家蚕蛹表达人生长激素蛋白及其生物活性的分析.pdf 全文

  本文关键词：家蚕蛹表达人生长激素蛋白及其生物活性的研究，由笔耕文化传播整理发布。

浙江大学生命科学学院 博士学位论文 家蚕蛹表达人生长激素蛋白及其生物活性的研究 姓名：蓝航莲 申请学位级别：博士 专业：生物化学与分子生物学 指导教师：张耀洲 座机电话号码 浙江大学博：l：论文 中文摘要 人生长激素 hGH 是由人垂体前叶细胞分泌的一种多肽类激素，对机体的 组织、器官以及各种代谢活动都起着重要的生理功能。本试验首先构建了重组质 mMIPTG在大肠杆菌中诱导带rhGH融合蛋白的 粒pET28a--hGH，经终浓度为1 表达，，融合蛋白带有His6标签；纯化得到无生物活性的融合蛋白作为抗原免疫雄 性新西兰大白兔，收集抗血清后采用硫酸铵沉淀方法纯化多克隆抗体；抗血清的 效价为l：25600；Westemblot结果显示多克隆抗体存在较高的特异性，以rhGH 为抗原制得的抗体也可以和hGH蛋白发生特异性结合反应。高效抗一hGH多克隆 抗体的制备为下游的工作奠定了基础。 昆虫杆状病毒是与原核、酵母以及哺乳动物细胞系统并存的表达外源蛋白的 一类重要表达系统，因其可以高效表达有活性的外源蛋白而被广泛应用。家蚕杆 状病毒表达系统是昆虫杆状病毒的重要组成部分，本试验利用该系统在受体家蚕 细胞和蚕蛹中合成hGH。利用共转染技术携带有hGH基冈的重组转移质粒 组，产生有插入hGH基因的重组家蚕杆状病毒；利用空斑分析以及lac―z基因的 hGH基因。TCID50检测重组病毒的滴度为6．0×108PFU／ml；家蚕细胞感染 vBmhGH表达rhGH，最大表达量为约

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