人参、西洋参、三七超低温保存研究

发布时间：2020-07-24 05:38

【摘要】：人参(Panax ginseng C.A.Mey)、西洋参(P.quinquefolius Linn.)、三七(P.notoginseng(Burk.)F.H.Chen)为五加科人参属代表药用植物,具有颇高的药用和经济价值。本试验首先以裂口人参种子、西洋参愈伤组织和三七愈伤组织为试材,通过探讨装载时间、脱水时间、冷冻保护剂种类等对其超低温保存成活率的影响,建立起三者的超低温保存体系;再以冻存过程中的西洋参愈伤组织为试材,通过生理生化指标测定和超微结构观察,初步探讨其超低温保存存活机制,主要研究结果如下:1.人参裂口种子最佳超低温保存方法为:将含水量为10%的裂口种子装入冻存管密封后,迅速投入液氮,一周后取出,40℃水浴解冻,土播。30d后,统计出苗率可达85.80%。SSR分子标记,未发现差异条带。2.西洋参愈伤组织最佳超低温保存程序为:将快速生长期的西洋参愈伤组织放入冻存管,加入60%PVS2溶液(MS+30%甘油+15%乙二醇+15%DMSO+0.4MSuc)室温处理20min,随后将溶液更换成100%PVS2,0℃处理40min后,迅速投入液氮,48h后取出,40℃水浴解冻,洗涤。恢复培养60d后统计存活率为45%。SSR分子标记,未发现差异条带。3.三七愈伤组织最佳超低温保存过程为:将快速生长期的三七胚性愈伤组织转入冻存管后,加入冷冻保护剂PVS3溶液(MS+40%甘油+40%蔗糖),室温下处理30min后更换新鲜冷冻保护剂,置于程序降温仪,放入-80℃冰箱12h后,投入液氮,保持48h。取出,40℃水浴解冻,洗涤。恢复培养30d后统计存活率为80%。SSR分子标记,未发现差异条带。4.对西洋参愈伤组织超低温保存过程中可溶性蛋白质、丙二醛(MDA)和过氧化物酶(POD)的测定结果表明:蛋白质含量在装载和脱水过程中增加,MDA含量下降,POD酶活性上升,解冻后细胞的蛋白质含量开始下降,MDA含量剧增,POD酶活性有所下降。透射电镜超微结构观察发现,西洋参愈伤组织细胞在经过玻璃化液脱水处理后发生质壁分离,随着液氮冻存和解冻加深了质壁分离的程度,部分细胞受到不可逆的伤害,部分细胞经过恢复培养恢复正常生长。综上,本试验建立起人参、西洋参和三七组培材料的超低温保存体系,可为其种质资源的保存提供材料基础和理论依据;对其超低温保存过程中的细胞结构和化学物质进行研究,以期为西洋参愈伤组织冻存机制的探讨以及超低温保存技术的优化提供理论参考依据。
【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：S567.51;S567.53;S567.236
【图文】：

种子生活力,降低含水量,含水量,生活力

含水量对超低温保存前后人参裂口种子生活力的影响

超低温保存,电泳条,材料,人参

注：a 为人参对照组，b 为人参样品组。图 1.2 超低温保存再生材料和与对照组Fig.2.1 Cryopreservation of recycled materials and control1.3.1.5 SSR 分子标记结果参考杨成君等[11]关于人参 EST-SSR 的报道，以 pg668 为引物（上游序列CTGGCATCGAAGTTTCTCCATTC；下游序列 TGCATAGCACAGAGAGGAGG），对超低温保存前后的人参裂口种子遗传稳定性进行分析，见图 1.3，结果表明：对照组与处理组相比均无差异条带，人参超低温保存材料具有较高的遗传稳定性。

再生材料,超低温保存,对照组,人参

注：a 为人参对照组，b 为人参样品组。图 1.2 超低温保存再生材料和与对照组Fig.2.1 Cryopreservation of recycled materials and controlSR 分子标记结果杨成君等[11]关于人参 EST-SSR 的报道，以 pg668 为引物（上游ATCGAAGTTTCTCCATTC；下游序列 TGCATAGCACAGAGAGGA保存前后的人参裂口种子遗传稳定性进行分析，见图 1.3，结果表处理组相比均无差异条带，人参超低温保存材料具有较高的遗传

【参考文献】