HPV16 E6/E7通过抑制PTEN磷酸化下调TXNIP的表达进而促进肺癌细胞中GLUT1的葡萄糖摄取能力
发布时间：2021-11-20 15:04
目的:人类乳头瘤病毒（Human Papilloma Virus,HPV）与肺癌的发生发展密切相关。我们前期研究表明,HPV16 E6和E7能够上调肺癌细胞中葡萄糖转运蛋白1（GLUT1）的表达水平。然而,E6和E7是否能够促进GLUT1葡萄糖摄取能力及其调控机制目前尚不清楚。已有研究表明,硫氧还蛋白互作蛋白（TXNIP）能够调控GLUT1的表达及其葡萄糖摄取能力。但尚无研究报道HPV16与TXNIP之间是否存在联系。在本篇研究中,我们的目的是探索HPV16对肺癌细胞中TXNIP和GLUT1的调控作用及其潜在作用机制。研究方法:1.本研究分别应用转染和干扰技术双向调控肺癌细胞H1299和A549细胞中E6和E7蛋白,通过Western blotting和qRT-PCR方法分别检测下游基因PTEN磷酸化水平、TXNIP、HIF-1α及GLUT1的蛋白和mRNA的表达变化。2.应用干扰技术分别敲除PTEN和TXNIP的表达,检测下游基因TXNIP、HIF-1α及GLUT1的蛋白和mRNA的表达变化。3.应用核浆分离技术检测敲除TXNIP后在细胞核内和细胞浆内的HIF-1α蛋白表达变化。4....
【文章来源】：中国医科大学辽宁省
【文章页数】：41 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
1在H1299细胞系中转染E6质粒
中国医科大学硕士学位论文10结果显示，过表达E7后，PTEN磷酸化水平明显降低，TXNIP蛋白和mRNA表达水平也明显降低。与此同时，我们发现，过表达E7后，GLUT1蛋白和mRNA表达水平明显增高，HIF-1α蛋白表达水平也明显增高，但是并未影响HIF-1α的mRNA表达水平(图3.1.2)。图3.1.2在H1299细胞系中转染E7质粒转染pEGFP-N1-E7质粒至H1299细胞系，E7空载体和Mock转染作为对照。以Westernblot检测E7,PTEN,p-PTEN,TXNIP,HIF-1α,GLUT1和GAPDH蛋白表达水平，以qRT-PCR检测E7,TXNIP,HIF-1α和GLUT1的mRNA表达水平(*p<0.05)(**p<0.01)。3.2敲除E6和E7，PTEN磷酸化水平和TXNIP表达水平明显增高，HIF-1α及GLUT1表达水平明显降低.3.2.1在A549细胞中敲除E6后，PTEN磷酸化水平和TXNIP表达水平明显增高，HIF-1α及GLUT1表达水平明显降低为了进一步研究E6与PTEN、TXNIP、HIF-1α以及GLUT1之间的相互作用。我们将E6特异性siRNA转染至低表达E6的A549细胞系中，以E6非特异性siRNA和Mock特异性siRNA作为对照。结果显示，敲除E6后，PTEN磷酸化水平明显增高，TXNIP蛋白和mRNA表达水平也明显增高。与此同时，敲除E6后，GLUT1蛋白和mRNA表达水平明显降低，HIF-1α蛋白表达水平也明显降低，但是并未影响HIF-1α的mRNA表达水平(图3.2.1)。
中国医科大学硕士学位论文11图3.2.1在A549细胞系中转染siE6干扰体转染E6特异性的siRNA至A549细胞。E6非特异性siRNA和Mock特异性siRNA作为对照。以Westernblot检测E6,PTEN,p-PTEN,TXNIP,HIF-1α,GLUT1和GAPDH蛋白表达水平，以qRT-PCR检测E6,TXNIP,HIF-1α和GLUT1的mRNA表达水平(*p<0.05)(**p<0.01)。3.2.2在A549细胞中敲除E7后，PTEN磷酸化水平和TXNIP表达水平明显增高，HIF-1α及GLUT1表达水平明显降低为了进一步研究E7与PTEN、TXNIP、HIF-1α以及GLUT1之间的相互作用，我们将E7特异性siRNA转染至低表达E7的A549细胞系中，以E7非特异性siRNA和Mock特异性siRNA作为对照。结果显示，敲除E7后，PTEN磷酸化水平明显增高，TXNIP蛋白和mRNA表达水平也明显增高，GLUT1蛋白表达水平和mRNA表达水平明显降低。敲除E7后，HIF-1α蛋白表达水平明显降低,但是并未影响HIF-1α的mRNA表达水平。(图3.2.2)。图3.2.2在A549细胞系中转染siE7干扰体转染E7特异性siRNA至A549细胞中。E7非特异性siRNA和Mock特异性siRNA作为对照。以
【参考文献】：
期刊论文
[1]Incidence and mortality of female breast cancer in the AsiaPacific region[J]. Danny R.Youlden,Susanna M.Cramb,Cheng Har Yip,Peter D.Baade. Cancer Biology & Medicine. 2014(02)
[2]Thioredoxin and thioredoxin-interacting protein as prognostic markers for gastric cancer recurrence[J]. Jae Yun Lim,Sun Och Yoo,Soon Won Hong,Jong Won Kim,Seung Ho Choi,Jae Yong Cho. World Journal of Gastroenterology. 2012(39)
本文编号：3507576
【文章来源】：中国医科大学辽宁省
【文章页数】：41 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
1在H1299细胞系中转染E6质粒
中国医科大学硕士学位论文10结果显示，过表达E7后，PTEN磷酸化水平明显降低，TXNIP蛋白和mRNA表达水平也明显降低。与此同时，我们发现，过表达E7后，GLUT1蛋白和mRNA表达水平明显增高，HIF-1α蛋白表达水平也明显增高，但是并未影响HIF-1α的mRNA表达水平(图3.1.2)。图3.1.2在H1299细胞系中转染E7质粒转染pEGFP-N1-E7质粒至H1299细胞系，E7空载体和Mock转染作为对照。以Westernblot检测E7,PTEN,p-PTEN,TXNIP,HIF-1α,GLUT1和GAPDH蛋白表达水平，以qRT-PCR检测E7,TXNIP,HIF-1α和GLUT1的mRNA表达水平(*p<0.05)(**p<0.01)。3.2敲除E6和E7，PTEN磷酸化水平和TXNIP表达水平明显增高，HIF-1α及GLUT1表达水平明显降低.3.2.1在A549细胞中敲除E6后，PTEN磷酸化水平和TXNIP表达水平明显增高，HIF-1α及GLUT1表达水平明显降低为了进一步研究E6与PTEN、TXNIP、HIF-1α以及GLUT1之间的相互作用。我们将E6特异性siRNA转染至低表达E6的A549细胞系中，以E6非特异性siRNA和Mock特异性siRNA作为对照。结果显示，敲除E6后，PTEN磷酸化水平明显增高，TXNIP蛋白和mRNA表达水平也明显增高。与此同时，敲除E6后，GLUT1蛋白和mRNA表达水平明显降低，HIF-1α蛋白表达水平也明显降低，但是并未影响HIF-1α的mRNA表达水平(图3.2.1)。
中国医科大学硕士学位论文11图3.2.1在A549细胞系中转染siE6干扰体转染E6特异性的siRNA至A549细胞。E6非特异性siRNA和Mock特异性siRNA作为对照。以Westernblot检测E6,PTEN,p-PTEN,TXNIP,HIF-1α,GLUT1和GAPDH蛋白表达水平，以qRT-PCR检测E6,TXNIP,HIF-1α和GLUT1的mRNA表达水平(*p<0.05)(**p<0.01)。3.2.2在A549细胞中敲除E7后，PTEN磷酸化水平和TXNIP表达水平明显增高，HIF-1α及GLUT1表达水平明显降低为了进一步研究E7与PTEN、TXNIP、HIF-1α以及GLUT1之间的相互作用，我们将E7特异性siRNA转染至低表达E7的A549细胞系中，以E7非特异性siRNA和Mock特异性siRNA作为对照。结果显示，敲除E7后，PTEN磷酸化水平明显增高，TXNIP蛋白和mRNA表达水平也明显增高，GLUT1蛋白表达水平和mRNA表达水平明显降低。敲除E7后，HIF-1α蛋白表达水平明显降低,但是并未影响HIF-1α的mRNA表达水平。(图3.2.2)。图3.2.2在A549细胞系中转染siE7干扰体转染E7特异性siRNA至A549细胞中。E7非特异性siRNA和Mock特异性siRNA作为对照。以
【参考文献】：
期刊论文
[1]Incidence and mortality of female breast cancer in the AsiaPacific region[J]. Danny R.Youlden,Susanna M.Cramb,Cheng Har Yip,Peter D.Baade. Cancer Biology & Medicine. 2014(02)
[2]Thioredoxin and thioredoxin-interacting protein as prognostic markers for gastric cancer recurrence[J]. Jae Yun Lim,Sun Och Yoo,Soon Won Hong,Jong Won Kim,Seung Ho Choi,Jae Yong Cho. World Journal of Gastroenterology. 2012(39)
本文编号：3507576
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