靶向调控Pin1的microRNAs筛选

发布时间：2017-09-07 11:15

  本文关键词：靶向调控Pin1的microRNAs筛选

  更多相关文章： 肝癌细胞 靶向调控 miR-140-5p

【摘要】：研究目的:研究靶向调控Pin1的mi RNAs,探讨其在肝癌发生发展中所起的作用,为肝癌的诊断和治疗提供新的思路。研究方法:(1)应用Western blot和Q-PCR实验技术分别从蛋白水平和m RNA水平检测不同肝癌细胞系Hep G2,Huh7和Hep3B中Pin1的表达情况。(2)利用mi RNA靶基因预测软件数据库筛选出靶向调控Pin1的mi RNAs,然后通过双荧光素酶报告基因实验,Western blot实验,以及Q-PCR实验进行mi RNAs靶标验证。研究结果:(1)与正常的肝细胞LO2相比,在肝癌细胞系Hep G2,Huh7及Hep3B中,Pin1蛋白高表达,而Pin1 m RNA在Hep G2细胞中低表达,在Huh7和Hep3B细胞中则是高表达的。(2)利用mi RNA靶基因预测软件筛选出了4个mi RNAs(mi R-140-5p,mi R-429,mi R-200b,mi R-200c)。双荧光素酶报告基因实验和Western blot实验均显示mi R-140-5p作用后,萤火虫荧光素酶活性及Pin1蛋白下调最明显。实验结论:(1)与正常肝细胞相比,Pin1蛋白在不同肝癌细胞系Hep G2,Huh7和Hep3B中高表达;Pin1 m RNA在Hep G2细胞中低表达,而在Huh7和Hep3B细胞中高表达。(2)mi R-140-5p是Pin1基因的靶标mi RNA。
【关键词】：肝癌细胞 靶向调控 miR-140-5p
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 英文缩略词4-6
• 中文摘要6-7
• 英文摘要7-8
• 前言8-13
• 第一章 Pin1 在不同肝癌细胞系中的表达13-27
• 材料和方法13-22
• 1. 实验材料和仪器13-16
• 1.1 主要试剂及其来源13-14
• 1.2 主要设备仪器及其来源14-15
• 1.3 细胞株15
• 1.4 引物15
• 1.5 试剂配制15-16
• 2. 方法16-21
• 2.1 细胞培养16-17
• 2.2 细胞总蛋白的提取及浓度测定17-18
• 2.3 Western Blot分析18-19
• 2.4 Real-time PCR实验19-21
• 3.统计学分析21-22
• 结果22-24
• 1. Pin1 蛋白在不同肝癌细胞系的相对表达水平.22
• 2. Pin1 mRNA在肝癌细胞株中的相对表达水平22-24
• 2.1 RNA样品鉴定22-24
• 2.2 Real-time PCR反应条件及特异性判定24
• 2.3 Real-time PCR结果分析24
• 讨论24-27
• 第二章 靶向调控Pin1 的miRNA筛选及验证27-48
• 材料和方法27-39
• 1. 材料27-31
• 1.1 主要试剂及其来源27-28
• 1.2 主要设备仪器及其来源28-29
• 1.3 细胞株29
• 1.4 引物29-30
• 1.5 试剂配制30-31
• 2. 方法31-39
• 2.1 靶基因Pin1的生物信息学预测31
• 2.2 细胞培养31
• 2.3 细胞转染31-32
• 2.4 细胞总蛋白提取及浓度测定32
• 2.5 双荧光素酶报告基因质粒构建32-38
• 2.6 双荧光素酶报告基因检测38
• 2.7 Western blot验证38-39
• 3.统计学分析39
• 结果39-45
• 1. 靶向调控Pin1 的miRNAs的生物信息学预测39-40
• 2. 双荧光素酶报告基因质粒的构建40-42
• 2.1 pmir GLO-Pin1-3’UTR-wt质粒的构建40-41
• 2.2 pmir GLO-Pin1-3’UTR-mut质粒的构建41-42
• 3. 双荧光素酶报告基因实验42
• 4. Western Blot实验验证42-43
• 5. 双荧光素酶报告基因突变回复实验43-45
• 讨论45-48
• 总结48-49
• 参考文献49-60
• 致谢60-61
• 综述61-72
• 参考文献66-72

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