瘤毛獐牙菜组培快繁及愈伤组织生理生化特性的研究

发布时间：2020-10-12 00:09

　　 瘤毛獐牙菜Swertia pseudochinensis Hara为龙胆科獐牙菜属植物,是重要的蒙药,具有清湿热、健胃的功效。商品主要来自野生,由于野生资源的急剧减少,已无法满足市场需求。植物组织培养已广泛用于药用植物的快繁,并为中药资源的可持续利用提供了确实可行的途径。开展瘤毛獐牙菜组培快繁及相关技术能有效解决该药材资源短缺的问题。环境变量是影响瘤毛獐牙菜分布的重要因素,对其产地关键环境因子进行分析有助于瘤毛獐牙菜的栽培引种工作。为此,本课题采用随机森林回归分析,得到影响瘤毛獐牙菜分布的环境变量主要为年降水量,其次为年均温,表明湿度和温度是瘤毛獐牙菜生长发育的重要条件。植物组培苗快繁体系的建立,首要条件是消毒。瘤毛獐牙菜以成熟种子为外植体建立快繁体系时,其消毒条件是用70%的84消毒液消毒3 min;然后以MS为基本培养基,在温度为(25±1)℃、光照强度为1500 lx、光照时间为12h/d的条件下培养30 d,即可获得无菌苗。通过对瘤毛獐牙菜脱分化以及再分化条件的筛选,最终结果表明:不同外植体对愈伤组织的诱导效果差异显著。嫩茎的诱导效果较好,其出愈时间早,诱导率高。光照培养下,最适诱导培养基为MS+2.0 mg/L 2,4-D+0.3 mg/L ZT+1.0mg/L 6-BA;黑暗条件下,最适诱导培养基为MS+1.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L6-BA+0.3 mg/L ZT。瘤毛獐牙菜愈伤组织最适增殖培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA;最适分化培养基为MS+0.1 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA。通过对瘤毛獐牙菜组培过程中出现的不同愈伤组织生理生化特征进行比较发现:胚性愈伤组织中的蛋白质含量与可溶性糖含量分别为41.11mg/g、15.91mg/g,均显著高于非胚性愈伤组织中所含有的量;CAT活性为显著高于非胚性愈伤组织;SOD含量低于非胚性愈伤组织,但未达到显著,POD含量显著低于非胚性愈伤组织。表明胚性愈伤组织分生快,组织代谢旺盛,有利于再分化的发生。通过对瘤毛獐牙菜体细胞胚胎发生过程中生理生化变化的研究发现:可溶性糖含量的变化为先降低后升高再降低;可溶性蛋白含量的变化为28-35 d时急剧升高,其余时间相对平稳;SOD活性和POD活性总体呈上升趋势;PPO活性先降低然后升高。表明体细胞胚胎发生过程中,各生理生化指标在愈伤组织不同阶段其含量和活性发生相应变化,为后期愈伤组织的再分化以及组培苗培养条件的优化奠定重要的理论基础。通过对瘤毛獐牙菜愈伤组织及再生植株中主要药效成分进行初步测定,结果发现:原植物中獐牙菜苷含量为0.028%,獐牙菜苦苷含量为0.68%;愈伤组织与组培苗中含量均较低,表明不同材料中的药效成分尚存在差异,引起差异的原因有待作进一步的研究。综上,通过对瘤毛獐牙菜组培快繁中相关生理生化变化的研究,为下一步建立瘤毛獐牙菜组培快繁体系奠定了科学的基础。
【学位单位】：成都中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：S567.219
【部分图文】：

图 1.1 瘤毛獐牙菜区域分布图Fig.1.1Regional distribution map of Swertia pseudochinensis Hara

图 1.1 瘤毛獐牙菜区域分布图Fig.1.1Regional distribution map of Swertia pseudochinensis Hara

成都中医药大学 2018 届硕士研究生毕业论文重要系数为 22.5，海拔其次，重要系数为 15，仍以年日照时数重要性最低，重要系数仅 10。以置换检验的标准误差（Standard Errors）为评价标准，仍以年降水量重要性最高，重要系数为 0.015，以年日照时数重要性最低，重要系数仅 0.008。综上，各环境因子对瘤毛獐牙菜的影响程度依次可能为年降水量>年均温>海拔>无霜期>年日照时数。
【参考文献】

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本文编号：2837331