何首乌饮调控大鼠间质细胞衰老的甲基化机制

发布时间：2024-03-02 16:36

　　目的:通过观察何首乌饮对大鼠睾丸间质细胞DNMTs活性的影响,探讨何首乌饮调控大鼠睾丸间质细胞衰老的甲基化机制。方法:1.差异贴壁法分离培养睾丸间质细胞,采用3β-HSD特异性染色,鉴定睾丸间质细胞纯度。2.采用氧化损伤方法建立细胞衰老模型,通过检测β-半乳糖苷酶表达水平,细胞周期和P16蛋白表达情况,判断衰老模型是否构建成功。3.采用构建的慢病毒转染睾丸间质细胞,将间质细胞中DNMT1基因敲低。4.通过MTT法检测细胞活力,荧光定量PCR检测DNMT1 mRNA的表达水平,筛选出DNA甲基转移酶抑制剂最适浓度和最佳作用时间。5.依据实验目的细胞分组为:正常组、衰老组、何首乌饮组、DNA甲基转移酶抑制剂组、DNA甲基转移酶抑制剂与何首乌饮共孵育组、DNMT1敲低组、DNMT1敲低与何首乌饮共孵育组、阴性质粒转染组。6.采用免疫荧光技术,检测P16蛋白的表达情况。7.采用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测各组表观遗传基因wnt2b和C-myb的启动子甲基化水平。结果:1.间质细胞衰老模型鉴定及细胞衰老对DNMT1表达影响:300μM H₂O₂...

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图2-1睾丸间质细胞3β-HSD染色（标尺：A=100μm，B=50μm，C=20μm）

图2-1睾丸间质细胞3β-HSD染色（标尺：A=100μm，B=50μm，C=20μm）.2细胞衰老模型的鉴定及衰老细胞DNMT1mRNA表达变化运用氧化损伤的方法诱导大鼠睾丸间质细胞衰老，进行衰老相关特异性β-半

图2-2间质细胞β-半乳糖苷酶衰老染色结果

ABCD图2-2间质细胞β-半乳糖苷酶衰老染色结果A、B为正常组；C、D为衰老组（A、C标志=100μm；B、D标尺=50μm）β-半乳糖苷酶衰老染色阳性细胞呈现蓝绿色，定位于细胞质表2-9β-半乳糖苷酶细胞阳性率的比较（x±s）组别β-半乳糖苷酶阳性率正常组1....

图2-3间质细胞β-半乳糖苷酶细胞阳性率比较

P0.0010a代表和正常组相比，P<0.05图2-3间质细胞β-半乳糖苷酶细胞阳性率比较

图2-4间质细胞细胞周期分布

模型组睾丸间质细胞G1期比例增加，S期所占比重明显减少，与正常组比较有统计学差异（P<0.05；见图2-4，5，6；表2-10）。图2-4间质细胞细胞周期分布表2-10细胞周期分布百分比%（x±s）组别百分比%G1G2S正常组88.9633±0.621....

本文编号：3917096