MAP4K4通过MAPK及NF-κB信号通路参与食管鳞癌细胞增殖、迁移及凋亡调控的研究

发布时间：2024-07-06 01:33

　　【目的】通过统计分析MAP4K4在食管鳞癌中的表达情况与临床病理特征以及预后情况之间联系,进一步用体外实验揭示MAP4K4表达改变对食管鳞癌细胞增殖、凋亡水平以及迁移、侵袭能力的影响及其分子机制,探讨MAP4K4蛋白作为食管鳞癌患者靶向治疗潜在位点和预后判断的潜在价值。【方法】(1)基于生物信息学通过GEO数据库统计分析食管鳞癌中MAP4K4表达情况,提取MAP4K4数据,标准化后统计分析;收集55对食管鳞癌患者癌与癌旁正常组织,通过免疫组化的方法来检测组织中MAP4K4的表达情况,并分析MAP4K4表达量与患者临床病理特征及预后之间联系;WesternBlotting法对比检测正常食管上皮细胞系Het-1a与食管鳞癌细胞系TE-1、ECA-109中MAP4K4的表达差异;(2)在利用质粒转染HEK-293T细胞以及PEG沉淀法包装、浓缩慢病毒后,选取MAP4K4表达较高的食管鳞癌ECA-109细胞系进行慢病毒转染敲低;荧光显微镜观察阳性细胞率,用流式分选出GFP表达阳性的细胞;通过Western Blotting检测和评估敲低处理前后细胞中MAP4K4的表达改变;(3)细胞计数法及克...

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
英文缩略词
第一章 绪论
    1.1 食管鳞癌
        1.1.1 食管鳞癌的诊断
        1.1.2 食管鳞癌的治疗
    1.2 MAP4K4
        1.2.1 MAP4K4 概述
        1.2.2 MAP4K4 与肿瘤
    1.3 研究目的、实验方法、实验方案以及意义
        1.3.1 研究目的
        1.3.2 实验方法
        1.3.3 实验方案
        1.3.4 研究意义
第二章 MAP4K4 在食管鳞癌组织、细胞中的表达情况
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验所需组织、细胞
        2.1.2 主要试剂和材料
        2.1.3 主要仪器和设备
    2.2 实验方法
        2.2.1 芯片数据的获取
        2.2.2 免疫组织化学
        2.2.3 细胞培养
        2.2.4 蛋白免疫印迹实验(Western Blotting)
        2.2.5 统计学分析
    2.3 结果
        2.3.1 GEO数据库中MAP4K4 在食管癌与正常食管中的表达情况
        2.3.2 MAP4K4 在食管鳞癌与癌旁组织中的表达情况
        2.3.3 MAP4K4 表达与病理特征间的关系
        2.3.4 MAP4K4 在食管鳞癌中的表达与预后的相关性
        2.3.5 MAP4K4 在食管鳞癌细胞系中的表达
    2.4 讨论
第三章 MAP4K4 对食管鳞癌细胞增殖、迁移及凋亡的影响
    3.1 实验材料
        3.1.1 实验所需细胞及质粒
        3.1.2 主要实验材料和试剂
        3.1.3 主要实验仪器和设备
    3.2 实验主要方法
        3.2.1 细胞培养
        3.2.2 慢病毒包装及感染ECA-109 细胞
        3.2.3 MAP4K4 敲低效果的测定
        3.2.4 台盼蓝染色法分析细胞增殖
        3.2.5 克隆形成实验
        3.2.6 划痕实验
        3.2.7 Transwell实验
        3.2.8 使用血清刺激细胞激活信号通路
        3.2.9 流式分析检测细胞凋亡情况(Annexin V-PI双染法)
        3.2.10 使用Western Blotting检测细胞放疗前后凋亡相关蛋白
        3.2.11 统计学分析
    3.3 结果
        3.3.1 MAP4K4 稳定敲低细胞株的构建
        3.3.2 稳定敲低MAP4K4 的鉴定
        3.3.3 MAP4K4 对细胞增殖的影响
        3.3.4 MAP4K4 对细胞迁移侵袭的影响
        3.3.5 MAP4K4 对细胞凋亡的影响
    3.4 讨论
第四章 MAP4K4 激活MAPK通路及NF-κB通路
    4.1 实验材料
        4.1.1 实验所需细胞
        4.1.2 主要实验材料和试剂
        4.1.3 主要实验仪器和设备
    4.2 实验主要方法
        4.2.1 使用血清刺激激活信号通路
        4.2.2 统计学分析
    4.3 结果
        4.3.1 MAP4K4 通过激活MAPK通路促进细胞增殖与迁移
        4.3.2 MAP4K4 通过TAK1 激活NF-κB通路发挥抗凋亡作用
    4.4 讨论
第五章 结论与展望
    5.1 主要结论
    5.2 展望
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表的论文



本文编号：4001857