MIBG对人体肝癌细胞侵袭的影响

发布时间：2017-08-23 18:35

  本文关键词：MIBG对人体肝癌细胞侵袭的影响

  更多相关文章： 肝癌 ART1 间碘苄胍 侵袭 转移 整合素α7 uPA

【摘要】：目的：通过使用间碘苄胍(meta-iodobenzylguanidine, MIBG)干预精氨酸特异性单腺苷二磷酸核糖基化(arginine-specific mono-ADP-r ibosylation)作用来探究其对肝癌细胞侵袭的影响及其机制。方法：本实验只要采用人体肝癌组织的石蜡切片和新鲜人体肝癌组织做体内实验；肝癌HepG2细胞株做体外实验。1.人体肝癌组织：收集重庆医科大学病理教研室肝癌手术切除本39例,其中有临床转移病例(17例)和无临床转移病例(22例)做免疫组化检测ART1和integrin α 7中的表达；在重庆医科大学附属第一医院手术室收集6例新鲜的肝癌组织做RT-PCR实验,检测伴转移的肝癌组织(3例)和无转移的肝癌组织(3例)中ART1和integrin α 7的mRNA表达。2.肝癌细胞株HepG2细胞培养：做细胞免疫荧光法来检测肝癌细胞HepG2中是否有精氨酸特异性腺苷二磷酸核糖基化转移酶1(arginine-specific adenosinediphospate-ribosyltansferase 1,ART1)的表达；MTT比色实验来检测不同浓度MIBG对肝癌细胞HepG2的抑制率,找出MIBG对肝癌细胞HepG2抑制的最适浓度；划痕实验检测MIBG对肝癌细胞HepG2迁移能力的影响；Transwell实验检测MIBG对肝癌细胞HeG2侵袭能力的影响；Westren blot来分别检测信号通路中ART1 integrin α 7、FAK、PI3K和uPA的蛋白表达。结果：1.免疫组化结果显示：在病理分级Ⅲ-Ⅳ组及肝癌伴转移组织中的ART1和integrin α 7的表达明显高于病理分级Ⅰ-Ⅱ级组和未伴转移组织中的表达。细胞膜表面和胞浆中均可见ART1和integrin α 7的表达(P0.05)。在肝癌组织内,随着整合素α7表达强度升高,ART1的表达也相应增高,两者呈正相关(p=0.88410,P0.01)。2. RT-PCR结果显示：肝癌伴转移组织中ART1和integrin α 7的mRNA表达量均高于肝癌未伴转移组织中的表达(P0.05)。3.免疫荧光结果显示：HepG2在使用ART1的一抗后,再与FITC标记的二抗结合后在荧光显微镜下见胞膜、胞浆均有荧光。而阴性对照的HepG2细胞中则未见荧光。提示ART1在HepG2细胞中具有表达。4.MTT比色试验结果显示：随着MIBG的给药浓度的增加,细胞的生存率总体也成一个下降的趋势,这就提示MIBG对HepG2细胞增殖具有一定抑制作用,而致使细胞半数抑制的MIBG浓度是200μmol/L(P0.05)。5.划痕实验结果显示：未处理对照组的HepG2细胞在24h时的细胞划痕距离较Oh的距离明显减少(P0.05),显示HepG2细胞具有较强的迁移能力。200μmol/LMIBG处理与未处理的HepG2细胞在Oh划痕距离较一致,而MIBG的处理组24h后,较未处理组的划痕距离明显增加(P0.05),表明MIBG能抑制细胞的迁移能力。6. Transwell试验结果显示：MIBG处理组穿过Matrigel的细胞数为(147.2±18.23952)个,较未处理组的(300.4±11.9147)个明显减少,MIBG处理组与未处理组相比侵袭抑制率为50.99%,提示MIBG可明显抑制HepG2细胞的侵袭能力(P0.01)。7. Westron blot实验结果显示：肝癌细胞HepG2中的ART1、integrin α7、FAK, PI3K和uPA的蛋白表达与未处理组比较均明显下调,并呈浓度依赖性降低。提示MIBG可能通过抑制ART1而影响integrin α 7/FAK/PI3K/uPA通路来抑制肝癌细胞HepG2的侵袭和迁移能力(P0.05)。结论：人体肝癌组织检测可见肝癌组织分化转移与ART1、integrin α7的表达有正相关关系,提示ART1和integrin α7可能共同协同参与了肝癌细胞的侵袭和转移。而在肝癌细胞株中使用MIBG对其干扰,结果提示MIBG对HepG2细胞的迁移和侵袭能力具有抑制作用。其可能机制主要是MIBG抑制了精氨酸特异性单腺苷二磷酸核糖基化作用后,抑制Iintegrin α7β1、FAK、PI3K的蛋白表达,抑制了uPA的分泌。从而使HepG2细胞侵袭受到抑制。
【关键词】：肝癌 ART1 间碘苄胍 侵袭 转移 整合素α7 uPA
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-14
• 前言14-15
• 1. 材料与方法15-28
• 2. 统计学分析28
• 3. 结果28-33
• 4. 讨论33-36
• 全文小结36-37
• 参考文献37-41
• 文章附图41-47
• 文献综述47-57
• 参考文献53-57
• 致谢57-58
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文58

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本文编号：726634