基于Raf-MEK-ERK信号通路探讨龟板胶、鹿角胶对体外培养软骨细胞增殖的影响

发布时间：2023-03-19 09:59

　　目的:通过观察龟板胶、鹿角胶对体外培养豚鼠OA软骨细胞的影响,对比分析Raf/MEK/ERK通路相关基因Raf-1、MEK、ERK的mRNA的表达量以及Raf-1、MEK、p-MEK、ERK、p-ERK蛋白表达的差异,证明龟鹿二仙胶中君药龟板胶、鹿角胶通过增强该通路MEK/ERK磷酸化的表达水平,从而促进OA软骨细胞的增殖,进一步剖析龟鹿二仙胶防治OA软骨退变的作用机制。方法:1.将12周龄豚鼠膝关节OA软骨细胞离体培养,甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原染色鉴定后,传代得到F2代。2.MTT比色法筛选龟板胶、鹿角胶对豚鼠OA软骨细胞F2代的最适干预浓度及最适干预时间。3.将实验分为6组:龟板胶组(简记龟组)、鹿角胶组(简记鹿组)、空白组(简记空组)、龟板胶+PD98059组(简记龟抑组)、鹿角胶+PD98059组(简记鹿抑组)、空白+PD98059组(简记空抑组),龟板胶、鹿角胶均为两者最适干预浓度,MEK抑制剂PD98059(简记抑)干预浓度为10uM。4.qPCR法检测实验各组细胞内Raf-1、MEK、ERK的mRNA含量的差异。5.Western Blot法测定实验各组细胞内Raf-1、MEK...

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中文摘要
Abstract
英汉缩略词对照表
引言
实验内容
    1 实验材料
        1.1 实验药物
        1.2 实验动物
        1.3 主要仪器
        1.4 主要试剂
    2 实验方法
        2.1 主要试剂的配制
        2.2 建立12周龄豚鼠离体软骨细胞培养体系
        2.3 软骨细胞的鉴定
        2.4 MTT法检测含药培养液的最适干预浓度及最适干预时间
        2.5 qPCR法检测实验各组细胞内Raf-1、MEK、ERK的mRNA含量差异
        2.6 Western Blot测定实验各组细胞内Raf-1、MEK、p-MEK、ERK、p-ERK蛋白表达
        2.7 数据统计分析
        2.8 实验技术流程图
    3 实验结果
        3.1 镜下豚鼠软骨细胞的生长情况
        3.2 豚鼠膝关节OA软骨细胞的染色鉴定
        3.3 龟板胶、鹿角胶含药培养基的最适促增殖浓度及时间
        3.4 实验组细胞内Raf-1、MEK、ERK的mRNA的表达量
        3.5 实验各组细胞内Raf-1、MEK、p-MEK、ERK、p-ERK蛋白的表达情况
    4 讨论
        4.1 含药培养液干预体外培养细胞的可行性
        4.2 选择实验动物细胞来源的依据
        4.3 MEK抑制剂PD98059的选择
        4.4 筛选含药培养基最适干预浓度及最适干预时间的必要性
        4.5 qPCR法检测目的基因mRNA的表达
        4.6 Western Blot法检测目的蛋白的表达
        4.7 Raf/MEK/ERK信号通路与OA的关系
        4.8 试析龟鹿二仙胶防治OA的作用及配伍机理
结论
参考文献
文献综述
    参考文献
致谢
作者简历



本文编号：3765048