肿瘤细胞中YIPF2调控TNFRSF10B的分子机制

发布时间：2017-09-01 21:29

  本文关键词：肿瘤细胞中YIPF2调控TNFRSF10B的分子机制

  更多相关文章： YIPF2 TNFRSF10B RAB GTPases 膜泡运输 细胞凋亡

【摘要】：研究目的TRAIL受体,又称为死亡受体,在细胞外源性凋亡通路中发挥重要作用。TRAIL-R2,又称为TNFRSF10B或DR5,被激活后向下游CASP级联反应传递凋亡信号。TNFRSF10B向质膜的转运是其发挥功能所必需的。YIPF2(YIP1 Protein Family member 2)属于YIP1家族蛋白,主要分布于内质网和高尔基体,有可能在膜泡运输中发挥作用。我们在前期研究中发现,YIPF2的转录水平在化疗药物处理的人非小细胞肺癌细胞中明显上调。同时,这些处理诱导TNFRSF10B上调并引起细胞凋亡。本课题的研究目的是,探究YIPF2在TNFRSF10B于细胞内组分间运输中的作用以及对化疗药物诱导的细胞凋亡的调控作用。研究方法1.使用Western Blot检测YIPF2和TNFRSF10B的表达水平在化疗药物处理的人非小细胞肺癌细胞内的变化。2.在人非小细胞肺癌细胞中使用基因沉默或质粒转染敲低或过表达YIPF2后,使用化疗药物pemetrexed(PEM)进行处理。使用Western Blot检测TNFRSF10B的表达水平以及下游CASP级联反应的活化,并使用流式细胞术检测细胞凋亡。使用荧光共聚焦显微镜和流式细胞术检测TNFRSF10B在质膜上的分布。3.使用蛋白质免疫共沉淀实验检测YIPF2与TNFRSF10B的结合情况。4.在人非小细胞肺癌细胞中使用基因沉默或质粒转染敲低或过表达YIPF2后,进行和2.中相同的处理和实验,寻找在YIPF2调控TNFRSF10B的膜泡运输中发挥作用的RAB蛋白。5.使用蛋白质免疫共沉淀实验确定YIPF2-TNFRSF10B复合物中所包含的RAB蛋白。实验结果1.YIPF2在化疗药物处理的人非小细胞肺癌细胞中的表达增加,呈浓度和时间依赖性,并早于TNFRSF10B的上调。2.在人非小细胞肺癌细胞中敲低或过表达YIPF2,分别减轻或增强化疗药物诱导的TNFRSF10B上调和由其导致的细胞凋亡。3. YIPF2与TNFRSF10B在人非小细胞肺癌细胞内结合并在胞质共定位。4. RAB8与YIPF2-TNFRSF10B复合物结合并被YIPF2负调控。5.RAB8负调控YIPF2和TNFRSF10B的表达水平、TfNFRSF10B在质膜上的分布以及化疗药物诱导的细胞凋亡。6. YIPF2正调控RAB18, RAB18也正调控TTNFRSF10B的表达向质膜的转运。7. YIPF2负调控RAB40c, RAB40c也负调控YIPF2和TNFRSF10B的表达。实验结论1. YIPF2调控TNFRSF10B的表达和膜泡运输。2. YIPF2通过调控TNFRSF10B调控肿瘤细胞凋亡。3. RAB8、RAB18和RAB40c参与到YIPF2对TNFRSF10B调控中。
【关键词】：YIPF2 TNFRSF10B RAB GTPases 膜泡运输 细胞凋亡
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R730.2
【目录】：

• 中文摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 符号说明11-14
• 前言14-62
• 1 课题研究背景14-26
• 1.1 癌症简介14
• 1.2 靶向治疗14-15
• 1.3 细胞凋亡15-26
• 2 肿瘤坏死因子受体超家族10B-TNFRSF10B(DR5)26-28
• 2.1 TNFRSF10B简介26-27
• 2.2 TNFRSF10B作用机制27
• 2.3 TNFRSF10B调控方式27-28
• 2.4 TNFRSF10B的膜泡运输28
• 3 YPFF228-52
• 3.1 YIPF2简介28-29
• 3.2 YIP1(Ypt1-Interacting Protein 1)蛋白29-31
• 3.3 YIP3蛋白31-34
• 3.4 其他的GDF蛋白34-45
• 3.5 哺乳动物细胞中YIP1家族蛋白的主要特征、分布和功能45-52
• 4 RAB蛋白52-62
• 4.1 RAB蛋白简介52
• 4.2 RAB蛋白的结构52-53
• 4.3 RAB蛋白的调控因子53-55
• 4.4 RAB蛋白的结合蛋白55-57
• 4.5 RAB蛋白级联反应57-59
• 4.6 本课题中所研究的RAB蛋白59-62
• 实验材料与方法62-80
• 1 实验材料62-67
• 1.1 实验用细胞株及培养材料62
• 1.2 实验抗体62
• 1.3 siRNA与质粒62-63
• 1.4 溶液和试剂63-67
• 2 仪器设备67-68
• 3 实验方法68-80
• 3.1 细胞培养68-69
• 3.2 基因克隆69-72
• 3.3 siRNA转染72
• 3.4 质粒转染72
• 3.5 SRB实验72-73
• 3.6 Western Blot73-76
• 3.7 免疫共沉淀实验76-77
• 3.8 细胞爬片的准备77-78
• 3.9 流式检测蛋白在细胞表面的分布78-79
• 3.10 统计学分析79-80
• 实验结果80-106
• 1 化疗药物诱导YIPF2表达上调80-83
• 1.1 化疗药物诱导YIPF2表达上调80-82
• 1.2 YIPF2分布在胞质及质膜上82-83
• 2 YIPF2调控TNFRSF10B的表达和分布83-88
• 2.1 YIPF2促进TNFRSF10B表达上调83-85
• 2.2 YIPF2促进TNFRSF10B在质膜上的分布85-88
• 3 YIPF2通过调控TNFRSF10B影响人非小细胞肺癌细胞凋亡88-89
• 4 YIPF2可以与TNFRSF10B结合并在细胞内共定位89-93
• 4.1 YIPF2可以与TNFRSF10B结合89-91
• 4.2 YIPF2与TNFRSF10B在细胞内共定位91-93
• 5 YIPF2与TNFRSF10B和RAB蛋白的相互作用93-104
• 5.1 YIPF2与TNFRSF10B、RAB8相互结合93-95
• 5.2 RAB8负调控YIPF2和TNFRSF10B95-100
• 5.3 YIPF2通过调控RAB18调控TNFRSF10B100-103
• 5.4 YIPF2通过调控RAB40c调控TNFRSF10B的表达103-104
• 6 结果总结104-106
• 讨论106-112
• 参考文献112-122
• 致谢122-124
• 攻读学位期间发表的学术论文124-125
• 学位论文评阅及答辩情况表125

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