桦褐孔菌多糖对弓形虫感染RAW264.7细胞信号通路调控作用的硏究
发布时间：2021-12-24 23:38
桦褐孔菌多糖(IOP)是从传统中药桦褐孔菌当中提取、分离的多糖类成分,具有广泛的生物活性。本试验室前期研究表明,IOP具有显著的体内抗弓形虫和免疫增强等功能。但对于IOP的体外抗弓形虫机制研究尚不明确。因此,本试验将对IOP对于弓形虫速殖子体外感染的RAW264.7巨噬细胞中NF-κB和MAPK两个信号通路调控机制做研究。本试验将巨噬细胞RAW264.7作为试验对象,研究IOP对弓形虫感染的RAW264.7巨噬细胞中炎症因子表达水平及基因转录水平的影响。通过检测NF-κB以及MAPK信号途径中关键性蛋白的表达,从分子免疫水平探讨IOP的抗弓形虫免疫调控机制,为IOP的研发应用提供科学依据。首先,本试验首先采用MTT法确定IOP的安全试验剂量。试验结果显示,0～180μg/mL的IOP无明显的细胞毒性作用(P>0.05)。因此,本试验拟定IOP的高、中、低组中IOP的浓度分别为100μg/mL、50 μg/mL和25 μg/mL。ELISA法检测RAW264.7各组细胞培养液上清中相关炎症因子IL-1β、IL-4、IL-6、IFN-γ及TNF-α的表达调控水平。RT-PCR方法检测...
【文章来源】： 延边大学吉林省 211工程院校
【文章页数】：67 页
【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
1 弓形虫概述
1.1 弓形虫生物学特征
1.2 弓形虫病的流行特点
1.3 弓形虫病的症状及病理变化
1.4 弓形虫病的治疗现状
2 炎性信号转导通路
2.1 炎症概述
2.2 细胞因子
2.3 核因子κB(NF-κB)信号转导通路
2.4 MAPK信号转导通路
3 弓形虫感染与相关信号通路之间关系
4 中药抗炎免疫调控
4.1 免疫概述
4.2 临床抗炎免疫药的分类
4.3 抗炎免疫中药研究进展
5 桦褐孔菌及桦褐孔菌多糖研究进展
5.1 桦褐孔菌概述
5.2 桦褐孔菌多糖药理学作用
6 研究目的及意义
材料与方法
1 材料
1.1 试验细胞
1.2 试验药物及试剂配制
1.3 试验主要试剂
1.4 试验主要仪器设备
2 方法
2.1 试验前细胞处理
2.2 药物处理与试验分组
2.3 MTT法确定桦褐孔菌多糖的安全剂量
2.4 ELISA法测定细胞因子含量
2.5 Trizol法提取细胞总RNA
2.6 激光共聚焦法测定通路关键蛋白活性
2.7 Western Blot法测定转导通路关键蛋白表达
2.8 数据统计处理
结果
1 IOP安全剂量确定
2 IOP对弓形虫感染RAW264.7细胞因子表达的影响
2.1 细胞上清液中IL-1β的表达
2.2 细胞上清液中IL-6的表达
2.3 细胞上清液中TNF-α的表达
2.4 细胞上清液中IFN-γ的表达
2.5 细胞上清液中IL-4的表达
3 IOP对弓形虫感染RAW264.7细胞炎性因子及趋化因子mRNA表达的影响
3.1 IOP对弓形虫感染RAW264.7细胞IL-1β mRNA表达的影响
3.2 IOP对弓形虫感染RAW264.7细胞IL-6 mRNA表达的影响
3.3 IOP对弓形虫感染RAW264.7细胞TNF-α mRNA表达的影响
3.4 IOP对弓形虫感染RAW264.7细胞MCP-1 mRNA表达的影响
3.5 IOP对弓形虫感染RAW264.7细胞MIP-1α mRNA表达的影响
4 IOP对弓形虫感染RAW264.7细胞NF-κB通路蛋白表达的影响
4.1 IOP对弓形虫感染RAW264.7细胞TLR2蛋白表达的影响
4.2 IOP对弓形虫感染RAW264.7细胞TLR4蛋白表达的影响
4.3 IOP对弓形虫感染RAW264.7细胞p-IKKα/β、p-IKBα蛋白表达的影响
4.4 IOP对弓形虫感染RAW264.7细胞浆蛋白中NF-κB p65蛋白表达的影响
4.5 IOP对弓形虫感染RAW264.7细胞核蛋白中NF-κB p65蛋白的表达影响
4.6 IOP对弓形虫感染细胞核蛋白中NF-κB p65活性影响
5 IOP对弓形虫感染RAW264.7细胞MAPK通路蛋白表达的影响
5.1 IOP对弓形虫感染RAW264.7细胞p-p38、p-JNK与p-ERK蛋白表达的影响
5.2 IOP对弓形虫感染细胞核转录因子AP-1(c-jun)活性影响
讨论
结论
参考文献
致谢
作者简介
附录
【参考文献】：
期刊论文
[1]黄芪甲苷改善大鼠急性脑梗死神经运动功能及对梗死侧大脑皮层中NF-κB p65及IKKβ蛋白的影响 [J]. 付蓓蓓,郑永强,徐悦. 中国中医急症. 2019(01)
[2]基于IKKβ/NF-κ B信号通路探讨丹紫康膝冲剂对大鼠膝骨关节炎的影响 [J]. 唐琦,董大立. 中国中医药现代远程教育. 2018(22)
[3]我国人群和某些动物弓形虫感染研究进展 [J]. 张越,王华琳,丁莹莹,李娇,鲍丽,段萍,陈启军,姜宁. 动物医学进展. 2018(10)
[4]益气养阴逐瘀方对LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症模型体外抗炎活性的影响 [J]. 唐蕾,吴坚,于顾然,储继红,严士海,王海丹,戴国梁,韩旭. 中国实验方剂学杂志. 2019(01)
[5]臭牡丹大黄素对臭氧应激小鼠模型TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的调节作用 [J]. 曾丹,刘莉,谭眉灵,谢玮,卢善翃,李俊辉,向阳,秦晓群. 中药新药与临床药理. 2018(05)
[6]巨噬细胞极化与微生物感染进程 [J]. 张莲,刘栋华. 中国皮肤性病学杂志. 2018(05)
[7]桦褐孔菌发酵产物对鸡生长性能和部分免疫指标的影响 [J]. 李海燕,林冬梅,丁志勇,于森,黄艳艳,杨少华,张琳,吴家强. 华北农学报. 2017(S1)
[8]消退素在炎症相关疾病中减轻炎症反应的作用机制[J]. 崔术楠,姚尚龙,尚游. 中华危重病急救医学. 2017 (04)
[9]中药免疫调节作用研究进展 [J]. 周悦芳,范培红. 时珍国医国药. 2017(01)
[10]淫羊藿总黄酮通过抑制MAPK/NF-κB信号通路减轻自然衰老大鼠脑组织炎症反应 [J]. 宋来新,张长城,王婷,刘珍财,韩贵芳,袁丁,赵海霞. 中国药理学通报. 2017(01)
博士论文
[1]17-β雌二醇调控绵羊输卵管上皮细胞β-防御素1基因表达过程中NF-κB信号通路的研究[D]. 温世勇.内蒙古农业大学. 2014
[2]创伤后线粒体DNA活化巨噬细胞NF-κB通路引起全身炎症反应综合征的研究[D]. 张建政.中国人民解放军军医进修学院. 2012
[3]三叶草肽Ⅲ（TFF3）调节肠上皮细胞核转录因子NF-κB及其新的负反馈调节子扭蛋白Twist的机制：TFF3与肿瘤坏死因子作用的比较[D]. 朱亚勤.中国医科大学. 2006
[4]跨膜型TNF-α正向与反向信号在活化诱导的淋巴细胞凋亡中的作用及机制[D]. 王晶.华中科技大学. 2006
[5]NF-κB p50、p65和IκBα与食管鳞癌发生和浸润转移的关系及其作用机制的研究[D]. 李道明.郑州大学. 2005
[6]CCK-8对炎症反应中促炎及抗炎性细胞因子表达的调控机制研究[D]. 倪志宇.河北医科大学. 2005
[7]LPS致新生大鼠急性肺损伤促炎性细胞因子、抗炎性细胞因子和NF-κB变化及N-乙酰半胱氨酸干预作用的研究[D]. 金婧.中国医科大学. 2004
[8]MAPK信号转导通路在重症急性胰腺炎发病机制中的作用[D]. 施新岗.第二军医大学. 2004
[9]枯否细胞在严重烧伤早期TNFα、IL-1β、IL-6产生中的作用及调控[D]. 王光毅.第二军医大学. 2001
硕士论文
[1]本芴醇对弓形虫抑制作用研究[D]. 王大为.沈阳农业大学. 2016
[2]ANK1基因在弓形虫生长发育中的作用研究[D]. 刁慧艳.华中农业大学. 2016
[3]黄芪总黄酮对RAW264.7细胞NF-κB信号通路调控作用的研究[D]. 郭泽.延边大学. 2016
[4]IL-1β诱导人角膜上皮细胞产生IL-6和IL-8的分子机制及地塞米松对其抑制作用的研究[D]. 周卫萍.浙江大学. 2015
[5]弓形虫ROP18激酶抑制宿主NF-κB信号通路的分子机制研究[D]. 蒋宗儒.安徽医科大学. 2015
[6]桦褐孔菌多糖对小鼠免疫细胞的影响[D]. 姜雨薇.延边大学. 2014
[7]桦褐孔菌多糖对感染不同毒株弓形虫小白鼠AP-1部分信号因子的影响研究[D]. 姚琳.延边大学. 2013
[8]补体C5a在细菌感染性炎症中对IL-8分泌的调节研究[D]. 王立燕.中国人民解放军军事医学科学院. 2010
[9]高血流肺血管重建中内皮细胞NF-κB的活性研究[D]. 于晓晓.山东大学. 2010
[10]刚地弓形虫RH株速殖子在鼠星形胶质细胞体外培养的实验观察[D]. 李冬娜.苏州大学. 2010
本文编号：3551401
【文章来源】： 延边大学吉林省 211工程院校
【文章页数】：67 页
【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
1 弓形虫概述
1.1 弓形虫生物学特征
1.2 弓形虫病的流行特点
1.3 弓形虫病的症状及病理变化
1.4 弓形虫病的治疗现状
2 炎性信号转导通路
2.1 炎症概述
2.2 细胞因子
2.3 核因子κB(NF-κB)信号转导通路
2.4 MAPK信号转导通路
3 弓形虫感染与相关信号通路之间关系
4 中药抗炎免疫调控
4.1 免疫概述
4.2 临床抗炎免疫药的分类
4.3 抗炎免疫中药研究进展
5 桦褐孔菌及桦褐孔菌多糖研究进展
5.1 桦褐孔菌概述
5.2 桦褐孔菌多糖药理学作用
6 研究目的及意义
材料与方法
1 材料
1.1 试验细胞
1.2 试验药物及试剂配制
1.3 试验主要试剂
1.4 试验主要仪器设备
2 方法
2.1 试验前细胞处理
2.2 药物处理与试验分组
2.3 MTT法确定桦褐孔菌多糖的安全剂量
2.4 ELISA法测定细胞因子含量
2.5 Trizol法提取细胞总RNA
2.6 激光共聚焦法测定通路关键蛋白活性
2.7 Western Blot法测定转导通路关键蛋白表达
2.8 数据统计处理
结果
1 IOP安全剂量确定
2 IOP对弓形虫感染RAW264.7细胞因子表达的影响
2.1 细胞上清液中IL-1β的表达
2.2 细胞上清液中IL-6的表达
2.3 细胞上清液中TNF-α的表达
2.4 细胞上清液中IFN-γ的表达
2.5 细胞上清液中IL-4的表达
3 IOP对弓形虫感染RAW264.7细胞炎性因子及趋化因子mRNA表达的影响
3.1 IOP对弓形虫感染RAW264.7细胞IL-1β mRNA表达的影响
3.2 IOP对弓形虫感染RAW264.7细胞IL-6 mRNA表达的影响
3.3 IOP对弓形虫感染RAW264.7细胞TNF-α mRNA表达的影响
3.4 IOP对弓形虫感染RAW264.7细胞MCP-1 mRNA表达的影响
3.5 IOP对弓形虫感染RAW264.7细胞MIP-1α mRNA表达的影响
4 IOP对弓形虫感染RAW264.7细胞NF-κB通路蛋白表达的影响
4.1 IOP对弓形虫感染RAW264.7细胞TLR2蛋白表达的影响
4.2 IOP对弓形虫感染RAW264.7细胞TLR4蛋白表达的影响
4.3 IOP对弓形虫感染RAW264.7细胞p-IKKα/β、p-IKBα蛋白表达的影响
4.4 IOP对弓形虫感染RAW264.7细胞浆蛋白中NF-κB p65蛋白表达的影响
4.5 IOP对弓形虫感染RAW264.7细胞核蛋白中NF-κB p65蛋白的表达影响
4.6 IOP对弓形虫感染细胞核蛋白中NF-κB p65活性影响
5 IOP对弓形虫感染RAW264.7细胞MAPK通路蛋白表达的影响
5.1 IOP对弓形虫感染RAW264.7细胞p-p38、p-JNK与p-ERK蛋白表达的影响
5.2 IOP对弓形虫感染细胞核转录因子AP-1(c-jun)活性影响
讨论
结论
参考文献
致谢
作者简介
附录
【参考文献】：
期刊论文
[1]黄芪甲苷改善大鼠急性脑梗死神经运动功能及对梗死侧大脑皮层中NF-κB p65及IKKβ蛋白的影响 [J]. 付蓓蓓,郑永强,徐悦. 中国中医急症. 2019(01)
[2]基于IKKβ/NF-κ B信号通路探讨丹紫康膝冲剂对大鼠膝骨关节炎的影响 [J]. 唐琦,董大立. 中国中医药现代远程教育. 2018(22)
[3]我国人群和某些动物弓形虫感染研究进展 [J]. 张越,王华琳,丁莹莹,李娇,鲍丽,段萍,陈启军,姜宁. 动物医学进展. 2018(10)
[4]益气养阴逐瘀方对LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症模型体外抗炎活性的影响 [J]. 唐蕾,吴坚,于顾然,储继红,严士海,王海丹,戴国梁,韩旭. 中国实验方剂学杂志. 2019(01)
[5]臭牡丹大黄素对臭氧应激小鼠模型TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的调节作用 [J]. 曾丹,刘莉,谭眉灵,谢玮,卢善翃,李俊辉,向阳,秦晓群. 中药新药与临床药理. 2018(05)
[6]巨噬细胞极化与微生物感染进程 [J]. 张莲,刘栋华. 中国皮肤性病学杂志. 2018(05)
[7]桦褐孔菌发酵产物对鸡生长性能和部分免疫指标的影响 [J]. 李海燕,林冬梅,丁志勇,于森,黄艳艳,杨少华,张琳,吴家强. 华北农学报. 2017(S1)
[8]消退素在炎症相关疾病中减轻炎症反应的作用机制[J]. 崔术楠,姚尚龙,尚游. 中华危重病急救医学. 2017 (04)
[9]中药免疫调节作用研究进展 [J]. 周悦芳,范培红. 时珍国医国药. 2017(01)
[10]淫羊藿总黄酮通过抑制MAPK/NF-κB信号通路减轻自然衰老大鼠脑组织炎症反应 [J]. 宋来新,张长城,王婷,刘珍财,韩贵芳,袁丁,赵海霞. 中国药理学通报. 2017(01)
博士论文
[1]17-β雌二醇调控绵羊输卵管上皮细胞β-防御素1基因表达过程中NF-κB信号通路的研究[D]. 温世勇.内蒙古农业大学. 2014
[2]创伤后线粒体DNA活化巨噬细胞NF-κB通路引起全身炎症反应综合征的研究[D]. 张建政.中国人民解放军军医进修学院. 2012
[3]三叶草肽Ⅲ（TFF3）调节肠上皮细胞核转录因子NF-κB及其新的负反馈调节子扭蛋白Twist的机制：TFF3与肿瘤坏死因子作用的比较[D]. 朱亚勤.中国医科大学. 2006
[4]跨膜型TNF-α正向与反向信号在活化诱导的淋巴细胞凋亡中的作用及机制[D]. 王晶.华中科技大学. 2006
[5]NF-κB p50、p65和IκBα与食管鳞癌发生和浸润转移的关系及其作用机制的研究[D]. 李道明.郑州大学. 2005
[6]CCK-8对炎症反应中促炎及抗炎性细胞因子表达的调控机制研究[D]. 倪志宇.河北医科大学. 2005
[7]LPS致新生大鼠急性肺损伤促炎性细胞因子、抗炎性细胞因子和NF-κB变化及N-乙酰半胱氨酸干预作用的研究[D]. 金婧.中国医科大学. 2004
[8]MAPK信号转导通路在重症急性胰腺炎发病机制中的作用[D]. 施新岗.第二军医大学. 2004
[9]枯否细胞在严重烧伤早期TNFα、IL-1β、IL-6产生中的作用及调控[D]. 王光毅.第二军医大学. 2001
硕士论文
[1]本芴醇对弓形虫抑制作用研究[D]. 王大为.沈阳农业大学. 2016
[2]ANK1基因在弓形虫生长发育中的作用研究[D]. 刁慧艳.华中农业大学. 2016
[3]黄芪总黄酮对RAW264.7细胞NF-κB信号通路调控作用的研究[D]. 郭泽.延边大学. 2016
[4]IL-1β诱导人角膜上皮细胞产生IL-6和IL-8的分子机制及地塞米松对其抑制作用的研究[D]. 周卫萍.浙江大学. 2015
[5]弓形虫ROP18激酶抑制宿主NF-κB信号通路的分子机制研究[D]. 蒋宗儒.安徽医科大学. 2015
[6]桦褐孔菌多糖对小鼠免疫细胞的影响[D]. 姜雨薇.延边大学. 2014
[7]桦褐孔菌多糖对感染不同毒株弓形虫小白鼠AP-1部分信号因子的影响研究[D]. 姚琳.延边大学. 2013
[8]补体C5a在细菌感染性炎症中对IL-8分泌的调节研究[D]. 王立燕.中国人民解放军军事医学科学院. 2010
[9]高血流肺血管重建中内皮细胞NF-κB的活性研究[D]. 于晓晓.山东大学. 2010
[10]刚地弓形虫RH株速殖子在鼠星形胶质细胞体外培养的实验观察[D]. 李冬娜.苏州大学. 2010
本文编号：3551401
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