牛蒡子拉帕酚F靶向YAP的抗肿瘤作用研究
发布时间：2021-10-04 21:17
目的:本研究旨在应用牛蒡子中木脂素类成分牛蒡酚F（Lappaol F,LAF）对肿瘤细胞进行干预,观察LAF对多种肿瘤细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响;研究LAF对致癌基因Yes-Associated Protein（YAP）及其靶基因表达的影响;进一步研究LAF对YAP的调控方式,从而探讨LAF抗肿瘤作用的机制。方法:（1）磺酰罗丹明B法检测LAF对人宫颈癌Hela细胞、人结肠癌SW480细胞、人前列腺癌PC3细胞、人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖活性的影响;（2）Annexin V-FITC/PI双染-流式检测法,检测不同浓度的LAF对四种肿瘤细胞凋亡的影响;（3）多功能实时无标记细胞分析仪研究LAF对Hela细胞和MDA-MB-231细胞迁移和侵袭的抑制作用;（4）Western Blot法检测LAF对YAP表达水平的影响,以及对YAP靶基因（BIRC5、Bcl-2、C-myc）表达的影响;（5）免疫荧光法检测LAF对YAP在亚细胞水平定位表达的影响;（6）Western Blot法检测YAP调控蛋白14-3-3 σ的表达水平;（7）siRNA干扰法敲减14-3-3σ表达,通...
【文章来源】：广州中医药大学广东省
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１不同浓度的ＬＡＦ对肿瘤细胞增殖的影响（４８ｈ）??
图１－２?ＬＡＦ?（５〇ｕｍｏｌ／Ｌ）作用不同时间对肿瘤细胞增殖的影响??表１－１?ＬＡＦ抑制Ｈｅｌａ细胞存活率（％）列表（２４ｈ）??ＬＡＦ（?ｕｍｏｌ／Ｌ）?细胞存活率（％）??￣０?１００．?００?＋?０．?００??１０?９３．?１５?士?７．?０４??２５?８１．?４８±３．?９７＊??５０?７５．?３４?±２．?７０＊??７５?５９．?５９?±１６．?８６???注：首先对剂量资料进行正态性检验，￣ＬＡＦ１０ｕｍｏｌ／Ｌ组、ＬＡＦ２５ｕｍｏｌ／Ｌ组、ＬＡＦ５０?ｙ?ｍｏｌ／Ｌ组、??ＬＡＦ７５ｕｎｉｏｌ／Ｌ?组的?Ｓｉｇ＞０．０５，说明?ＬＡＦ１０ｕｍｏｌ／Ｌ?组、ＬＡＦ２５ｕｍｏｌ／Ｌ?组、ＬＡＦ５０ｕｍｏｌ／Ｌ?组、??ＬＡＦ７５?ｕ?ｍｏｌ／Ｌ组数据皆符合正态分布。其次进行方差齐性检验，本组五个方差齐性检验户０．?００２，??不符合方差齐性假设，故组间采用Ｇａｍｅｓ－Ｈｏｗｅｌｌ检验方法进行比较。与正常对照组相比，ＬＡＦ不??同浓度药物组的细胞活力值皆显著降低（ＬＡＦｌＯｐｍｏｌ／Ｌ组ｒａ对照组，户０．?５７６；?ＬＡＦ２５ｌｉｍｏｌ／Ｌ??组?ｒｓ对照组，／Ｋ）．?０４６；ＬＡＦ５０?ｕ?ｍｏｌ／Ｌ组?ｋｓ对照组，芦０？?０１２；ＬＡＦ７５?ｕ?ｍｏｌ／Ｌ组?ｋｓ对照组，／Ｍ）．?１５７）。??当Ｋ０．?０５时，表示差异有统计学的意义。户＜０．０５?（＊）。??表１－２?ＬＡＦ抑制Ｈｅｌａ细胞存活率（％）列表（４８ｈ）??
三、实验结果??ＬＡＦ对肿瘤细胞凋亡的影响??由图２－１所示，ＬＡＦ?（２５?ｉｉｍｏｌ／Ｌ－７５?ｙｍｏｌ／Ｌ）作用４８ｈ后，能够诱导Ｈｅｌａ细??胞、ＳＷ４８０细胞、ＰＣ３细胞和ＭＤＡ－ＭＢ－２３１细胞的凋亡，ｆｌ该作用具有明显的浓度梯度。??即随着ＬＡＦ浓度的增加，其促进四种肿瘤细胞凋亡的作用也明显ｉ曽强。各细胞流式凋??亡图见图２－２至２－５，具体数据见表２－１至２－４。??１００－，??—ｈｅｌａ??＼〇?８０－?Ａ?—?ＳＷ４８０??＾?—?ＰＣ３??？?６０－?—?ＭＤＡ－ＭＢ－２３１??１：??〇?Ｔ?■■?Ｉ—，?１?＊??０?２０?４０?６０?８０??Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?（?ｕｍｏｌ／Ｌ）??图２－１?ＬＡＦ对肿瘤细胞凋亡的影响（４８ｈ）??２１??
【参考文献】：
期刊论文
[1]DNA损伤关卡蛋白1和Yes相关蛋白1在卵巢癌患者中的表达及与卵巢癌患者预后的相关性[J]. 高洁凡. 中国妇幼保健. 2017(12)
[2]结直肠癌中Yap、TAZ的表达及意义[J]. 陈海滨,王立姣,赵建军. 广东医学. 2016(18)
[3]Yes相关蛋白在肿瘤中作用的研究进展[J]. 周晓明,毛幸,吴小涛. 现代医学. 2016(04)
[4]牛蒡子苷元通过抑制PI3-K/Akt信号通路诱导肝癌细胞凋亡[J]. 王静泓,姜孝新,曾乐平,刘炼,周辉,刘玉冰. 肿瘤药学. 2015(06)
[5]YAP与肿瘤干细胞相关性研究进展[J]. 李海欣,何娜,郑红. 中国肿瘤临床. 2015(14)
[6]牛蒡子苷元与顺铂联合对人肺癌H460细胞系增殖和凋亡的影响[J]. 王焕勤,王静. 医药论坛杂志. 2015(02)
[7]牛蒡子苷元抗肿瘤血管生成作用研究[J]. 何凡,孙小玲,宿亚柳,孙东,康廷国. 中药药理与临床. 2014(04)
[8]牛蒡子苷与苷元诱导人前列腺癌PC3细胞非凋亡性死亡的研究[J]. 李孝庆,杨瑞仪,刘抗伦,沈小玲,胡英杰. 广州中医药大学学报. 2013(04)
[9]牛蒡子苷元复方抗流感病毒的实验研究[J]. 符林春,徐培平,刘妮,杨子峰,张奉学,胡英杰. 中药新药与临床药理. 2008(04)
[10]紫杉醇对肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响[J]. 高宝安,杜春玲,陈世雄,丁文柏,杨俊. 天津医药. 2008(02)
硕士论文
[1]牛蒡子的化学成分研究与抗肿瘤作用初步研究[D]. 刘抗伦.广州中医药大学 2008
本文编号：3418348
【文章来源】：广州中医药大学广东省
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１不同浓度的ＬＡＦ对肿瘤细胞增殖的影响（４８ｈ）??
图１－２?ＬＡＦ?（５〇ｕｍｏｌ／Ｌ）作用不同时间对肿瘤细胞增殖的影响??表１－１?ＬＡＦ抑制Ｈｅｌａ细胞存活率（％）列表（２４ｈ）??ＬＡＦ（?ｕｍｏｌ／Ｌ）?细胞存活率（％）??￣０?１００．?００?＋?０．?００??１０?９３．?１５?士?７．?０４??２５?８１．?４８±３．?９７＊??５０?７５．?３４?±２．?７０＊??７５?５９．?５９?±１６．?８６???注：首先对剂量资料进行正态性检验，￣ＬＡＦ１０ｕｍｏｌ／Ｌ组、ＬＡＦ２５ｕｍｏｌ／Ｌ组、ＬＡＦ５０?ｙ?ｍｏｌ／Ｌ组、??ＬＡＦ７５ｕｎｉｏｌ／Ｌ?组的?Ｓｉｇ＞０．０５，说明?ＬＡＦ１０ｕｍｏｌ／Ｌ?组、ＬＡＦ２５ｕｍｏｌ／Ｌ?组、ＬＡＦ５０ｕｍｏｌ／Ｌ?组、??ＬＡＦ７５?ｕ?ｍｏｌ／Ｌ组数据皆符合正态分布。其次进行方差齐性检验，本组五个方差齐性检验户０．?００２，??不符合方差齐性假设，故组间采用Ｇａｍｅｓ－Ｈｏｗｅｌｌ检验方法进行比较。与正常对照组相比，ＬＡＦ不??同浓度药物组的细胞活力值皆显著降低（ＬＡＦｌＯｐｍｏｌ／Ｌ组ｒａ对照组，户０．?５７６；?ＬＡＦ２５ｌｉｍｏｌ／Ｌ??组?ｒｓ对照组，／Ｋ）．?０４６；ＬＡＦ５０?ｕ?ｍｏｌ／Ｌ组?ｋｓ对照组，芦０？?０１２；ＬＡＦ７５?ｕ?ｍｏｌ／Ｌ组?ｋｓ对照组，／Ｍ）．?１５７）。??当Ｋ０．?０５时，表示差异有统计学的意义。户＜０．０５?（＊）。??表１－２?ＬＡＦ抑制Ｈｅｌａ细胞存活率（％）列表（４８ｈ）??
三、实验结果??ＬＡＦ对肿瘤细胞凋亡的影响??由图２－１所示，ＬＡＦ?（２５?ｉｉｍｏｌ／Ｌ－７５?ｙｍｏｌ／Ｌ）作用４８ｈ后，能够诱导Ｈｅｌａ细??胞、ＳＷ４８０细胞、ＰＣ３细胞和ＭＤＡ－ＭＢ－２３１细胞的凋亡，ｆｌ该作用具有明显的浓度梯度。??即随着ＬＡＦ浓度的增加，其促进四种肿瘤细胞凋亡的作用也明显ｉ曽强。各细胞流式凋??亡图见图２－２至２－５，具体数据见表２－１至２－４。??１００－，??—ｈｅｌａ??＼〇?８０－?Ａ?—?ＳＷ４８０??＾?—?ＰＣ３??？?６０－?—?ＭＤＡ－ＭＢ－２３１??１：??〇?Ｔ?■■?Ｉ—，?１?＊??０?２０?４０?６０?８０??Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?（?ｕｍｏｌ／Ｌ）??图２－１?ＬＡＦ对肿瘤细胞凋亡的影响（４８ｈ）??２１??
【参考文献】：
期刊论文
[1]DNA损伤关卡蛋白1和Yes相关蛋白1在卵巢癌患者中的表达及与卵巢癌患者预后的相关性[J]. 高洁凡. 中国妇幼保健. 2017(12)
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[6]牛蒡子苷元与顺铂联合对人肺癌H460细胞系增殖和凋亡的影响[J]. 王焕勤,王静. 医药论坛杂志. 2015(02)
[7]牛蒡子苷元抗肿瘤血管生成作用研究[J]. 何凡,孙小玲,宿亚柳,孙东,康廷国. 中药药理与临床. 2014(04)
[8]牛蒡子苷与苷元诱导人前列腺癌PC3细胞非凋亡性死亡的研究[J]. 李孝庆,杨瑞仪,刘抗伦,沈小玲,胡英杰. 广州中医药大学学报. 2013(04)
[9]牛蒡子苷元复方抗流感病毒的实验研究[J]. 符林春,徐培平,刘妮,杨子峰,张奉学,胡英杰. 中药新药与临床药理. 2008(04)
[10]紫杉醇对肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响[J]. 高宝安,杜春玲,陈世雄,丁文柏,杨俊. 天津医药. 2008(02)
硕士论文
[1]牛蒡子的化学成分研究与抗肿瘤作用初步研究[D]. 刘抗伦.广州中医药大学 2008
本文编号：3418348
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