧化应激和炎症反应的影响[J]. 赵丹,袁林辉,张静,张平,余鹏,肖凡,胡小玲,胡衍辉. 临床麻醉学杂志. 2017(07)
[4]缺氧缺糖/复氧复糖PC12细胞自噬的形态学变化与细胞凋亡的关系[J]. 靳晓飞,张颖,李爱英,武密山,周晓红,赵艳萌,高维娟. 中国病理生理杂志. 2016(12)
[5]基于MTT染色法对葡萄生单轴霉孢子囊存活力的检测[J]. 贾招闪,申红妙,李正楠,康兴娇,杨佳瑶,冉隆贤. 菌物学报. 2016(08)
[6]缺血性脑卒中的治疗研究进展[J]. 孟文婷,李东翔,佟玲. 中国新药杂志. 2016(10)
[7]叔丁基过氧化氢诱导人正常肝细胞系L02自噬模型的建立及其线粒体应激机制[J]. 师腾瑞,李鸽,海春旭,秦绪军. 癌变·畸变·突变. 2016(02)
[8]氧化低密度脂蛋白通过CD36介导的氧化应激诱导巨噬细胞自噬[J]. 姚树桐,李严严,刘庆华,岳峰,田华,桑慧,杨娜娜,秦树存. 中国病理生理杂志. 2015(06)
[9]异鼠李素对H2O2引起的H9C2细胞氧化应激损伤的保护作用研究[J]. 董曦,孙桂波,罗云,孙晓波,陈素红. 中国药理学通报. 2015(06)
[10]大黄素通过抑制p38 MAPK活化下调H2O2诱导PC12细胞COX-2表达的实验研究[J]. 王慧娟,冯社军,武艳强,李军涛. 西部医学. 2015(02)
本文编号：3302229
【文章来源】：遵义医科大学贵州省
【文章页数】：44 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
ICSII对OGD2h/R24h诱导的PC12细胞氧化损伤的影响
were treated with ICS II (12.5, 25, and 50 μM) and NAC (100 μM) for 24 h after OGD 2 h. (A) Cell viability; (B)LDH release (C) The morphological changes. **P<0.01 vs control group;#P<0.05 vs OGD/R group;##P<0.01 vsOGD/R group; ( x ± SD, n=6).2.2 ICS II 减轻 OGD/R 诱导的细胞内和线粒体内 ROS 的产生并降低 MMP为了探究 OGD/R 能否导致 PC12 细胞内过量 ROS 蓄积以及线粒体损伤，本研究采用大鼠来源ROS ELISA试剂盒检测PC12细胞内ROS含量，Mito-SOX RedMito-tracker green 荧光双染检测线粒体内 ROS 以及罗丹明 123 检测 MMP。结果发现，OGD/R 组较空白组与空白+ICS II 50 μM 组，ROS 水平显著升高，给予 ICSII（12.5, 25, 50 μM）作用 24 h，ROS 水平明显降低，且 OGD/R 组与 OGD/R+ICSII 50 μM 组相比较具有显著差异（P＜0.01）（图 2A）。同时，OGD/R 较空白组与空白+ICS II 50 μM 组，线粒体内 ROS 水平显著升高，说明 OGD/R 能诱导线粒体 ROS 的过量产生（图 2B），给予 ICS II 后降低 OGD/R 诱导的线粒体 ROS增加并呈浓度依赖性。此外，OGD/R 组较空白组和空白+ICS II 50 μM 组，MMP显著降低，而 ICS II 或 NAC 同样呈浓度依赖性提高线粒体 MMP（图 2C）。
0.05 vs OGD/R 组 ；##P＜0.01 vs OGD/R 组；（ x ± SD, n=3）。Fig.2. Effects of ICS II on OGD 2 h/R 24 h-induced intracellular ROS production, mitochondrial ROS production and MMP in PC12 cells. The cells were treated with ICS II (12.5, 25, and 50 μM)and NAC (100 μM) for 24 h after OGD 2 h. (A) Intracellular ROS production level; (B) Mitochondrial ROS production; (C) MMP. **P＜0.01 vs control group;#P＜0.05 vs OGD/R group;##P＜0.01 vs OGD/R group; ( x ± SD,n=3).2.3 ICS II 对 OGD/R 诱导的 PC12 细胞 SIRT3 以及 IDH2 表达的影响为了确定 SIRT3 信号通路是否在 OGD/R 诱导的细胞凋亡中发挥重要作用，本研究采用 Western blot 法检测 SIRT3 及其下游基因的蛋白表达。 结果表明OGD/R 组较空白组和空白+ICS II 50 μM 组，SIRT3 蛋白水平显着降低，而 ICS II作用后可明显提高 SIRT3 的表达（P＜0.01）（图 3A，B）。此外，OGD/R 组较空白组和空白+ICS II 50 μM 组，IDH2 表达明显降低（P＜0.01）。而给予 ICS II后，IDH2 的水平显著提高（P＜0.01）（图 3C，D），此结果说明 SIRT3/IDH2信号通路参与了 ICS II 对 OGD 2 h/R 24 h 诱导的 PC12 细胞损伤的改善作用。
【参考文献】：
期刊论文
[1]丹参酮ⅡA通过PI3K/Akt/mTOR信号通路调控自噬抗内皮细胞氧化应激损伤研究[J]. 曹慧敏,宋囡,张妮,杨关林,陈文娜,张哲,贾连群. 北京中医药大学学报. 2017(11)
[2]淫羊藿次苷Ⅱ对大鼠脑缺血再灌注损伤的作用[J]. 龙隆,徐应淑,雷鸣,徐凡,龚其海,高健美. 中国新药与临床杂志. 2017(10)
[3]七氟醚后处理对大鼠脑缺血-再灌注时氧化应激和炎症反应的影响[J]. 赵丹,袁林辉,张静,张平,余鹏,肖凡,胡小玲,胡衍辉. 临床麻醉学杂志. 2017(07)
[4]缺氧缺糖/复氧复糖PC12细胞自噬的形态学变化与细胞凋亡的关系[J]. 靳晓飞,张颖,李爱英,武密山,周晓红,赵艳萌,高维娟. 中国病理生理杂志. 2016(12)
[5]基于MTT染色法对葡萄生单轴霉孢子囊存活力的检测[J]. 贾招闪,申红妙,李正楠,康兴娇,杨佳瑶,冉隆贤. 菌物学报. 2016(08)
[6]缺血性脑卒中的治疗研究进展[J]. 孟文婷,李东翔,佟玲. 中国新药杂志. 2016(10)
[7]叔丁基过氧化氢诱导人正常肝细胞系L02自噬模型的建立及其线粒体应激机制[J]. 师腾瑞,李鸽,海春旭,秦绪军. 癌变·畸变·突变. 2016(02)
[8]氧化低密度脂蛋白通过CD36介导的氧化应激诱导巨噬细胞自噬[J]. 姚树桐,李严严,刘庆华,岳峰,田华,桑慧,杨娜娜,秦树存. 中国病理生理杂志. 2015(06)
[9]异鼠李素对H2O2引起的H9C2细胞氧化应激损伤的保护作用研究[J]. 董曦,孙桂波,罗云,孙晓波,陈素红. 中国药理学通报. 2015(06)
[10]大黄素通过抑制p38 MAPK活化下调H2O2诱导PC12细胞COX-2表达的实验研究[J]. 王慧娟,冯社军,武艳强,李军涛. 西部医学. 2015(02)
本文编号：3302229
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