流式细胞术在植物上的应用
发布时间：2021-03-08 13:46
流式细胞术是20世纪中期迅速发展起来的一项快速分析和分选的技术。它将液流技术、光学技术、计算机技术以及电子技术集于一体,完成对悬浮粒子的准确分析和分选。20世纪80年代这项技术开始在植物DNA含量、细胞周期、转基因以及次级代谢产物累积检测等方面得到广泛应用。本文以不同细胞基因表达的差异化研究为出发点,通过调整消化酶组份、消化时间、固定液的选取、悬浮液的制备、染料的选择等,探索并初步建立了玉米根尖原生质体的分离、流式分析、分选及核酸提取技术体系;同时,还以五种不同类型的玉米淀粉为材料,成功进行了不同来源淀粉的分析和分选,首次建立了淀粉的流式分选技术体系。取得的主要研究成果有:1.玉米根尖组织原生质体的分离和流式分析首先运用酶解法分离根尖组织原生质体,然后再利用流式细胞仪对原生质体进行分析和分选,可得出以下结论:（1）玉米根尖组织在酶解液（含1.00%的纤维素酶及0.30%的离析酶,甘露醇浓度为13%,pH为5.8的CPW溶液）中酶解6h可以得到大量有活性的原生质体。（2）利用25%的蔗糖溶液可实现对粗制原生质体的纯化。（3）根尖组织原生质体需要Hoechst 33342在温度为38℃,p...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
不同酶组合处Fig.2-1Theprotoplastqcombin
A1:0.60% cellulose+0.00% macerozyme; A2:1.00% cellulose+0.00% macerozyme; A3:1.40%cellulose+0.00% macerozyme; A4:1.80% cellulose+0.00% macerozyme; A5:2.20% cellulose+0.00%macerozyme; B1:0.60% cellulose+0.30% macerozyme; B2:1.00% cellulose+0.30% macerozyme;B3:1.40% cellulose+0.30% macerozyme; B4:1.80% cellulose+0.30% macerozyme; B5:2.20%cellulose+0.30% macerozyme; C1:0.60% cellulose+0.60% macerozyme; C2:1.00% cellulose+0.60%macerozyme; C3:1.40% cellulose+0.60% macerozyme; C4:1.80% cellulose+0.60% macerozyme;C5:2.20% cellulose+0.60% macerozyme; D1:0.60% cellulose+0.90% macerozyme; D2:1.00%cellulose+0.90% macerozyme; D3:1.40% cellulose+0.90% macerozyme; D4:1.80% cellulose+0.90%macerozyme; D5:2.20% cellulose+0.90% macerozyme;A1:0.60%纤维素酶+0.00%离析酶; A2:0.60%纤维素酶+0.30%离析酶; A3:0.60%纤维素酶+0.60%离;A4:0.60%纤维素酶+0.90%离析酶; B1:1.00%纤维素酶+0.00%离析酶; B2:1.00%纤维素酶+0.30%酶; B3:1.00%纤维素酶+0.60%离析酶; B4:1.00%纤维素酶+0.90%离析酶; C1:1.40%纤维素酶+0.0离析酶; C2:1.40%纤维素酶+0.30%离析酶; C31.40%纤维素酶+0.60%离析酶; C4:1.40%纤维素酶+0.90%离析酶; D1:1.80%纤维素酶+0.00%离析酶; D2:1.80%纤维素酶+0.30%离析酶; D3:1.80%纤维素酶+0.60%离析酶; D4:1.80%纤维素酶+0.90%离析酶; E1:2.20%纤维素酶+0.00%离析酶; E2:12.20图 2-2 不同酶浓度处理下得到的原生质体数量Fig.2-2 The protoplast quantity of different enzyme combination
易发生涨破现象；而渗透压过高时，原生质体易失去水分原有产量和活性。材料和酶的特性，酶解消化时间对植物组织分离原生质体有较大的间条件下，植物组织经酶解得到较少数目的原生质体；酶解时间过的活性。本实验以上述实验结果配制酶解液，使用最佳酶处理组合最适 pH,置于在离心管中,加入根尖材料。在 30r/min，25±1℃黑暗条 2h 统计一次原生质体数量和活性比例，直至 10h。如图 2-3 所示，当酶解时间较短时，组织酶解不充分，最终得到的随着酶解时间的延长，组织与酶解液有了充足的时间充分接触，得多，酶解时间达到 6h 左右时，原生质体产量达到最大值，表明此组织最佳的酶处理时间，平均每个计数格内有 58 个原生质体；若产物开始下降，可能原因是反应体系中的成分长时间与原生质体接此外振荡提供的动力长时间作用于去掉细胞壁的原生质体，也会破于玉米根尖材料，最佳的酶解时间是 6h。
【参考文献】：
期刊论文
[1]不同胚乳类型玉米籽粒超微结构及其营养品质的动态变化[J]. 马秀凤,郭强,蔺崇明,杨引福. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2016(01)
[2]几种常用病理组织固定液的比较[J]. 唐从国. 中国现代医药杂志. 2015(10)
[3]流式细胞术在植物生物学研究中应用进展[J]. 韩鸿鹏,宋纯鹏. 北方园艺. 2015(15)
[4]禾本科植物原生质体分离研究进展[J]. 彭小群,唐然,解新明. 中国农学通报. 2015(01)
[5]两种碘化丙啶染色DNA定量方法检测HL-60细胞凋亡结果的比较[J]. 徐晓雪,户乃丽,孙丽娜,孔璐. 首都医科大学学报. 2014(06)
[6]单细胞转录组高通量测序分析新进展[J]. 文路,汤富酬. 遗传. 2014(11)
[7]酶解条件对黄瓜原生质体分离效果的影响[J]. 岳备,黄玉兰,林晓婷,耿士庄,赵国峰,梁晓庆,刘延明. 安徽农业科学. 2014(19)
[8]高直链玉米淀粉的理化特性研究[J]. 李志伟,钟雨越,吴权明,王文斌,高杰,刘香香,康慧敏,郭东伟,薛吉全. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2014(07)
[9]玉米和拟南芥的原生质体制备及瞬时表达体系的研究[J]. 赵苏州,卢运明,张占路,赵杨敏,王磊. 安徽农业科学. 2014(12)
[10]玉米胚乳细胞原生质体的分离与流式纯化[J]. 郭艳萍,任成杰,李志伟,王文斌,张仁和,路海东,刘建超,张兴华,薛吉全,郭东伟. 作物学报. 2014(03)
博士论文
[1]单激光四通道流式分析仪的系统设计及性能测试方法研究[D]. 赵书涛.中国科学院研究生院（长春光学精密机械与物理研究所） 2012
[2]植物染色体BAC文库的构建与内多倍化特点的流式分析[D]. 郭东伟.西北农林科技大学 2006
硕士论文
[1]流式细胞仪液流系统设计与实现[D]. 于虎.北京信息科技大学 2015
[2]6种苜蓿属植物多倍体诱导及倍性鉴定研究[D]. 刘倩.扬州大学 2014
[3]基于Coulter原理的细胞计数微流控芯片研究[D]. 刘宇捷.西南交通大学 2012
[4]流式细胞计光学系统的研究[D]. 曹力元.长春理工大学 2009
[5]流式细胞仪DNA倍体测定在鉴别良、恶性胸腔积液的诊断价值[D]. 胡晓蕴.苏州大学 2004
本文编号：3071150
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
不同酶组合处Fig.2-1Theprotoplastqcombin
A1:0.60% cellulose+0.00% macerozyme; A2:1.00% cellulose+0.00% macerozyme; A3:1.40%cellulose+0.00% macerozyme; A4:1.80% cellulose+0.00% macerozyme; A5:2.20% cellulose+0.00%macerozyme; B1:0.60% cellulose+0.30% macerozyme; B2:1.00% cellulose+0.30% macerozyme;B3:1.40% cellulose+0.30% macerozyme; B4:1.80% cellulose+0.30% macerozyme; B5:2.20%cellulose+0.30% macerozyme; C1:0.60% cellulose+0.60% macerozyme; C2:1.00% cellulose+0.60%macerozyme; C3:1.40% cellulose+0.60% macerozyme; C4:1.80% cellulose+0.60% macerozyme;C5:2.20% cellulose+0.60% macerozyme; D1:0.60% cellulose+0.90% macerozyme; D2:1.00%cellulose+0.90% macerozyme; D3:1.40% cellulose+0.90% macerozyme; D4:1.80% cellulose+0.90%macerozyme; D5:2.20% cellulose+0.90% macerozyme;A1:0.60%纤维素酶+0.00%离析酶; A2:0.60%纤维素酶+0.30%离析酶; A3:0.60%纤维素酶+0.60%离;A4:0.60%纤维素酶+0.90%离析酶; B1:1.00%纤维素酶+0.00%离析酶; B2:1.00%纤维素酶+0.30%酶; B3:1.00%纤维素酶+0.60%离析酶; B4:1.00%纤维素酶+0.90%离析酶; C1:1.40%纤维素酶+0.0离析酶; C2:1.40%纤维素酶+0.30%离析酶; C31.40%纤维素酶+0.60%离析酶; C4:1.40%纤维素酶+0.90%离析酶; D1:1.80%纤维素酶+0.00%离析酶; D2:1.80%纤维素酶+0.30%离析酶; D3:1.80%纤维素酶+0.60%离析酶; D4:1.80%纤维素酶+0.90%离析酶; E1:2.20%纤维素酶+0.00%离析酶; E2:12.20图 2-2 不同酶浓度处理下得到的原生质体数量Fig.2-2 The protoplast quantity of different enzyme combination
易发生涨破现象；而渗透压过高时，原生质体易失去水分原有产量和活性。材料和酶的特性，酶解消化时间对植物组织分离原生质体有较大的间条件下，植物组织经酶解得到较少数目的原生质体；酶解时间过的活性。本实验以上述实验结果配制酶解液，使用最佳酶处理组合最适 pH,置于在离心管中,加入根尖材料。在 30r/min，25±1℃黑暗条 2h 统计一次原生质体数量和活性比例，直至 10h。如图 2-3 所示，当酶解时间较短时，组织酶解不充分，最终得到的随着酶解时间的延长，组织与酶解液有了充足的时间充分接触，得多，酶解时间达到 6h 左右时，原生质体产量达到最大值，表明此组织最佳的酶处理时间，平均每个计数格内有 58 个原生质体；若产物开始下降，可能原因是反应体系中的成分长时间与原生质体接此外振荡提供的动力长时间作用于去掉细胞壁的原生质体，也会破于玉米根尖材料，最佳的酶解时间是 6h。
【参考文献】：
期刊论文
[1]不同胚乳类型玉米籽粒超微结构及其营养品质的动态变化[J]. 马秀凤,郭强,蔺崇明,杨引福. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2016(01)
[2]几种常用病理组织固定液的比较[J]. 唐从国. 中国现代医药杂志. 2015(10)
[3]流式细胞术在植物生物学研究中应用进展[J]. 韩鸿鹏,宋纯鹏. 北方园艺. 2015(15)
[4]禾本科植物原生质体分离研究进展[J]. 彭小群,唐然,解新明. 中国农学通报. 2015(01)
[5]两种碘化丙啶染色DNA定量方法检测HL-60细胞凋亡结果的比较[J]. 徐晓雪,户乃丽,孙丽娜,孔璐. 首都医科大学学报. 2014(06)
[6]单细胞转录组高通量测序分析新进展[J]. 文路,汤富酬. 遗传. 2014(11)
[7]酶解条件对黄瓜原生质体分离效果的影响[J]. 岳备,黄玉兰,林晓婷,耿士庄,赵国峰,梁晓庆,刘延明. 安徽农业科学. 2014(19)
[8]高直链玉米淀粉的理化特性研究[J]. 李志伟,钟雨越,吴权明,王文斌,高杰,刘香香,康慧敏,郭东伟,薛吉全. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2014(07)
[9]玉米和拟南芥的原生质体制备及瞬时表达体系的研究[J]. 赵苏州,卢运明,张占路,赵杨敏,王磊. 安徽农业科学. 2014(12)
[10]玉米胚乳细胞原生质体的分离与流式纯化[J]. 郭艳萍,任成杰,李志伟,王文斌,张仁和,路海东,刘建超,张兴华,薛吉全,郭东伟. 作物学报. 2014(03)
博士论文
[1]单激光四通道流式分析仪的系统设计及性能测试方法研究[D]. 赵书涛.中国科学院研究生院（长春光学精密机械与物理研究所） 2012
[2]植物染色体BAC文库的构建与内多倍化特点的流式分析[D]. 郭东伟.西北农林科技大学 2006
硕士论文
[1]流式细胞仪液流系统设计与实现[D]. 于虎.北京信息科技大学 2015
[2]6种苜蓿属植物多倍体诱导及倍性鉴定研究[D]. 刘倩.扬州大学 2014
[3]基于Coulter原理的细胞计数微流控芯片研究[D]. 刘宇捷.西南交通大学 2012
[4]流式细胞计光学系统的研究[D]. 曹力元.长春理工大学 2009
[5]流式细胞仪DNA倍体测定在鉴别良、恶性胸腔积液的诊断价值[D]. 胡晓蕴.苏州大学 2004
本文编号：3071150
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/nzwlw/3071150.html
最近更新
教材专著
