抗旱、耐盐转基因旱稻的种质资源创制

发布时间：2020-09-18 11:14

　　 在本课题的前期研究中,将来自于小立碗藓的胚胎发育晚期丰富蛋白样蛋白(Gene ID:112292083,将该基因命名为DEHY)的基因分别转入了鲲旱1号(简称H1)、鲲旱2号(简称H2)及旱糯3号(简称HN3)等三个品种的旱稻中,获得大量阳性转基因株系。本课题即是对旱稻转基因后代进行纯合株系的筛选和进一步分析鉴定,主要结果如下:1、在田间和实验室,利用喷施一定浓度的除草剂对不同天数的转基因株系进行筛选,对喷施除草剂后全部存活的转基因株系分别选取一定数量的单株,进行目的基因PCR鉴定,筛选得到一批候选纯合体株系,具体筛选结果为:DEHY转化H1得到8个,DEHY转化H2得到20个,DEHY转化HN3得到17个候选纯合体株系。2、利用Southern杂交,对候选纯合体株系进行拷贝数分析,筛选到2个单拷贝株系(将其编号为5-37、5-46)、6个二拷贝株系,12个多拷贝株系。3、利用半定量RT-PCR对单拷贝株系和二拷贝株系植株分别进行目的基因的表达量分析,结果显示2个单拷贝株系的目的基因表达量明显高于二拷贝株系。4、利用一定浓度的PEG和NaCl胁迫,在实验室进行幼苗期的抗逆性分析,结果显示:NaCl胁迫条件下,5-37株系复水后存活率最高,达36%;PEG胁迫下,5-37、5-46株系复水后存活率最高,约为21%;随后,利用0.5%NaCl的盐池进行转基因株系田间的初步耐盐性筛选,得到一个高耐盐的转基因株系,即为5-37株系。5、对以上1-2拷贝的转基因株系进行TAIL-PCR插入位点分析,确定DEHY基因已经稳定整合到转基因株系3-18基因组的6号染色体中。分析目的基因插入位点的基因组上、下游10Kbp范围内的几个基因,分别针对野生型与3-18转基因株系,对这几个基因进行定量PCR分析,结果显示插入位点下游基因Os06g0663900的表达量明显低于野生型植株。
【学位单位】：河北科技大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：S511.6
【部分图文】：

注：A、C 为转基因株系，B 为野生型株系；喷施浓度 0.8mg/mL图 2-1 田间除草剂喷施效果由图可知中间为野生型材料，在喷施除草剂 3-5 天后全部变黄死亡，两边基因株系没有死亡，说明该株系内含有抗除草剂基因，由此可以说明目的基经成功转入旱稻基因组内，并能够正常表达。在田间大面积喷施除草剂后，

注：a 为除草剂前图片，b 为除草剂后图片；1、2 表示待测转基因株系，W 表示野生型株系图 2-2 除草剂前后对比图从单株收获的种子中，一个株系内挑选 3-5 包，每包挑选 30 粒左右籽粒比较饱满的种子萌发，等长到三叶一心时候，喷施浓度为 0.8mg/mL 的除草剂，3天后记录苗子生长状态，如下图 2-3 所示。图 a 为待鉴定的株系除草剂前，图中

注：a 为除草剂前图片，b 为除草剂后图片；3、4 表示待测转基因株系，W 表示野生型株图 2-3 除草剂前后对比图2.4.3 转 DEHY 候选纯合株系 PCR 鉴定

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本文编号：2821569