IAA促生菌的分离鉴定及对烟草种子萌发与烟苗生长发育的影响

发布时间：2020-10-10 12:03

　　 微生物广泛存在于自然环境中,其活动影响着土壤物质转化和植物生长,在农业可持续发展中发挥重要作用。烟草是我国经济发展的重要支柱产业,为避免化肥破坏利用传统土壤和污染环境,发展以微生物农业为核心的“白色农业”十分重要。本试验以传统培养的方式分离、16SrDNA的方法鉴定延边地区烟草内生和根际细菌,研究品种与地区之间微生物的多样性。以Salkowski比色法筛选出具有产IAA能力的促生菌株,并对其液体培养基进行优化,研究细菌间互作对烟草种子萌发和生长的影响,为掌握延边地区可利用的促生菌及复合菌肥的研制,以改善土壤环境并培育更优质的烟草奠定基础。研究主要结论如下:1、从汪清、和龙、延吉三个地区分离得到内生与根际细菌共29个属72株,其中棒状杆菌属(Corynebacterium)、不动杆菌属(Acinetobacter)、沙雷氏菌属(Serratia)、罗氏菌属(Rofthiaaeria)、黄杆菌属(Flavo6bacterfium)、罗丹杆菌属(Rhodanobacter)仅在汪清地区中发现,芽孢八叠球菌属(Sporosarcina)、类节杆菌属(Paernarrthrobacter)、短波单胞菌厲(Brevundimonas)仅在和龙地区中发现,纤维微细菌属(Cellloszimicrobium)、SpHingopyxis、类芽抱杆菌属(Paenibacillus)、志贺氏菌属(Shinellafusca)、库克菌属(AKocuria)、肠杆菌属(Enterobacter)仅在延吉地区中发现,芽抱杆菌属(·Bacillus)、假单胞菌属(Pseudomonas)在三个地区烟草与根际土壤中均有发现,为优势菌属,其中芽孢杆菌属为最优势菌属。2、从延边地区烟草内生和根际土壤分离的细菌中,具有产IAA能力的有28株,占总菌数的38.89%,芽孢杆菌属为优势菌属,其中菌株m10、m53、m60IAA的单位产量分别为 24.73mg L~(-1)、26.8mg·L~(-1)、22.mg·L~(-1)3、菌株m10、m53、m60分别在72h、24h和48h时IAA产量达到最大值;添加色氨酸的菌株产IAA含量与对照相比有显著差异;菌株ml0、m53、m60的最适pH值分别为8、6、6;三个菌株的最适碳源均为淀粉,最适浓度分别为10g.L~(-1)、20g·L~(-1),10g·L~(-1);最适氮源前二者均为蛋白胨、m60为酵母粉,浓度分别为 5g·L~(-1)、20g·L~(-1)、20g·L~(-1);硫酸镁浓度分别为 10g·L~(-1)、15g·L~(-1)、10g·L~(-1)。4、用响应面法优化菌株m10、m53、m60液体发酵培养基,IAA最佳产M的培养基条件如下,碳源浓度分别为11.92g·L~(-1)、19.95g·L~(-1)、15.76g·L~(-1);氮源浓度分别为 20.2g·L~(-1)、20.97g.L~(-1)、10.39g·L~(-1);MgS04 浓度分别为 10.38g·L~(-1)、15.37g·L-I、19.94g·L~(-1);pH 值分别为 7.93、6.16、6.11。三菌株在此条件下产 IAA含量分别为 11.16g·L~(-1)、47.16mg·L~(-1)、16.47mg·L~(-1)。5、施用单一菌剂和混合菌剂均能促进种子萌发和幼苗生长,与不施加促生菌的对照相比,种子发芽势、发芽率、发芽指数和活力指数分别增加了 30.61%、8.36%、31.13%、36.9%,苗长和根长分别增加了 11.37%和57.11%,其中T6处理即菌株m53和m60混合施用对烟草种子和幼苗生长效果最好。
【学位单位】：延边大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：S572
【部分图文】：

注：“Ｇ”代表根，？？？！”代表茎，“Ｙ”代表叶子??＊Ｇ＇?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ?ｔｈｅ?ｒｏｏｔ．＊Ｊ＇?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ?ｔｈｅ?ｓｔｅｍ，?＇Ｙ＇?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ?ｔｈｅ?ｌｅａｖｅｓ??从图２．１可以看出，从烟草不同组织分离出的内生菌符合根＞茎＞叶的分布规??律，其中从根中分离出的内生菌占总数的４９％，从茎中分离出的内生菌占３０％，??叶占总数的２１％

应见表４．３，结果表明，３株菌株间均不发生拮抗反应，各菌株可以混合培养不??产生拮抗。??？?表３．３．菌株拮抗作用测试??Ｔａｂｌｅ４．３．?Ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ?ｔｅｓｔ?ｏｆ?ｓｔｒａｉｎ??ｍｌＯ?ｍ５３?ｍ６０??ｍｌＯ?－?－??ｍ５３?＿?－??ｍ６０?－?－??注：表示有拮抗反应；表示无拮抗反应??３．５．４培养时间对菌株产ＩＡＡ能力的影响??由图３．１可以看出，Ｔ２处理生长最快２４ｈ菌浓度即可达到最大值，Ｔ１次之??３６ｈ达到菌浓度最高值，而Ｔ３处理生长较为缓慢，即４８ｈ才能达到最大菌浓度，??Ｔ４？Ｔ５处理在６０ｈ后达到稳定阶段，混合菌培养菌浓度要大于单菌培养的菌浓度，??证明三株菌株之间有相互促进生长的作用。??

ＰＨ值?ｐＨ值??图３．４?ｐＨ值对菌株及组合产ＩＡＡ能力的影响??Ｆｉｇ．３．４?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ｐＨ?ｏｎ?ＩＡＡ?ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ?ａｂｉｌｉｔｙ?ｏｆ?ｓｔｒａｉｎ?ａｎｄ?ｉｔｓ?ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ??３．?７．?７碳源对菌株产ＩＡＡ能力的影响??从图３．５和图３．６中可以看出，Ｔ１、Ｔ２、Ｔ３处理的最佳碳源为淀粉，Ｔ１处??理在Ｃ源浓度为ｌＯｇｌ－１时的产素含量显著高于其他处理；Ｔ２处理在Ｃ源浓度为??ｌＯｇｉ－１时产素显著高于其他处理；Ｃ源浓度对Ｔ３产素的影响不是很大，在１０、??１５、２０、２５８．１＾的浓度下产素无显著差异。菌株混合培养组合处理中，Ｔ４处理??和Ｔ６处理的最佳碳源均为麦芽糖，分别在Ｃ源浓度为ｂｇ＇Ｌ－１和ａＯｇ?Ｌ－１的条件??下的产素显著大于其他浓度；Ｔ５处理最佳碳源为淀粉，在Ｃ源浓度为ＩＳｇ?Ｌ－１??条件下产素显著大于其他浓度，Ｔ５处理虽没有其他组合产素多，但产素较组成??Ｔ５组合的单菌株产素要多；Ｔ７处理的最佳碳源为甘露醇，其产素能力受Ｃ源??浓度影响不显著。??Ａ?ＱＴｌ?Ｒ?Ｅ３Ｔ４??ＨＴ２?２〇〇?？?Ｊ?Ｑ?丁５??８〇－?Ｃ?１?叹日?丁３?國?ＳＴ６??Ｌ?｜?｜?Ｌ１５。－卜?ａ?ｂ?ＱＴ７??＾６０?＇?｜?Ｓ?ｄ?笔兰?！】Ｊ?＿＿?？??今?＼?＼?｜?＿?Ｉ＇ｃｈ）?
【参考文献】

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本文编号：2835164