控制TaAGPL1基因表达上游调控因子的分离及其功能研究
发布时间：2021-11-11 19:31
ADP-葡萄糖焦磷酸化酶（AGPase）是淀粉生物合成中的关键酶,由成对的两个大亚基（AGPL）和成对的两个小亚基（AGPS）组成的异源四聚体,分为胞质型和质体型两种,因此,在植物细胞内存在四类AGPase亚基:AGPase胞质型大亚基（AGPL1）、胞质型小亚基（AGPS1）、质体型大亚基（AGPL2）和质体型小亚基（AGPS2）。课题组前期研究结果表明,小麦淀粉合成基因TaAGPL1的过表达能显著提高小麦籽粒AGPase活性和淀粉积累速率,从而证明了它在小麦籽粒淀粉合成中的重要作用。本研究运用酵母单杂交技术,通过将TaAGPL1 promoter与小麦籽粒cDNA文库进行酵母单杂交,筛选出控制TaAGPL1基因表达的上游调控因子,并利用大麦条纹花叶病毒诱导的基因沉默（BSMV-VIGS）技术对调控因子进行功能研究,从而探究了调控TaAGPL1基因表达的分子机制。主要结果如下:（1）运用酵母单杂交技术筛选出控制TaAGPL1表达的两个调控因子（TabHLH39转录因子和TaPDIL1-2分子伴侣）。分离出TabHLH39基因的cDNA序列,它编码了486个氨基酸,蛋白序列包含了bHL...
【文章来源】：河南农业大学河南省
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
禾本科胚乳细胞内淀粉合成的过程(Jeonetal.,2010;PfisterandZeeman2016)
tal.,2005;Radchuketal.,2009;Yanetal.,2009;Kangetal.,2013a;Wangetal.,2014;Bahajietal.,2014;Bilaletal.,2015;Houetal.,2017)。1.2AGPase同工酶基因研究进展在禾本科作物淀粉合成的六大类相关酶中，AGPase在淀粉合成过程中发挥着关键作用，这是因为经AGPase催化合成的ADP-Glc是淀粉合成的底物(Tetlowetal.,2004;Devietal.,2010;TuncelandOkita,2013)。根据在细胞内存在的部位不同，AGPase分为胞质型(cytosolic)和质体型(plastidial)两类，其结构是由成对的两个大亚基与小亚基组成的异源四聚体(GeorgelisandHannah,2008)(图1.2)。因此，在植物细胞内AGPase存在着4种类型的亚基：即胞质型大亚基和小亚基(cytosoliclargesubunit,AGPL1或LSUI；cytosolicsmallsubunit，AGPS1或SSUI)、质体型大亚基和小亚基(plastidiallargesubunit,AGPL2或LSUII；plastidialsmallsubunit,AGPS2或SSUII)(Burtonetal.,2002;Tetlowetal.,2004)。图1.2高等植物细胞内AGPase异源四聚体的结构(TuncelandOkita2013)注：A和C为大亚基，B和D为小亚基Fig.1.2StructureofAGPaseheterotetramerinhigherplantcells.Note:A,CandB,Darelargesubunitandsmallsubunit,respectively.
件结合位点的预测等方面的探索提供了宝贵依据。1.3.3酵母单杂交技术酵母单杂交是一种研究真核生物内DNA-蛋白质间相互作用的技术，具有最强活性的启动子片段通过与cDNA文库单杂交从而直接筛选到与靶基因互作的蛋白。基本原理：将已知特定功能的顺式元件构建到最基本启动子(minimalpromoter,Pmin)的上游，在Pmin的下游连接报告基因(常用的有HIS3系统)。之后，将酵母转录激活结构域(transcriptionactivationdomain,AD)融合表达载体与cDNA文库共转酵母细胞，通过观察与检测报告基因是否表达，从而来确定是否筛选到互作调控因子(图1.3)。图1.3酵母单杂交原理Fig.1.3Theprincipleofyeastone-hybridassay.酵母单杂交技术具有操作简便、效率高、反应灵敏等优点，所以被广泛应用于植物转录调控方面的研究。目前，许多关于运用此技术而筛选出调控因子的文章已被大量报道，如Gao等人运用酵母单杂交技术筛选出与BjCHI1启动子中W-box元件相结合的BjMYB转
【参考文献】：
期刊论文
[1]转录因子在植物进化和抗逆中的作用[J]. 孙丽芳,邢少辰,张君,杨建福,王兴智,董英山. 基因组学与应用生物学. 2009(03)
博士论文
[1]病原诱导启动子和组织特异性启动子的分离克隆和功能鉴定[D]. 蔡萌.华中农业大学 2007
本文编号：3489398
【文章来源】：河南农业大学河南省
【文章页数】：56 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
禾本科胚乳细胞内淀粉合成的过程(Jeonetal.,2010;PfisterandZeeman2016)
tal.,2005;Radchuketal.,2009;Yanetal.,2009;Kangetal.,2013a;Wangetal.,2014;Bahajietal.,2014;Bilaletal.,2015;Houetal.,2017)。1.2AGPase同工酶基因研究进展在禾本科作物淀粉合成的六大类相关酶中，AGPase在淀粉合成过程中发挥着关键作用，这是因为经AGPase催化合成的ADP-Glc是淀粉合成的底物(Tetlowetal.,2004;Devietal.,2010;TuncelandOkita,2013)。根据在细胞内存在的部位不同，AGPase分为胞质型(cytosolic)和质体型(plastidial)两类，其结构是由成对的两个大亚基与小亚基组成的异源四聚体(GeorgelisandHannah,2008)(图1.2)。因此，在植物细胞内AGPase存在着4种类型的亚基：即胞质型大亚基和小亚基(cytosoliclargesubunit,AGPL1或LSUI；cytosolicsmallsubunit，AGPS1或SSUI)、质体型大亚基和小亚基(plastidiallargesubunit,AGPL2或LSUII；plastidialsmallsubunit,AGPS2或SSUII)(Burtonetal.,2002;Tetlowetal.,2004)。图1.2高等植物细胞内AGPase异源四聚体的结构(TuncelandOkita2013)注：A和C为大亚基，B和D为小亚基Fig.1.2StructureofAGPaseheterotetramerinhigherplantcells.Note:A,CandB,Darelargesubunitandsmallsubunit,respectively.
件结合位点的预测等方面的探索提供了宝贵依据。1.3.3酵母单杂交技术酵母单杂交是一种研究真核生物内DNA-蛋白质间相互作用的技术，具有最强活性的启动子片段通过与cDNA文库单杂交从而直接筛选到与靶基因互作的蛋白。基本原理：将已知特定功能的顺式元件构建到最基本启动子(minimalpromoter,Pmin)的上游，在Pmin的下游连接报告基因(常用的有HIS3系统)。之后，将酵母转录激活结构域(transcriptionactivationdomain,AD)融合表达载体与cDNA文库共转酵母细胞，通过观察与检测报告基因是否表达，从而来确定是否筛选到互作调控因子(图1.3)。图1.3酵母单杂交原理Fig.1.3Theprincipleofyeastone-hybridassay.酵母单杂交技术具有操作简便、效率高、反应灵敏等优点，所以被广泛应用于植物转录调控方面的研究。目前，许多关于运用此技术而筛选出调控因子的文章已被大量报道，如Gao等人运用酵母单杂交技术筛选出与BjCHI1启动子中W-box元件相结合的BjMYB转
【参考文献】：
期刊论文
[1]转录因子在植物进化和抗逆中的作用[J]. 孙丽芳,邢少辰,张君,杨建福,王兴智,董英山. 基因组学与应用生物学. 2009(03)
博士论文
[1]病原诱导启动子和组织特异性启动子的分离克隆和功能鉴定[D]. 蔡萌.华中农业大学 2007
本文编号：3489398
本文链接：https://www.wllwen.com/kejilunwen/jiyingongcheng/3489398.html
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