骆驼蓬多糖诱导细胞自噬及调节巨噬细胞免疫作用的研究

发布时间：2023-01-15 10:12

　　目的:探讨骆驼蓬多糖（LTP）诱导细胞自噬及调节巨噬细胞免疫活性的研究。方法:1)用不同浓度的LTP多糖干预稳定表达GFP-LC3融合蛋白的NRK细胞,筛选出LTP多糖诱导细胞自噬的最佳浓度和时间点;2)免疫印迹（Western blotting）法进一步检测LTP多糖干预后细胞内自噬体标志性蛋白质LC3和p62表达水平的变化,电子显微镜观察细胞内自噬体的数量,免疫荧光法观察LTP多糖干预后细胞内自噬体与溶酶体的共定位情况;3)LTP多糖干预后,Western blotting法检测自噬信号通路中关键分子p70s6k、AMPK表达水平的变化,并联合运用自噬抑制剂、诱导剂,Western blotting法检测LC3、p62表达水平的变化;4)以1μg/mL脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）干预体外培养的RAW264.7细胞,建立炎症细胞模型,CCK-8法检测细胞活性、Hoechst和PI双重染色方法观察细胞凋亡、ELISA检测炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-a的含量,鉴定炎症细胞模型;5)LTP多糖干预后,检测细胞活性、凋亡及炎症因子含量,联合运用自噬抑制剂... 

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

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中英文缩略词对照表
摘要
Abstract
前言
研究内容与方法
    1.研究对象
    2.仪器与试剂
        2.1 主要仪器
        2.2 材料与试剂
    3.实验方法
        3.1 NKR细胞的药物干预及细胞自噬诱导模型的研究方法
            3.1.1 NRK细胞的培养
            3.1.2 药物干预培养基的制备
            3.1.3 NRK细胞的药物干预
            3.1.4 GFP-LC3 NRK细胞自噬体观察及最适剂量的筛选
            3.1.5 免疫印迹法检测NRK细胞内LC3,p62蛋白质的含量
            3.1.6 骆驼蓬多糖诱导自噬的通路分析
            3.1.7 电子显微镜下观察NRK细胞内自噬体的形成
            3.1.8 免疫荧光法观察NRK细胞内自噬溶酶体的形成
        3.2 骆驼蓬多糖对LPS刺激诱导小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7炎症反应的调节作用
            3.2.1 RAW264.7细胞培养与保存
            3.2.2 CCK-8法检测骆驼蓬多糖对LPS刺激的RAW264.7细胞增殖活性
            3.2.3 骆驼蓬多糖干预下LPS诱导RAW264.7细胞凋亡的分析方法
            3.2.4 骆驼蓬多糖对LPS诱导RAW264.7细胞IL-1β,TNF-α分泌量的影响
            3.2.5 免疫印迹检测LC3,P62蛋白在RAW264.7细胞中的表达
        3.3 数据处理及统计方法
结果
讨论
小结
致谢
参考文献
综述
    参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文
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【参考文献】：
期刊论文
[1]骆驼蓬多糖提取及对秀丽隐杆线虫多聚谷氨酰胺聚集毒性的影响[J]. 全庆华,姬瑞芳,袁将,王加利,刘一冰,邹媛,郭晓宇,张伽妹,刘永刚,高增平.  北京中医药大学学报. 2017(11)
[2]血根碱通过STAT3通路对LPS致RAW264.7细胞炎症的保护作用[J]. 张梦雅,王春丽,杜先华,黄松.  中药新药与临床药理. 2017(06)
[3]植物多糖构效关系研究进展[J]. 谭西,周欣,陈华国.  中国中药杂志. 2017(21)
[4]植物黄酮类化合物的研究进展[J]. 刘一杰,薛永常.  中国生物工程杂志. 2016(09)
[5]骆驼蓬粗多糖抗氧化性的研究[J]. 李雪,张鸣,常国华,陈映全.  中国食品添加剂. 2016(01)
[6]黄酮类化合物的构效关系研究进展[J]. 赵雪巍,刘培玉,刘丹,孙珊珊,李贞,余可馨,张嫚丽,史清文.  中草药. 2015(21)
[7]黄酮类化合物抗肿瘤活性及机制研究进展[J]. 杨楠,贾晓斌,张振海,孙娥,严红梅.  中国中药杂志. 2015(03)
[8]植物多糖的免疫调节作用及其机制研究进展[J]. 尚庆辉,解玉怀,张桂国,姜淑贞,杨在宾,杨维仁,张崇玉.  动物营养学报. 2015(01)
[9]酒精诱导嗜铬细胞瘤细胞自噬及其与P62作用的关系[J]. 董越娟,石贞玉,刘诗濛,张维娟,皇甫超申,邓锦波,刘彬.  解剖学报. 2013(06)
[10]骆驼蓬多糖提取工艺优化及抗氧化活性的测定[J]. 张新国,于国庆,彭轶楠,王鸣刚.  中医药学报. 2013(05)

硕士论文
[1]骆驼蓬地上部分化学成分的研究[D]. 李越鲲.西北农林科技大学 2005



本文编号：3730931