胡芦巴碱调控高糖下肾小球系膜细胞中Wnt/β-catenin信号通路的研究

发布时间：2023-03-23 20:13

　　糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病常见并发症之一,是导致终末期肾病(end-stage renal disease,ESRD)的主要原因。其主要病理改变为肾小球系膜细胞(Human mesangial cels,HMCs)的过度增殖、细胞外基质(extracellular martrixc,ECM)积聚和基底膜增厚。在高糖环境下,HMCs中细胞外基质分泌增多而积聚于系膜区,使肾小球发生一系列病理变化,最终导致肾小球硬化。胡芦巴碱(Trigonelline,TRL)具有降血糖、降血脂、降低胆固醇和抗氧化等功效,但其对高糖状态下的HMCs的作用机制尚不明确。目的:探讨胡芦巴碱对高糖诱导下HMCs增殖、凋亡及细胞外基质表达的影响及Wnt/β-catenin信号通路的调控。方法:1.采用ELISA法和免疫细胞化学法检测FN、Col IV在HMCs中分泌及表达情况。2.采用MTT法检测HMCs增殖情况;采用流式细胞术检测细胞周期。3.采用RT-PCR和Western blot检测Wnt/β-catenin通路相关因子Wnt5a、β-catenin、TCF4、Cy...

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【学位级别】：硕士

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前言
中文摘要
Abstract
第1章 绪论
    1.1 Wnt信号通路
        1.1.1 Wnt/β-catenin信号通路的组成
        1.1.2 Wnt/β-catenin信号通路的调控作用
        1.1.3 Wnt/β-catenin信号通路与疾病的关系
        1.1.4 Wnt/β-catenin信号通路与细胞周期
        1.1.5 Wnt/β-catenin信号通路与细胞凋亡
    1.2 胡芦巴中有效成分防治糖尿病研究进展
        1.2.1 胡芦巴概述
        1.2.2 胡芦巴抗糖尿病的有效成分及其作用机制
    1.3 HMCs与DN
        1.3.1 HMCs在DN发生、发展中的作用
        1.3.2 HMCs高糖条件体外模拟DN
第2章 实验材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 主要试剂
        2.1.2 主要仪器
        2.1.3 药品配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 HMCs的复苏、培养及传代
        2.2.2 MTT法检测胡芦巴碱对高糖下的HMCs增殖的影响
        2.2.3 ELISA检测胡芦巴碱对HMCs中FN、Col IV分泌情况的影响
        2.2.4 免疫细胞化学方法检测HMCs中FN、Col IV表达情况
        2.2.5 瞬时转染
        2.2.6 RT-PCR法检测Wnt/β -catenin通路相关基因表达水平
        2.2.7 Western Blot法检测Wnt/β -catenin通路相关蛋白表达水平
        2.2.8 流式细胞仪检测胡芦巴碱对高糖下HMCs细胞周期的影响
        2.2.9 流式细胞仪检测胡芦巴碱对高糖下HMCs凋亡的影响
        2.2.10 TUNEL法检测胡芦巴碱对高糖下HMCs凋亡的影响
        2.2.11 统计学分析
第3章 实验结果
    3.1 MTT法检测胡芦巴碱对高糖下HMCs增殖的作用
    3.2 ELISA检测胡芦巴碱对高糖下HMCs FN、Col IV分泌水平的影响
    3.3 免疫细胞化学法检测胡芦巴碱对高糖下HMCs FN、Col IV分泌水平的影响
    3.4 胡芦巴碱对高糖下HMCs Wnt/β-catenin通路相关因子m RMA表达的影响
    3.5 胡芦巴碱对高糖下HMCs Wnt/β-catenin通路相关因子蛋白表达的影响
    3.6 胡芦巴碱对高糖下HMCs细胞周期的影响
    3.7 胡芦巴碱对高糖引起的HMCs凋亡的抑制作用
    3.8 TUNEL检测胡芦巴碱对高糖下HMCs凋亡结果
第4章 讨论
    4.1 胡芦巴碱对HMCs增殖的影响
    4.2 胡芦巴碱对HMCs分泌ECM能力的影响
    4.3 胡芦巴碱高糖条件下HMCs中Wnt/β-catenin信号通路的调控
    4.4 胡芦巴碱对HMCs凋亡的影响
第5章 结论与创新点
参考文献
作者简介
致谢



本文编号：3768672