水稻OsZTL1和OsZTL2的功能及作用机制研究
发布时间：2020-12-09 19:10
ZTL、LKP2以及FKF1作为一种蓝光受体被发现。它们编码的蛋白质具有LOV结构域、F-box结构域及Kelch repeat结构域,因此被称为LFKs家族。在拟南芥中,LFKs作为SCF复合体的组分,通过多泛素化介导的26S蛋白酶体降解途径参与开花期和生物钟的调控过程。OsZTL1和OsZTL2是水稻中LFKs基因家族的成员,分别是拟南芥ZTL和LKP2的同源基因。但是,水稻中的OsZTL1和OsZTL2的功能未知。为了研究它们的功能,我们利用RNA干涉技术,构建了OsZTL1和OsZTL2表达水平下调的转基因材料,深入研究了OsZTL1和OsZTL2的功能及其作用的分子机制。主要的研究结果如下:1.水稻中OsLFKs家族与拟南芥LFKs高度保守。通过生物信息学的方法,找到水稻中的LFK基因,即OsZTL1、OsZTL2和OsFKF1。通过氨基酸序列比对发现,OsLFKs与拟南芥LFKs具有高度的保守性,它们都具有LOV,F-box以及Kelch repeat结构域。2.水稻OsZTL1和OsZTL2与拟南芥LFKs功能存在差异。为确定OsZTL1和OsZTL2是否与拟南芥LFKs...
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：100 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
高等植物中GA的主要合成和代谢途径(Olszewskietal.,2002)
1.3 LFKs 基因家族2000 年，Nelson 等人在拟南芥中发现了一类具有蓝光受体结构域，同时还具 有 E3 泛 素 连 接 酶 活 性 的 蛋 白 家 族 —ZEITLUPE (ZTL)/LOV KELCHPROTEIN2 (LKP2)/FLAVIN-BINGING KELCH REOEAT F-BOX 1 (FKF1)，在生物钟和开花期调控中具有重要作用 (Kiyosue and Wada, 2000; Nelson et al., 2000;Somers et al., 2000)。LFK 家族具有三个保守的结构域，包括靠近 N 端的 LOV 结构域，F-box 结构域以及 C 端的 Kelch repeat 结构域 (Zoltowski and Imaizumi,2014)。LOV 结构域属于 Per-ARNT-Sim（PAS）家族，通常作为蓝光受体行驶功能 (Christie et al., 1999; Demarsy and Fankhauser, 2009)。F-box 结构域是SKP-Cullin-Rbx-F-box (SCF) E3 泛素连接酶复合体的组份 (Takahashi et al.,图 1-3 67 种陆地植物中的 171 个 LFKs 基因的进化树 (Liu et al., 2018b)Figure 1-3 A Bayesian tree inferred from the full-length protein sequencesof 171 LFKs in 67land plants (Liu et al., 2018b)
试验中所用试剂试验中，PCR 扩增需要的酶，订购于 TaKaRa 公司的常规 Taq 酶、北京全式司的高保真酶 FastPfu；载体构建过程中所使用的试剂有常规的限制性内切酶接酶 Solution I、T-载体 pMD18-T，购买于 TaKaRa 公司；试验中琼脂糖凝胶需要的琼脂糖、DNA Marker III 购买于天根生物科技有限公司；琼脂糖凝胶回在 OMEGA 公司购买（货号：D2500）；植物总 RNA 提取试剂 RNAisoPlus To自 TaKaRa 公司（货号：D9108A）；RNase-Free Dnase 来自 Promega 公司（6101）；反转录试剂盒来自 Fermentas 公司（货号：K1622）；Real-time PCR剂 SYBR Premix EX Taq 购买于 TaKaRa 公司（货号为：RR041A）；潮霉素试德国 Roche；其余试验中的一些常规试剂领取于沈阳农业大学设备科。图 2-3 水稻 RNAi 载体 pTCK303 结构图Figure 2-3 Plasmid profile of pTCK303
本文编号：2907347
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：100 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
高等植物中GA的主要合成和代谢途径(Olszewskietal.,2002)
1.3 LFKs 基因家族2000 年，Nelson 等人在拟南芥中发现了一类具有蓝光受体结构域，同时还具 有 E3 泛 素 连 接 酶 活 性 的 蛋 白 家 族 —ZEITLUPE (ZTL)/LOV KELCHPROTEIN2 (LKP2)/FLAVIN-BINGING KELCH REOEAT F-BOX 1 (FKF1)，在生物钟和开花期调控中具有重要作用 (Kiyosue and Wada, 2000; Nelson et al., 2000;Somers et al., 2000)。LFK 家族具有三个保守的结构域，包括靠近 N 端的 LOV 结构域，F-box 结构域以及 C 端的 Kelch repeat 结构域 (Zoltowski and Imaizumi,2014)。LOV 结构域属于 Per-ARNT-Sim（PAS）家族，通常作为蓝光受体行驶功能 (Christie et al., 1999; Demarsy and Fankhauser, 2009)。F-box 结构域是SKP-Cullin-Rbx-F-box (SCF) E3 泛素连接酶复合体的组份 (Takahashi et al.,图 1-3 67 种陆地植物中的 171 个 LFKs 基因的进化树 (Liu et al., 2018b)Figure 1-3 A Bayesian tree inferred from the full-length protein sequencesof 171 LFKs in 67land plants (Liu et al., 2018b)
试验中所用试剂试验中，PCR 扩增需要的酶，订购于 TaKaRa 公司的常规 Taq 酶、北京全式司的高保真酶 FastPfu；载体构建过程中所使用的试剂有常规的限制性内切酶接酶 Solution I、T-载体 pMD18-T，购买于 TaKaRa 公司；试验中琼脂糖凝胶需要的琼脂糖、DNA Marker III 购买于天根生物科技有限公司；琼脂糖凝胶回在 OMEGA 公司购买（货号：D2500）；植物总 RNA 提取试剂 RNAisoPlus To自 TaKaRa 公司（货号：D9108A）；RNase-Free Dnase 来自 Promega 公司（6101）；反转录试剂盒来自 Fermentas 公司（货号：K1622）；Real-time PCR剂 SYBR Premix EX Taq 购买于 TaKaRa 公司（货号为：RR041A）；潮霉素试德国 Roche；其余试验中的一些常规试剂领取于沈阳农业大学设备科。图 2-3 水稻 RNAi 载体 pTCK303 结构图Figure 2-3 Plasmid profile of pTCK303
本文编号：2907347
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