新藤黄酸靶向USP9x抑制骨肉瘤生长的机制研究

发布时间：2023-05-22 01:16

　　骨肉瘤是儿童及青少年最常发生的一种原发性非血液系统恶性肿瘤,早期以外科截肢为主要治疗手段,但手术创伤大,致残率高,远期生存率低,特别是伴有转移的患者预后很差,究其原因主要是目前骨肉瘤的发病及转移机制尚不明确,缺乏特异有效的治疗方法,因此阐明骨肉瘤的发病机制,并寻找有效的靶向治疗措施对于提高患者的生存率具有重要意义。我们采用前期研究中得到的一种传统中药藤黄的提取物--新藤黄酸(NGA)在骨肉瘤细胞中进行了一系列抗肿瘤效应的探索,并通过CETSA实验确认其作用靶标,最后通过一系列实验探讨了其靶标的作用机制。我们发现NGA可靶向抑制泛素特异性蛋白酶USP9x的活性,加速干细胞相关因子SOX2的降解,从而显著抑制骨肉瘤细胞增殖,诱导其凋亡,降低骨肉瘤细胞的克隆形成能力,为骨肉瘤的靶向治疗和抗癌新药研发提供了新思路。同时本研究还在骨肉瘤中首次证明USP9x可通过去泛素化作用调控SOX2的降解,进而影响肿瘤的生长特性。通过上述研究我们证实了NGA在骨肉瘤靶向治疗中的潜在临床应用价值,为相关抗癌新药的研发提供了新思路;同时也证明了USP9x可靶向SOX2参与调控骨肉瘤的生长,为阐明肿瘤的发生发展机制...

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
全文缩略语中英文对照
第一部分 新藤黄酸靶向USP9x抑制骨肉瘤生长的机制研究
    第一章 研究背景和问题的提出
        1.1 骨肉瘤的研究进展
        1.2 USP9X与肿瘤的发生发展
        1.3 本文主要研究内容概述
    第二章 新藤黄酸NGA对骨肉瘤细胞的生物学效应研究
        2.1 材料与方法
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
            2.1.3 实验方法
        2.2 结果
            2.2.1 NGA抑制骨肉瘤细胞增殖
            2.2.2 NGA诱导骨肉瘤细胞凋亡
            2.2.3 NGA抑制骨肉瘤细胞克隆形成,对细胞周期无明显影响
        2.3 小结与讨论
    第三章 新藤黄酸NGA对泛素特异性蛋白酶USP9x的影响
        3.1 材料与方法
            3.1.1 主要试剂
            3.1.2 主要仪器
            3.1.3 实验方法
        3.2 结果
            3.2.1 NGA促进骨肉瘤细胞内泛素化蛋白的累积
            3.2.2 NGA对蛋白酶体无明显抑制作用
            3.2.3 NGA可改变USP9x的热稳定性,但不改变其蛋白水平
        3.3 小结与讨论
    第四章 泛素特异性蛋白酶USP9x在骨肉瘤中的作用
        4.1 材料与方法
            4.1.1 主要试剂
            4.1.2 主要仪器
            4.1.3 实验方法
        4.2 结果
            4.2.1 敲低USP9x可诱导骨肉瘤细胞发生周期阻滞
            4.2.2 敲低USP9x可抑制骨肉瘤细胞增殖,克隆形成与迁移能力
        4.3 小结与讨论
    第五章 USP9x通过去泛素化作用稳定SOX2
        5.1 材料和方法
            5.1.1 主要试剂
            5.1.2 主要仪器
            5.1.3 实验方法
        5.2 结果
            5.2.1 USP9x在骨肉瘤患者中的表达与SOX2存在一致性
            5.2.3 USP9x与 SOX2存在相互作用
            5.2.4 USP9x使 SOX2发生去泛素化
            5.2.5 过表达SOX2可逆转USP9x敲除引起的生物学效应
        5.3 小结与讨论
    第六章 NGA促进SOX2的泛素化降解
        6.1 材料与方法
            6.1.1 主要试剂
            6.1.2 主要仪器
            6.1.3 实验方法
        6.2 结果
            6.2.1 NGA可促进SOX2的降解
            6.2.2 NGA可增强SOX2的泛素化
        6.3 小结与讨论
    第七章 讨论与全文小结
第二部分 泛素特异性蛋白酶USP14 参与调控口腔鳞癌细胞的增殖与凋亡
    第一章 研究背景
    第二章 研究方法与结果
        2.1 材料与方法
            2.1.1 主要试剂
            2.1.2 主要仪器
            2.1.3 实验方法
        2.2 结果
            2.2.1 USP14在OSCC中的表达
            2.2.2 抑制USP14酶活性对OSCC细胞增殖和凋亡的影响
            2.2.3 敲低USP14对OSCC细胞增殖和迁移的影响
    第三章 讨论与全文小结
参考文献
致谢
附录1 综述
    参考文献
附录2 学术论文和科研成果目录
附录3 研究生期间所获奖励目录



本文编号：3821718