盐诱导对金线莲甾醇含量的影响及相关基因的表达分析
发布时间：2020-12-16 09:32
金线莲（Anoectochilus roxburghii）药用价值极高。其黄酮,甾醇,多糖,三萜等成分均有广泛的开发前景。甾醇类物质的药用价值已被用于治疗高胆固醇、粥样动脉硬化等。金线莲已被证明含有多种甾醇,研究表明其甾醇提取物有一定的抗肿瘤效果。在金线莲甾醇合成关键基因表达和甾醇含量变化之间寻找一定的相关性和调控机理,以提高组织培养或人工栽培金线莲甾醇化合物积累量,对高甾醇品种选育以及未来通过细胞工程技术等手段工厂化生产甾醇也有一定的意义。本研究对金线莲分子水平调控和产物含量进行研究,以甾醇测定为核心,对金线莲甾醇合成路径上的关键酶基因进行克隆,以相关基因的相对表达量测定为辅助,通过生物信息学分析和亚细胞定位,对金线莲甾醇生物合成途径进行探讨,从而进一步了解其次生代谢物合成的机理。本研究的主要结果如下:1.运用超声波辅助提取和高效液相色谱的手段,摸索了金线莲甾醇的提取及检测方法,对受到100 mmol·L-1盐（NaCl）诱导的金线莲植株在0 h（空白对照）,6 h,12 h三个不同时间点进行植物的三种甾醇（分别是麦角甾醇,豆甾醇,β-谷甾醇）进行提取及含量测定...
【文章来源】：福建农林大学福建省
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
植物类异戊二烯物质生物合成途径示意图
图 1-2 酵母 FPS 蛋白的二聚体模型Figure 1-2 Dimer model of yeast FPS protein所有已纯化的 FPS 蛋白都是同源二聚体结构，范围为 32-45 kDa[69,70]。磷酸合成酶基因(GPPS)酸合成酶(Geranyl pyrophosphate synthase)也是酶[71]，其产物可指向 FPS，已经克隆的部分植等植物中，GPPS 蛋白的结构域保守区表现出出，植物 GPPS 基因开放阅读框长度范围为 1度的氨基酸残基。径中，牻牛儿基焦磷酸位于法呢基焦磷酸上游成通道进行转向的关键。是植物合成是否向甾
图 2-1 三种甾醇的混合标准品色谱图Figure 2-1 Chromatogram of mixed standards for three sterols标准品标准曲线上述方法进行标准样的配制及上样，检测后得到三种甾醇的回,可以看出标准曲线的线性相关性极好，相关系数均高于 0.999（2-4）。因此可以根据绘制的标准曲线来计算甾醇含量。表 2-2 三种甾醇标准品的线性回归方程Table2-2 Linear regression equation for three sterol standards甾醇种类 线性回归方程 r麦角甾醇 y = 3027.3C - 44.823 0.999豆甾醇 y = 1322.8C - 9.2995 0.999
【参考文献】：
期刊论文
[1]珠子参中法尼基焦磷酸合酶(FPS)对皂苷生物合成的影响研究[J]. 刘美佳,于怡琳,姜森,张翔,刘迪秋,葛锋. 植物研究. 2018(04)
[2]胡黄连GPPS基因的生物信息学分析[J]. 郑雪,王慧娜,朱彦秋,丁卫凯,李娇娇,周延清,段红英. 河南农业科学. 2018(06)
[3]濒危药用植物茅苍术法呢基焦磷酸合酶基因克隆及其表达分析[J]. 蒋玲,谷巍,巢建国,桑晓华,韩赟,刘青芝,席彩彩. 中草药. 2017(04)
[4]半仿生-回流法提取金线莲中黄酮的研究[J]. 吕鉴泉,黄健如,魏晓旋,叶韵斯,陈晓榆,邹林江. 广东化工. 2016(11)
[5]基于转录组信息的艾纳香牻牛儿基焦磷酸合成酶基因(BbGPPS)的克隆及序列分析[J]. 官玲亮,夏奇峰,石小兵,蓝惠萍,陈振夏,赵致,庞玉新. 热带作物学报. 2016(05)
[6]金线莲研究进展[J]. 郭慧慧,蒋元斌,林丛发,周丽英. 福建农业科技. 2016(03)
[7]光照强度与栽培模式对金线莲生长及品质影响[J]. 何碧珠,邹双全,刘江枫,朱萍,邹小兴. 中国现代中药. 2015(12)
[8]燕麦盐胁迫响应基因的差异表达与生理响应的关系[J]. 高彩婷,刘景辉,徐寿军,张玉芹,于华荣. 西北植物学报. 2015(07)
[9]光照强度对金线莲生长及产量的影响[J]. 魏翠华,谢宇,秦建彬,陈沁. 北方园艺. 2015(12)
[10]金线莲研究现状及展望[J]. 韩武章,陈小玲,黄阿凤. 福建热作科技. 2015(01)
博士论文
[1]热胁迫下丹参次生代谢比较转录组学研究[D]. 李东.四川农业大学 2011
[2]两种金线莲生长及与内生真菌共生培养的研究[D]. 赵玥.北京协和医学院 2009
[3]棉花细胞质雄性不育恢复基因的图位克隆及PPR基因家族的分析[D]. 杨路明.南京农业大学 2009
硕士论文
[1]富硒对丹参次生代谢产物含量的影响及多糖提取研究[D]. 粟敏.成都理工大学 2017
[2]不同栽培模式金线莲药材中微量元素、植物激素和甾醇的分析[D]. 林晨.福建医科大学 2015
[3]三七、西洋参中三萜皂苷合成关键酶基因的克隆及表达模式分析[D]. 牛云云.北京协和医学院 2013
[4]钾肥对白桦三萜合成关键酶基因表达的影响[D]. 姬晓明.东北林业大学 2013
[5]小麦法呢基焦磷酸合酶（FPPS）基因克隆及功能分析[D]. 李永波.山东师范大学 2012
[6]金线莲化学成分及脱氧鬼臼衍生物活性研究[D]. 徐静.兰州大学 2011
[7]植物甾醇合成关键酶基因OsSQS遗传转化水稻的研究[D]. 马丹.福建农林大学 2011
[8]8种园林花卉植物耐盐性基础研究[D]. 景璐.内蒙古农业大学 2010
[9]辣椒应答UV-B的转录组差异分析及相关功能基因的分离[D]. 徐波.福建农林大学 2008
[10]金线莲中甾醇和三萜类化合物提取分析及其抑制人慢性白血病粒细胞K562活性研究[D]. 钟添华.福建医科大学 2007
本文编号：2919939
【文章来源】：福建农林大学福建省
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
植物类异戊二烯物质生物合成途径示意图
图 1-2 酵母 FPS 蛋白的二聚体模型Figure 1-2 Dimer model of yeast FPS protein所有已纯化的 FPS 蛋白都是同源二聚体结构，范围为 32-45 kDa[69,70]。磷酸合成酶基因(GPPS)酸合成酶(Geranyl pyrophosphate synthase)也是酶[71]，其产物可指向 FPS，已经克隆的部分植等植物中，GPPS 蛋白的结构域保守区表现出出，植物 GPPS 基因开放阅读框长度范围为 1度的氨基酸残基。径中，牻牛儿基焦磷酸位于法呢基焦磷酸上游成通道进行转向的关键。是植物合成是否向甾
图 2-1 三种甾醇的混合标准品色谱图Figure 2-1 Chromatogram of mixed standards for three sterols标准品标准曲线上述方法进行标准样的配制及上样，检测后得到三种甾醇的回,可以看出标准曲线的线性相关性极好，相关系数均高于 0.999（2-4）。因此可以根据绘制的标准曲线来计算甾醇含量。表 2-2 三种甾醇标准品的线性回归方程Table2-2 Linear regression equation for three sterol standards甾醇种类 线性回归方程 r麦角甾醇 y = 3027.3C - 44.823 0.999豆甾醇 y = 1322.8C - 9.2995 0.999
【参考文献】：
期刊论文
[1]珠子参中法尼基焦磷酸合酶(FPS)对皂苷生物合成的影响研究[J]. 刘美佳,于怡琳,姜森,张翔,刘迪秋,葛锋. 植物研究. 2018(04)
[2]胡黄连GPPS基因的生物信息学分析[J]. 郑雪,王慧娜,朱彦秋,丁卫凯,李娇娇,周延清,段红英. 河南农业科学. 2018(06)
[3]濒危药用植物茅苍术法呢基焦磷酸合酶基因克隆及其表达分析[J]. 蒋玲,谷巍,巢建国,桑晓华,韩赟,刘青芝,席彩彩. 中草药. 2017(04)
[4]半仿生-回流法提取金线莲中黄酮的研究[J]. 吕鉴泉,黄健如,魏晓旋,叶韵斯,陈晓榆,邹林江. 广东化工. 2016(11)
[5]基于转录组信息的艾纳香牻牛儿基焦磷酸合成酶基因(BbGPPS)的克隆及序列分析[J]. 官玲亮,夏奇峰,石小兵,蓝惠萍,陈振夏,赵致,庞玉新. 热带作物学报. 2016(05)
[6]金线莲研究进展[J]. 郭慧慧,蒋元斌,林丛发,周丽英. 福建农业科技. 2016(03)
[7]光照强度与栽培模式对金线莲生长及品质影响[J]. 何碧珠,邹双全,刘江枫,朱萍,邹小兴. 中国现代中药. 2015(12)
[8]燕麦盐胁迫响应基因的差异表达与生理响应的关系[J]. 高彩婷,刘景辉,徐寿军,张玉芹,于华荣. 西北植物学报. 2015(07)
[9]光照强度对金线莲生长及产量的影响[J]. 魏翠华,谢宇,秦建彬,陈沁. 北方园艺. 2015(12)
[10]金线莲研究现状及展望[J]. 韩武章,陈小玲,黄阿凤. 福建热作科技. 2015(01)
博士论文
[1]热胁迫下丹参次生代谢比较转录组学研究[D]. 李东.四川农业大学 2011
[2]两种金线莲生长及与内生真菌共生培养的研究[D]. 赵玥.北京协和医学院 2009
[3]棉花细胞质雄性不育恢复基因的图位克隆及PPR基因家族的分析[D]. 杨路明.南京农业大学 2009
硕士论文
[1]富硒对丹参次生代谢产物含量的影响及多糖提取研究[D]. 粟敏.成都理工大学 2017
[2]不同栽培模式金线莲药材中微量元素、植物激素和甾醇的分析[D]. 林晨.福建医科大学 2015
[3]三七、西洋参中三萜皂苷合成关键酶基因的克隆及表达模式分析[D]. 牛云云.北京协和医学院 2013
[4]钾肥对白桦三萜合成关键酶基因表达的影响[D]. 姬晓明.东北林业大学 2013
[5]小麦法呢基焦磷酸合酶（FPPS）基因克隆及功能分析[D]. 李永波.山东师范大学 2012
[6]金线莲化学成分及脱氧鬼臼衍生物活性研究[D]. 徐静.兰州大学 2011
[7]植物甾醇合成关键酶基因OsSQS遗传转化水稻的研究[D]. 马丹.福建农林大学 2011
[8]8种园林花卉植物耐盐性基础研究[D]. 景璐.内蒙古农业大学 2010
[9]辣椒应答UV-B的转录组差异分析及相关功能基因的分离[D]. 徐波.福建农林大学 2008
[10]金线莲中甾醇和三萜类化合物提取分析及其抑制人慢性白血病粒细胞K562活性研究[D]. 钟添华.福建医科大学 2007
本文编号：2919939
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