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转基因旱稻纯合体筛选及矮杆株系的鉴定

发布时间:2021-03-03 21:08
  由于干旱、盐碱等非生物胁迫因子已经成为影响当前农作物种植的重要因素,提高农作物本身的抗逆能力变得尤为重要。作为水稻的变种,旱稻在某些逆境中有着自己独特的优势,因此优化旱稻性状也越来越成为热门的研究方向。本课题是对前期获得的转小立碗藓胚胎发育晚期丰富蛋白家族LEA3亚家族样蛋白基因(Gene ID:112289949,将该基因命名为LEA8981)的旱稻转基因株系后代进行筛选和分析,主要结果如下:将筛选得到的候选纯合转基因株系进行Southern杂交分析,以鉴定外源基因(LEA8981)拷贝数。获得了2个单拷贝株系、10个2拷贝株系和9个多拷贝株系,并将其中12个含有1-2拷贝数的株系进行了RT-PCR分析,以分析各个低拷贝株系中LEA8981基因的相对表达水平,结果显示,有7个株系中LEA8981的转录水平较高,为后续筛选具有优良抗逆性的旱稻新品系奠定了基础。研究中发现,与野生型相比,单拷贝转基因纯合株系3-28明显矮化,且能稳定遗传。对其进行Tail-PCR检测,证明LEA8981基因已经稳定整合到基因组10号染色体中,并确定了具体的插入位点。为进一步明确该株系... 

【文章来源】:河北科技大学河北省

【文章页数】:70 页

【学位级别】:硕士

【部分图文】:

转基因旱稻纯合体筛选及矮杆株系的鉴定


转基因植株实验室除草剂筛选注:A和B分别是株系3-20喷除草剂和喷除草剂5天后的对比图;C和D分别是株系3-54喷除草剂和喷除草剂5天后的对比图

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图 2-2 转 LEA8981 基因质粒电泳结果注:M 为 Marker,1、2、3、4 分别为所提的四管质粒系的 PCR 检测结果及分析结果为纯合的株系每个株系提取 18 个以上的单株检测,其中以质粒为模板作为阳性对照,简写为号野生型为模板作为阴性对照,简写为“-”;无菌株提取的 DNA 作为模板进行 PCR 扩增,产物分3 所示,阳性对照有特异条带,阴性对照和空白对照,并且和质粒扩增的条带大小一致,因此可以初有目的基因,即为候选纯合株系。图 2-4 所示,阳白对照没有条带,1-21 号大部分样品有条带,但 只是后代部分单株含有目的基因,即该株系为杂选出的 44 个株系全部进行 PCR 检测,共筛选出 个。

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图 2-2 转 LEA8981 基因质粒电泳结果注:M 为 Marker,1、2、3、4 分别为所提的四管质粒2.4.3 转基因株系的 PCR 检测结果及分析将除草剂鉴定结果为纯合的株系每个株系提取 18 个以上的单株的 DNA 进行目的基因的 PCR 扩增检测,其中以质粒为模板作为阳性对照,简写为“+”;未转入目的基因的鲲旱 1 号野生型为模板作为阴性对照,简写为“-”;无菌水为空白对照,简写为“水”;待测单株提取的 DNA 作为模板进行 PCR 扩增,产物分别编号为 1~21,检测结果如下图 2-3 所示,阳性对照有特异条带,阴性对照和空白对照均无条带,1~21号全部有特异条带,并且和质粒扩增的条带大小一致,因此可以初步认定为该株系的各个单株全部含有目的基因,即为候选纯合株系。图 2-4 所示,阳性对照有特异条带,阴性对照和空白对照没有条带,1-21 号大部分样品有条带,但 4、13、14 没有条带,说明该株系只是后代部分单株含有目的基因,即该株系为杂合株系。以此为标准,将除草剂筛选出的 44 个株系全部进行 PCR 检测,共筛选出了候选纯合株系42 个,杂合株系 2 个。

【参考文献】:
期刊论文
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[9]拟南芥lncRNA-At5NC056820过表达载体构建及其转基因植株的抗旱性研究[J]. 毋若楠,王红,杨成成,王争艳,武永军.  西北植物学报. 2017(10)
[10]植物长链非编码RNA进展分析[J]. 高成香,邓粉妮,沈法富.  分子植物育种. 2018(03)

博士论文
[1]番茄长链非编码RNA的进化和基于片段相似性鉴定番茄驯化过程中InDels[D]. 王昕.华中农业大学 2016



本文编号:3061939

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