滇池细菌优势种抑藻物质的分离纯化及其抑藻机理

发布时间：2016-11-08 09:40

  本文关键词：铜绿假单胞菌产吩嗪类色素的分离纯化及其对赤潮生物生长的影响，由笔耕文化传播整理发布。

《云南大学》 2012年

滇池细菌优势种抑藻物质的分离纯化及其抑藻机理

冯阳  

【摘要】：随着水体富营养化现象的日趋严重及有害藻类水华的频繁暴发,急需探索行之有效的藻类水华控制方法。微生物法具有具有廉价、安全、不破坏水体生态环境的特点。利用土著微生物抑制蓝藻水华的方法成为目前生物控藻的研究热点之一。 本文利用分泌物添加法研究了5株滇池水体土著溶藻细菌胞外分泌物对铜绿微囊藻的抑藻效应,发现编号为N1、N4、N5、W7和Y3的细菌胞外分泌物对藻细胞生长的抑制率分别为79.68%、64.71%、50.80%、37.79%和73.26%。选取其中胞外分泌物抑藻能力最强的N1菌株,从细菌培养、分泌物中活性物质的分离、提纯、鉴定及其抑藻机理这三个层次开展了系列研究。结果表明： (1)N1菌株培养条件为72h、pH=7.5时,衰退期的胞外分泌物对铜绿微囊藻的抑制作用较好。 (2)经过高温处理过的N1细菌胞外分泌物,抑藻活性仍然很高,而细菌菌体破碎处理后的抑藻活性较低,高温处理后,对铜绿微囊藻没有抑制作用。说明主要的抑藻成分在细菌胞外分泌物中,并表现出热稳定性。 (3)采用液-液萃取法将细菌N1发酵后的胞外分泌物初步分离为乙酸乙酯相、正丁醇相和水相三个部分,其中乙酸乙酯相、正丁醇相组分对铜绿微囊藻的半致死浓度分别为47.6和71.5mg/L。进一步经柱层析分离、薄层层析(TLC)和高效液相色谱(HPLC)检测(将相同或相似馏分合并)、活性跟踪,从Ⅱ和V这2个活性较强的组分中提纯得到两个不饱和脂肪酸类化合物(N1-1B和N1-5D),其72h的半致死剂量分别为9.2mg/L和31.0mg/L (4)N1-1B和N1-5D均能降低藻细胞数量及叶绿素a含量,N1-1B刺激下单个铜绿微囊藻的叶绿素含量比对照组的有明显的增加。推断是N1-1B可以抑制藻细胞的分裂,造成细胞内的色素积累。两种化合物均能抑制超氧化物歧化酶(SOD)的活性,导致脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量升高。在后期,N1-1B主要导致藻细胞的过氧化损伤,铜绿微囊藻数量大大减少。但N1-5D处理下的藻细胞MDA水平比N1-1B处理下的要低。结合N1-5D类胡萝卜素的含量变化不大,分析表明,N1-5D对铜绿微囊藻的类胡萝卜素含量影响不大,而类胡萝卜素可以在一定程度上降低活性氧水平。减轻N1-5D对铜绿微囊藻细胞的损伤。随着处理时间的延长,N1-5D对铜绿微囊藻细胞造成不可逆的损伤。因而,N1-5D对铜绿微囊藻的72h-ECso要远远高于N1-1B,抑藻效果没有N1-1B强。 从滇池细菌优势种N1菌株的发酵液中分离纯化得到的两个脂肪酸抑藻化合物,表现出较好的活性,并表现出对铜绿微囊藻不同的抑藻机理。可以进一步研究开发,对今后应用这种方法控藻有一定的指导意义。

【关键词】：
【学位授予单位】：云南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：X172
【目录】：

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