5-Aza调控单核细胞白血病细胞增殖、分化和迁移的机制研究

发布时间：2017-09-09 01:05

  本文关键词：5-Aza调控单核细胞白血病细胞增殖、分化和迁移的机制研究

  更多相关文章： 5-Aza THP-1细胞 CCL2 CCR2 迁移 分化 增殖

【摘要】：背景与目的:5-Aza(5-氮杂胞嘧啶核苷)是一种甲基化抑制剂,为胞嘧啶核苷类似物,目前5-Aza已被美国FDA批准用于MDS、急性白血病等肿瘤的临床治疗,其抗肿瘤的主要机制是去甲基化作用,激活因高度甲基化而沉默的基因,包括肿瘤抑制基因、转录因子、细胞周期抑制剂基因等。尽管5-Aza单独应用或与其它药物联用都展示了较好的临床疗效,但仍然发现其存在耐药问题。目前的研究认为,导致耐药的关键因素可能是5-Aza上调了与细胞迁移和侵袭相关的基因表达,但具体的分子机制和调控过程仍然报道较少。本课题旨在研究5-Aza影响人急性单核细胞白血病THP-1细胞迁移、分化、增殖的可能机制,并探究可以解决这种不利影响的有效方案。方法:1.RT-PCR检测5-Aza药物刺激细胞后CCL2及CCR2表达的变化;利用ELISA法检测经5-Aza刺激后,细胞分泌的CCL2含量的变化;利用Trans Well实验,检测经5-Aza、趋化因子受体阻断剂及细胞外信号调节激酶阻断剂处理细胞后,细胞的迁移率的改变;Western blot实验,经5-Aza刺激后的THP-1细胞中CCR2、p-ERK、p-AKT、ERK、AKT表达的变化。2.流式细胞仪检测THP-1细胞经5-Aza刺激后CD14+细胞比例;瑞氏-吉姆萨染色观察THP-1细胞经5-Aza刺激后,形态的改变。3.CCK-8实验和Brd U染色检测细胞增殖情况。结果:1.THP-1细胞经5-Aza处理后,CCL2及CCR2基因表达上调,CCR2蛋白表达上调,细胞迁移率增加;5-Aza、CCR2抑制剂联合用药组,细胞迁移率降低;5-Aza、ERK阻断剂联合用药组,细胞迁移率降低;5-Aza处理组,细胞P-ERK表达水平升高,ERK、P-AKT、AKT无明显改变;2.流式细胞仪CD14检测,药物处理组CD14+细胞比例约为未加药组的1.3倍;形态学观察:药物处理组细胞出现向巨噬细胞变化的改变。3.在CCK-8试验显示,不同浓度的药物处理组,细胞增殖率逐渐减低;药物处理组Brd U含量比例降低。结论:5-Aza引起CCL2、CCR2基因的表达上调,引起P-ERK表达升高;5-Aza通过CCL2-CCR2-ERK信号通路的激活促进THP-1细胞的迁移;5-Aza促进THP-1细胞的分化;抑制THP-1细胞的增殖。
【关键词】：5-Aza THP-1细胞 CCL2 CCR2 迁移 分化 增殖
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R733.7
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 缩略词表8-11
• 第一章 绪论11-21
• 1 肿瘤细胞与趋化因子11
• 2 趋化因子CCL2与CCR2的生物学特性11-13
• 3 CCL2-CCR2信号在肿瘤细胞转移过程中的作用13-15
• 4 CCL2-CCR2信号影响肿瘤细胞转移性的临床/实验数据15-19
• 4.1 乳腺癌15-16
• 4.2 大肠癌16-17
• 4.3 前列腺癌17-18
• 4.4 其他癌症18-19
• 5 CCL2-CCR2调节肿瘤细胞转移的其他表现19-21
• 第二章 材料与方法21-33
• 1 实验材料21-22
• 1.1 主要试剂21-22
• 1.2 主要实验仪器22
• 1.3 细胞系22
• 2 实验方法22-33
• 2.1 细胞培养22-23
• 2.2 5-Aza影响THP-1 细胞迁移的机制研究23-31
• 2.3 5-Aza对THP-1 细胞分化的影响31-32
• 2.4 5-Aza对THP-1 细胞增殖的影响32-33
• 第三章 实验结果33-41
• 1 5-Aza对影响THP-1 细胞迁移的机制研究33-38
• 1.1 5-Aza通过调节CCL2-CCR2信号促进THP-1 细胞的迁移33-36
• 1.2 CCL2-CCR2信号改变、ERK磷酸化在 5-Aza促进THP-1细胞的迁移过程中的作用36-38
• 2 5-Aza对THP-1 细胞分化的影响38-39
• 2.1 流式细胞仪法检测CD1438
• 2.2 5-Aza处理后细胞形态变化38-39
• 3 5-Aza对THP-1 细胞增殖的影响39-41
• 3.1 CCK-8 检测细胞增殖39
• 3.2 BrdU实验检测细胞增殖39-41
• 第四章 讨论41-45
• 第五章 结论45-46
• 参考文献46-56
• 致谢56

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